全 文 :青蒿琥酯对内毒素诱导的一氧化氮合成的抑制作用
梁爱华 o薛宝云 o李春英 o王金华 o王 岚
k中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要 目的 }探讨青蒿琥酯对内毒素诱导的巨噬细胞一氧化氮kl合成的影响 ∀方法 }≠ 用内毒素k°≥l
或 °≥合并 Χ2干扰素作为巨噬细胞 k • uyw qzl的 合成诱导剂 o加入不同浓度的青蒿琥酯 o培养后取上清
液 o用 µ¬¨¶¶试剂测定 产生量 ∀
¤¯¥r¦小鼠肌肉注射青蒿琥酯 xs °ª#®ªp t#§p t ≅ v §o收集腹腔巨噬细胞 o测
定 °≥对细胞的 诱生能力 ∀结果 }°≥ t qs os qu Λª# °¯ p t或 Χ2干扰素 tss ∏合并 °≥ t qs os qu os qsw Λª# °¯ p t作
用于 • uyw qz细胞 o均可诱导大量 合成 ∀青蒿琥酯对 °≥或 °≥合并干扰素诱导的 合成均有明显的
抑制作用 o其抑制作用具有明显的量效关系 ∀经青蒿琥酯治疗后的小鼠 o其腹腔巨噬细胞对 °≥的反应性降低 o其
受 °≥刺激后产生的 量明显降低 ∀结论 }青蒿琥酯可降低 °≥诱导的炎性因子的产生 o减轻炎症反应 ∀
≈关键词 青蒿琥酯 ~内毒素 ~一氧化氮 ~巨噬细胞
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstltt2szy{2sw
当体内发生内毒素血症时 o内毒素可激活体内
的单核巨噬细胞和血管内皮细胞产生大量的炎性介
质 o如肿瘤坏死因子k× ƒl !白细胞介素2y和2tk2
y o2tl及一氧化氮kl等≈t ∗ v ∀近年来 o 在内
毒素引起的脏器损伤中的作用越来越引起重视 o研
究表明 o体内大量 释放是导致内毒素休克 !低血
压及多脏器功能衰竭的主要因素之一≈w ∀ °≥ 或
°≥rΧ2干扰素是 合成的强诱导剂 o可通过对细
胞内诱导型一氧化氮合酶k¬≥l基因的诱导 o而导
致 的大量合成和分泌≈x o与 u p结合形成强
氧化剂 p o p 可与 n 形成不稳定的
o很快分解形成活性氮产物 u p和活性氧
产物 p等 o过量的这些物质可造成组织损伤 ∀本
实验观察了青蒿琥酯对内毒素诱导的 合成的影
响 ∀
1 材料和方法
1 q1 动物
¤¯¥r¦小鼠 o雄性 o体重 t{ ∗ us ªo购
自中国生物制品研究所动物中心 ∀
1 q2 试剂 青蒿琥酯原料药购自桂林第二制药
厂 ~°≥k来源于 ∞¶¦«¨µ¬¦«¬¤ q¦²¯¬ttt }
wl购自美
国 ≥¬ª°¤公司 ~重组人 Χ2干扰素kƒ2Χl购自北京同
正生物公司 ∀
1 q3 巨噬细胞培养及 诱导 • uyw qz细胞
≈收稿日期 usss2sz2sz
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kv|{zs|tsl
为鼠来源的巨噬细胞系k由日本东京药科大学微生
物室惠赠l o用 ° tyws完全培养基传代培养 o实
验时用 s qux h胰酶消化 o收集细胞 o用 ° tyws
培养液洗涤 o然后将细胞浓度调成 t ≅ tsy# °¯ p t o加
入到 w{孔培养板 o每孔 s qx °¯ o于 x h ≤ u 和 vz ε
条件下培养过夜 o然后加入不同稀释浓度的青蒿琥
酯或r和 °≥或 °≥ n ƒ2Χ溶液 o每个浓度 v个复
孔 o继续培养 uw «o吸取培养上清液 o测定一氧化氮
的代谢产物亚硝酸盐浓度 ∀
1 q4 青蒿琥酯对小鼠腹腔巨噬细胞 产生的影
响
¤¯¥r¦小鼠分成 u组 o分别肌肉注射生理盐水
和青蒿琥酯 xs °ª#®ªp t#§p t ≅ w §∀于第 u天给药
的同时 o每只小鼠腹腔注射 s qu h的肝糖元 u °¯ ozu
«后 o将 ° tyws液 u °¯ 注入小鼠腹腔 o收集腹
