全 文 ：麝香糖蛋白成分对大鼠中性白细胞
血小板活化因子生成及细胞内钙水平的影响
王文杰 o周龙恩 o白金叶 o程桂芳 o朱秀媛
k中国医学科学院 中国协和医科大学 药物研究所 o北京 tsssxsl
≈摘要  目的 }观察麝香2t对大鼠中性白细胞血小板活化因子生成及细胞内钙水平的影响 ∀方法 }采用体外
温孵系统 o以同位素参入法测定 °„ƒ 生成和乙酰转移酶活性 o以 ƒ∏µ¤2u标记荧光法测定细胞内游离钙水平 ∀结
果 }麝香2t在 t ∗ tss Λª# °¯ p t浓度下可明显抑制中性白细胞 °„ƒ生成 !乙酰转移酶活性和细胞内游离钙水平的升
高 ∀结论 }麝香2t对中性白细胞 °„ƒ生成 !乙酰转移酶活性和胞内钙水平的抑制可能涉及其部分抗炎作用机制 ∀
≈关键词  麝香 ~中性白细胞 ~血小板活化因子 ~乙酰转移酶 ~细胞内钙
≈中图分类号 • u{x qx ≈文献标识码 … ≈文章编号 tsst2xvsukusssltu2szvv2sw
麝香是一珍贵中药材 ∀以往实验证明 }麝香水
溶性成分在多种动物模型上有抗炎作用≈t  ∀中性白
细胞是宿主防御系统的组成部分 o又是主要的炎性
细胞 o在炎症过程中起关键作用 ∀血小板活化因子
k³¯¤·¨¯ ·¨2¤¦·¬√¤·¬±ª©¤¦·²µo °„ƒl是一种磷脂类炎性
介质 o在炎症中产生 o可引起中性白细胞的趋化 o脱
颗粒 o超氧阴离子和其它炎性介质的生成与释放 o以
及血管通透性增加等炎症过程的各种反应 ∀ °„ƒ与
其受体结合 o通过 Š 蛋白偶联引起细胞的功能变
化 o而细胞内游离钙是这个过程中的一个重要信使 ∀
本研究拟观察从麝香水提物分离出的抗炎有效成分
麝香2t对大鼠中性白细胞血小板活化因子生成及细
胞内钙水平的影响 ∀
1 材料和方法
111 材料
11111 动物 • ¬¶·¤µ大鼠 o体重 uxs ∗ vss ªo雌雄
兼用 o由中国医学科学院动物所繁育场提供 ∀
11112 药物和试剂 麝香由中国药材公司四川省
中药材公司提供 ∀经我所宋万志教授鉴定 o为林麝
Μοσχηυσ βερεζοϖσκιι ƒ¯¨ µ²√香囊分泌物 ∀研磨成粉 o
经乙醚 o乙醇提取后 o以水冷渗 o提取液冷冻干燥 o冻
干粉以水复溶 o上 ≥ ³¨«¤§¨ ¬ Š2ux柱 o蒸馏水洗脱 o收
集第一色带 o冷干备用 o称麝香2t≈u  ∀在小鼠巴豆油
耳炎症模型 Œ⁄xs约为 vs °ª#®ªp t o故体外用相
≈收稿日期  t|||2tu2ut
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv|vzs{wul
应 t ∗ tssΛª# °¯ p t浓度 ∀ °„ƒ o溶血2°„ƒ k ¼¯¶²2
°„ƒl o乙酰辅酶 „k乙酰 ≤²„l o二硫苏糖醇k⁄× ×l o
购自美国¶¬ª°¤公司 ∀≈v ‹ 2乙酰 ≤²„购自美国 ⁄∏
°²±·公司 ∀≈v ‹ 2乙酸钠购自原子能研究院 ∀u ox2
二苯基恶唑k°°’l购自瑞士 ƒ ∏¯®¤公司 ∀t ow2双kx2
苯基恶唑基2ul苯k°’°’°l购自上海试剂一厂 ∀高
效硅胶薄层板购自烟台地区工业研究所 ∀其他试剂
由国内化工厂生产 o均为分析纯 ∀
11113 仪器 ≠¤°¤·² …×2ux型震荡恒温水浴 o‹¬2
·¤¦«¬ƒ2wsts 型双波长荧光分析仪为日本生产 ∀
≥²±¬³µ¨³txs 超声细胞破碎仪为英国生产 ∀ ƒ²µ°¤
≥¦¬¨±·¬©¬¦vtyw ≤ ’u温孵箱 o…¨ ¦®°¤± ≥|{ss液闪计
数仪为美国生产 ∀ ⁄w2s q{自动平衡微型离心机
为北京医用离心机厂生产 ∀
112 方法
11211 中性白细胞悬液的制备≈v  大鼠在乙醚麻
醉下 o于右胸肋间注入 t h角叉菜胶 s qu °¯ ow «后
断头处死 o吸取胸腔渗出液 o冰浴保存 o加含 s qzx h
‘‹w≤¯的 tz °°²¯#p t ×µ¬¶2‹≤¯缓冲液k³‹ € z qul
除去混入的红细胞 ou sssµ# °¬±p t离心 x °¬±o沉淀
的中性白细胞以适当生理溶液洗涤及制成悬液 ∀