腔渗出细胞 o调整细胞浓度为 x ≅ tsx# °¯ p t o将细胞
悬液分别加入到 w{孔板 o每孔 s qx °¯ o每只小鼠的
细胞分加 v孔 o其中两孔分别加入 °≥ t Λª# °¯ p t或
w Λª# °¯ p tk终浓度l o另一孔中不加 °≥ ∀将细胞置
vz ε 含 x h ≤ u的培养箱中培养 uw «o取上清液测
定亚硝酸盐浓度 ∀
1 q5 测定 样品 tss Λ¯ 加入到 |y孔板中 o然
后加入 µ¬¨¶¶试剂 k≥∏¯©¤±¬¯¤°¬§¨ t h o 2t2±¤³«2
·«¼¯ ·¨«¼¯ ±¨ §¬¤°¬±¨ qu≤¯ s qt h o v°w u qx h ltss
Λ¯ 与之混匀 o室温避光静置 ts °¬±o用酶标仪于波长
xws ±°测 值 o用亚硝酸钠绘制标准曲线 o计算样
品中的 含量 ∀
szz
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usst年 tt月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qtt
²√ qousst
2 结果
2 q1 青蒿琥酯对 °≥ 诱导的鼠巨噬细胞系
• uyw qz 细胞 合成的影响 用 × × 法证
明 o当青蒿琥酯浓度等于或低于 us Λª# °¯ p t时 o对巨
噬细胞无明显毒性作用 o故试验中所用的青蒿琥酯
浓度 [ us Λª# °¯ p t ∀对照孔的细胞培养上清液中未
测到明显的 产生 o°≥k来源于大肠杆菌 ∞q¦²¯¬
xx }
xlt qs或 s qu Λª# °¯ p t作用于 • uyw qz细
胞 o对其 合成有明显的诱生作用 o细胞培养上清
液中的亚硝酸盐浓度明显增高 o分别达vs qx{ o
u{ qyy Λ°²¯ #p t ∀青蒿琥酯单独作用于巨噬细胞
时 o对 合成无明显的诱生作用 ∀在有 °≥存在
时 o培养中加入一定浓度的青蒿琥酯可明显抑制
°≥诱导的 产生 o随青蒿琥酯浓度增加 o对
产生的抑制作用增强 o青蒿琥酯对 °≥ t qs Λª# °¯ p t
和 s qu Λª# °¯ p t诱导的 生成的 xs h抑制浓度
k≤xsl分别为 w q{z Λª# °¯ p t和 { qtz Λª# °¯ p t ∀结果
见表 t ∀
表 t 青蒿琥酯对内毒素诱导的巨噬细胞 合成的影响
青蒿琥酯r
Λª# °¯ p t
t qs Λª# °¯ p t内毒素
浓度rΛ°²¯#p t 抑制率r h
s quΛª# °¯ p t内毒素
浓度rΛ°²¯#p t 抑制率r h
us qs y qzs ? s qvxtl z{ qs| { qv{ ? s qv|tl zs qzx
w qs t{ qux ? s quvtl ws qvs t{ qyw ? s qtvtl vw q|{
s q{ uw qvs ? s qyytl us qxu uu q{x ? s quvtl us qu|
s qty uw qzy ? s qvxtl | qsu uw q{w ? s quztl tv qvx
s qsvu ux qvz ? t quttl tz qsu uw qyt ? s qw{tl tw qtx
s qssy uy qxu ? s qz|tl tv quz uy q|s ? s qzwtl y qtw
s vs qx{ ? s q{z u{ qyy ? s qzs
注 }≠ ξ ? σ 与 °≥单独用药比较 tl Π s qst ≈细胞对照及青蒿琥酯单独用药对 • uyw qz细胞的 合成无明显诱生作用
2 q2 青蒿琥酯对 °≥合并 Χ2干扰素诱导的鼠巨噬
细胞系 • uyw qz细胞 合成的影响 °≥
t qs os qu os qsw Λª# °¯ p t单独加入 • uyw qz细胞
诱导产生的 量分别为ku{ qsy ? s qwtl okuz qs ?
s qvyl okuy qws ? s qwtl Λ°²¯ #p t oƒ2Χtss ∏单独
诱导 • uyw qz细胞产生的 量为k{ qsw ?
s q{{l Λ°²¯ #pt ∀ • uyw qz 细胞在 Χ2干扰素
tss ∏合并 °≥ t qs os qu或 s qsw Λª# °¯ p t刺激下产
生的 量比 °≥单独刺激时增高 ∀不同浓度的青
蒿琥酯对 Χ2干扰素和 °≥联合诱导的巨噬细胞
产生具有明显的抑制作用 o其抑制作用有明显的量
效关系 o对干扰素 tss ∏合并 °≥ t qs os qu os qsw Λª
#
°¯ p t诱导的 生成的≤xs分别为u qtv ow qux o
u qy| Λª# °¯ p t o结果见表 u ∀
表 u 青蒿琥酯对内毒素合并干扰素诱导的巨噬细胞 合成的影响
青蒿琥酯
Λª# °¯ p t
t qs Λª# °¯ p t内毒素
浓度rΛ°²¯#p t 抑制率r h
s qu Λª# °¯ p t内毒素
浓度rΛ°²¯#p t 抑制率r h
s qsw Λª# °¯ p t内毒素
浓度rΛ°²¯#p t 抑制率r h
us qs tt qxz ? s quttl yy qy{ tu q|t ? s qvutl x| qvv tt q{v ? s qvztl ys q|{
w qs ty qxx ? s qxwtl xu qvt tx qu{ ? s qvztl xt q{x tv qxy ? s qvutl xx qu{
s q{ t| qu{ ? s qxwtl ww qwx t{ qzw ? s qvutl ws q|z ty qvy ? s qt|tl wy qsv
s qty uw qyu ? s qwttl u| qsy uv qv{ ? s qyztl uy qvx uu q|x ? s qvutl uw qvu
s qsvu ux qvv ? s q{ztl uz qst uv q|u ? s qyxtl uw qyx ut qyx ? s q{ytl u{ qx|
s qssy uz qvx ? s qvytl ut qus ux qxw ? s q{ytl t| qxx uv q{t ? t qswtl ut qwz
s vw qzt ? s qut vt qzw ? s qut vs qvu ? s qut
注 }≠ ξ ? σ 表中每个实验组均加入 ƒ2Χtss ∏ ≈ 与 °≥合并 ƒ2Χ比较 tl Π s qst
2 q3 青蒿琥酯对小鼠腹腔巨噬细胞 产生的影
响 生理盐水对照组小鼠的腹腔巨噬细胞的自发性
产生量k无 °≥刺激的条件下产生的 量l很
低 o而在有 °≥kt ow Λª# °¯ p tl刺激时 o 产生量明
显增高k Π s qstl ∀
¤¯¥r¦小鼠肌肉注射青蒿琥酯
xs °ª#®ªp t#§p t o连续 v §后 o收集小鼠腹腔巨噬细
胞 o测定在有或无 °≥刺激的条件下的 产生量 o
以了解巨噬细胞对 °≥刺激的反应 ∀结果显示 o青
蒿琥酯用药后对小鼠腹腔巨噬细胞 产生无明显
诱生作用 o其腹腔巨噬细胞在无 °≥刺激时的
tzz
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产生量很低 ∀青蒿琥酯治疗组小鼠的腹腔巨噬细胞
对 °≥的反应性降低 o受 °≥刺激后产生的 量
明显降低k与生理盐水对照组比较 Π s qstl ∀结果
提示 o青蒿琥酯可降低 °≥刺激巨噬细胞时炎性因
子的产生 o减轻内毒素含量增高时所诱导的炎症反
应 ∀结果见表 v ∀
表 v 青蒿琥酯肌肉注射对
°≥诱导的小鼠腹腔巨噬细胞 产生的影响
组别
°≥r
Λª# °¯ p t
浓度r
Λ°²¯#p t
抑制率r
h
生理盐水 s u qyv ? s qtu
t y qyz ? t q{w
w z q{y ? u qxu
青蒿琥酯 s u qux ? s qu|
t v qut ? s q|wtl xt q|
w v q{z ? t qz{tl xs q{
注 }≠ ξ ? σ ν z ≈与生理盐水组中加同浓度的 ΛΠΣ组比
较 t) Π s qst
3 讨论
细菌内毒素有很高的致死性 o严重的革兰氏阴
性细菌感染的病人 o尽管使用了强力高效的抗菌素
以用于控制菌血症 o但病人的死亡率仍然很高 o其原
因是由于细菌大量繁殖时以及被抗菌素杀死或裂解
时 o有大量的内毒素释放至体液中 o可能造成或加重
内毒素血症 ∀内毒素2炎症介质级联反应是造成广
泛组织损伤的重要环节 o因此抑制炎症介质如
× ƒΑo等的产生可能有利于病人的预后 ∀
本研究利用鼠来源的巨噬细胞系 • uyw qz
细胞 o在体外培养系统中探讨了青蒿琥酯对内毒素
或内毒素合并干扰素诱导的 产生的影响 ∀结果
表明 o内毒素单独使用或与干扰素联合应用于 •
uyw qz细胞 o均可激活巨噬细胞 o诱导其产生大量的
∀青蒿琥酯对内毒素或内毒素合并干扰素诱导
的巨噬细胞 合成有明显的抑制作用 o随青蒿琥
酯剂量增高 o抑制作用增强 ∀给
¤¯¥r¦小鼠注射青
蒿琥酯后 o可降低动物腹腔巨噬细胞对内毒素的反
应性 o使巨噬细胞受内毒素刺激时产生的 明显
减少 ∀
对机体有双重作用 o一方面它是防御微生物
感染和肿瘤细胞侵袭的重要介质 o另一方面大量的
可通过与超氧阴离子结合成过氧化亚硝基阴离
子而对器官组织造成损害≈y ∀在内毒素引起的休克
和多脏器功能衰竭中 o 是重要的炎性介质之一 o
阻止 的大量释放可防止其造成的低血压及减轻
其导致的组织氧化性损伤 ∀本研究结果提示 o青蒿
琥酯可明显抑制内毒素引起的炎症介质 的产
生 o可能对内毒素引起的组织损伤会起到一定的保
护作用 ∀
≈参考文献
≈t ×µ¤¦¨¼ o
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o¯ ²ºµ¼ ≥ ƒ o ·¨¤¯ q≥«²¦®¤±§×¬¶¶∏¨ ±∏µ¼
±§∏¦¨§¥¼ ¦¨²°¥¬±¤±·∏°¤± ≤¤¦«¨ ¦·¬±q≥¦¬¨±¦¨ ot|{y ouvw }
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¨√¨¯ ©¨¯ ¦¨·¶≥∏¶¦¨³·¬¥¯¨≥·¤·∏¶²©·«¨ ²¶··² ∞±§²·²¬¬±¤±§2
tr·∏°²µ¨¦µ²¶¬¶ƒ¤¦·²µq°°∏±²¯ ot||u otw{ }vx|y q
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³²·¨±¶¬²±q¤¥ ≤ ¬¯± §¨ot||u otus }usx q
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° ±¨·≥·µ¤·¨ª¬¨¶©²µ≥ ³¨·¬¦≥«²¦®
¤¶¨§²± °µ²³²¶¨§ ¦¨«¤±¬¶°¶
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≈x × ·¨¶∏¬²§¤o ƒ∏°¬² °¤±²q ⁄¬©©¨ µ¨±¦¨¶¬± ¬·µ¬¦ ¬¬§¨ ≥¼±2
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≈y 孔宪涛 q一氧化氮与微生物感染 q国外医学#微生物学分册 o
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Ινηιβιτορψ Εφφεχτ οφ Αρτεµιν ον Ενδοτοξιν2ινδυχεδ Νιτριχ Οξιδε Σψντηεσισ
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[ Αβστρυχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ©¨©¨ ¦·²© µ·¨°¬± ²± °≥2¬±§∏¦¨§ ±¬·µ¬¦²¬¬§¨ ¶¼±·«¨¶¬¶¬±
°¤¦µ²³«¤ª¨¶q Μετηοδ : ≠ ¬·µ¬·¨ ²¬¬§¨ kl ³µ²§∏¦·¬²± ²© • uyw qz ¦¨¯¯¶º¤¶¬±§∏¦¨§¥¼ °≥ ²µ°≥ ¬±
¦²°¥¬±¤·¬²± º¬·«¬±·¨µ©¨µ²±2ΧkƒΧl ¬±·«¨ ³µ¨¶¨±¦¨ ²µ¤¥¶¨±¦¨ ²© µ·¨°¬±q ׫¨ ¤°²∏±·²© ¬±·«¨ ¶∏³¨µ2
±¤·¤±·²© • uyw qz ¦¨¯¯¶º¤¶§¨·¨¦·¨§ º¬·« µ¬¨¶¶µ¨¤ª¨ ±·q
¤¯¥r¦°¬¦¨ º µ¨¨ ¬±¨¦·¨§ º¬·« µ·¨°¬± k¬°l
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第 uy卷第 tt期
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∂ ²¯ quy o²qtt
²√ qousst
xs °ª#®ªp t#§p t ≅ v§o¤±§¬±·µ¤³¨µ¬·²±¨ ¤¯ °¤¦µ²³«¤ª¨¶º µ¨¨ ¦²¯¯¨ ¦·¨§·² §¨·¨¦··«¨ °≥2¬±§∏¦¨§ ³µ²§∏¦2
·¬²±q Ρεσυλτ : °≥ t qs os qu Λª# °¯ p t ²µƒ2Χtss∏n °≥ t qs os qu os qsw Λª# °¯ p t ¦²∏¯§¬±§∏¦¨§¤ ¤¯µª¨
¤°²∏±·²© ¶¼±·«¨¶¬¶²© • uyw qz ¦¨¯¯¶qµ·¨°¬±¶«²º §¨¤¶¬ª±¬©¬¦¤±·¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨ ¦·²± °≥ ²µƒ2Χn
°≥ 2¬±§∏¦¨§ ³µ²§∏¦·¬²±¬± ¤§²¶¨ §¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±±¨ µq©·¨µ·µ¨¤·° ±¨·º¬·« µ·¨°¬±o·«¨ µ¨¶³²±¶¨ ²©
¤¯¥r
¦°¬¦¨ ·² °≥ º¤¶µ¨§∏¦¨§o º«¬¦« º¤¶¶«²º §¨¥¼ ¤ §¨¦µ¨¤¶¨ ¬± ³µ²§∏¦·¬²± ²©¬±·µ¤³¨µ¬·²±¨ ¤¯ °¤¦µ²³«¤ª¨¶
¬±§∏¦¨§¥¼ °≥ qΧονχλυσιον : µ·¨°¬±¦²∏¯§µ¨§∏¦¨ °≥2¬±§∏¦¨§³µ²§∏¦·¬²± ²©¬±©¯¤°°¤·²µ¼©¤¦·²µ¶µ¨¶∏¯·¬±ª¬±
·«¨ ¬±«¬¥¬·¬²± ²©¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ©¨©¨ ¦·¶q
[ Κεψ ωορδσ] ¤µ·¨°¬±~ ±¨§²·²¬¬±~±¬·µ¬·¨ ²¬¬§¨ ~ °¤¦µ²³«¤ª¨
≈责任编辑 方文贤
益心康胶囊对大鼠心肌线粒体结构及
功能损伤的保护作用
韩 玲t o陈可冀u
k t q军事医学科学院 放射医学研究所 o北京 tss{xs ~
u q中国中医研究院 西苑医院 o北京 tsss|tl
≈摘要 目的 }观察了异丙肾上腺素k≥l对大鼠心肌线粒体结构和功能的损伤 o评价益心康胶囊kvsvl对损
伤的保护作用 ∀方法 }≥ 损伤 o分离心肌线粒体 o测定磷脂酶 uk°ul活性 !膜磷脂k°l含量 !膜脂流动性
kƒ l o≤¤u n2× °¤¶¨ 活性 !线粒体呼吸功能及心肌组织高能磷酸化合物 ∀结果 }≥ 可导致线粒体产生严重损伤 o
表现为 °u激活 o°含量减少 ~ƒ 降低 ~≤¤u n2×°¤¶¨ 活性降低 ~线粒体呼吸功能降低 ~心肌组织高能磷酸化合
物明显降低 ∀ vsv预先口服给药可明显改善线粒体的损伤 ∀表现为 °u 活性降低 o °含量增加 ~明显改善
ƒ ~保护线粒体 ≤¤u n2×°¤¶¨ 活性 ~通过加快 ¶态呼吸速率 !改善 ⁄°r 比值 !恢复降低的呼吸控制率而保护线
粒体呼吸功能 ∀结论 } vsv对 ≥ 所致的线粒体结构和功能损伤具有明显的保护作用 ∀
≈关键词 益心康胶囊 ~线粒体 ~磷脂酶 u ~膜脂流动性 ~呼吸功能
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstltt2szzw2sx
线粒体是细胞能量合成的重要场所 o也是影响
细胞内钙稳态及产生自由基的场所 ∀其结构的损伤
势必引起能量代谢的障碍 ∀心肌富含线粒体 o其膜
结构中以磷脂为主 o磷脂结构及组成的正常与否 o直
接影响到线粒体的结构和功能 ∀在自由基或缺血缺
氧损伤中 o磷脂极易降解而使得膜脂成分改变 o引起
膜脂流动性改变 o进而影响到与膜结合的膜蛋白或
膜酶活性 o导致生物膜的功能障碍 ∀
本实验利用异丙肾上腺素损伤大鼠心肌模型 o
观察了对心肌线粒体膜的损伤作用 o并观察了具有
抗心肌缺血及再灌注损伤作用的中药复方 ) ) ) 益心
≈收稿日期 usss2tt2tx
康胶囊≈t ∗ v 对线粒体膜结构及功能损伤的保护作
用 o以期探讨其心肌保护作用的机理 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料
1 q1 q1 动物 • ¬¶·¤µ大鼠 o雄性 o体重 uxs ∗ u{s ª∀
由军事医学科学院动物中心提供 ∀
1 q1 q2 药物 益心康胶囊k由丹参 !川芎 !黄芪等
组成 o简称 vsvl o上海药物研究所制药厂生产 o批
号 |xsyvsv o制剂为棕色粉末状物 o制剂标示量每粒
s qw ª∀实验时用水溶解配成 xs °ª# °¯ p t浓度 ∀
1 q1 q3 试剂 ⁄° o⁄° o×° o°≤ 均为 ≥¬ª°¤产
品 ∀其余试剂均为国产分析纯 ∀磷脂测定试剂盒 }
德国
¤√¤µ¬¤公司产品 ∀
vzz
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