11212 中性白细胞 °„ƒ生成的测定≈w  中性白细
胞以无钙 ‹¤±®. ¶液ks qyx°°²¯#pt ‘¤u ‹°’w os qyw
°°²¯#pt Ž‹u°’w ow qyx °°²¯ #pt Ž≤¯otvu qxy
°°²¯#pt ‘¤≤¯ouv q{w °°²¯#pt ×µ¬¶o| qys °°²¯#
pt葡萄糖 o³‹z qwl制成 u qx ≅ tsz 细胞r °¯ 悬液 ∀
取悬液 t °¯ o加药物或溶剂 o加 tws °°²¯#pt ≤¤≤ u¯
#vvz#
第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtu
⁄¨ ¦qousss
ts Λ¯ o加v ‹2乙酸钠 us Λ¯ k含 tt Λ≤¬l o均设两个复
管 ∀vz ε 水浴温孵 ts °¬±o加 t °°²¯#pt „uvt{z t
Λ¯ o继续温孵 ts °¬±o加终止液k甲醇2氯仿2乙酸 € uΒ
tΒs qswlv °¯ ∀上述反应液加氯仿 t °¯ o蒸馏水 t
°¯ o振摇 ou sssµ#°¬±p t离心 x °¬±o取氯仿相 o氮气
吹干 ∀残渣加复溶液k氯仿2甲醇 € {sΒuslws Λ¯ o在
高效硅胶薄板上点样 o同板点 °„ƒ 标准 o用展开剂
k氯仿2甲醇2乙酸2水 € xsΒvsΒ{Βyl层析 o碘显色 ∀将
相应于标准品部位刮入闪烁瓶 o加闪烁液 x °¯ o在液
闪计数仪上计数 ∀
11213 ¼¯¶²2°„ƒ2乙酰 ≤²„2乙酰转移酶活性测定≈w 
中性白细胞以 ‹∞°∞≥液kts °°²¯#pt ‹∞°∞≥ o
s qux °°²¯ # pt蔗糖 ot °°²¯ # p t二硫苏糖醇 o
³‹z qvl制成 u qx ≅ tsz 细胞r °¯ 悬液 ∀以超声细胞
破碎仪将悬液制成匀浆 ∀取匀浆 t °¯ o加药物或溶
剂 o加 tws °°²¯#pt ≤¤≤ u¯ ts Λ¯ otx °°²¯#p t ¼¯¶²2
°„ƒ u Λ¯ ox °°²¯ # p t乙酰 ≤²„ u s Λ¯ k含 s qu Λ¯
v‹2乙酰 ≤²„ l o均设两个复管 ∀vz ε 水浴温孵
vs °¬±o加终止液 v °¯ ∀按 11212 所述方法提取和
测定 °„ƒ含量 ∀
11214 中性白细胞内游离钙水平的测定≈x  中性
白细胞以 ‹…≥≥2…≥„缓冲液k‘¤≤¯w qs ªoŽ≤¯s quu
ªo ≤¤≤ u¯ s qsyz ªo ª≤ u¯ s qs| ªo ‹∞°∞≥ t qt ªo
…≥„ s qsx ªo加双蒸水至 xss °¯ o³‹ z qwl o悬浮 o调
节为t ≅ tsz细胞r °¯ o加入适量的药物k⁄ ≥’ 
s qx h l o再加入 t°°²¯#pt ƒ∏µ¤2ur„ ° v Λ¯ ovz ε
水浴振荡温孵 wx °¬±后 o室温放置 tx °¬±o离心沉
淀细胞 o用 ‹…≥≥2…≥„ 缓冲液洗涤细胞外残存的
ƒ∏µ¤2ur„ ° o共洗两次 o再将白细胞悬浮于 ‹…≥≥2
…≥„缓冲液中 ∀取负载 ƒ∏µ¤2ur„ °的细胞悬液 u qs
°¯ o加至 ‹¬·¤¦«¬2wsts型荧光分光光度计的比色池
中 o并使细胞保持 vz ε 恒温及悬浮状态 o测定时采
用激发波长 vws ±°k光栅 x ±°l o发射波长 xss ±°
k光栅 ts ±°l o扫描速度 tus ±°#°¬±p t o在测定静息
状态的荧光强度后 o再分别测定加入刺激剂kt ≅
tsp w °²¯#pt© ° us Λ¯l ots h ×µ¬·²± ¬2tss us Λ¯ o
xs s °°²¯ # p t ∞Š× „ k v °²¯ # p t ×µ¬¶调至 ³‹
{ qzl tss Λ¯ 后的荧光强度 ∀用计算机程序 ³µ²ªµ¤°
©²µ≤¤u n ° ¤¨¶∏µ¨ ° ±¨·kƒ2wstsl±∏¬± u ƒ∏µ¤Œ±§²¯ 处
理实验数据 ∀计算出静息状态和加刺激物后细胞内
钙离子浓度 ∀
2 结果
211 麝香2t对中性白细胞 °„ƒ生成的影响
中性白细胞悬液与终浓度为 t ots otss Λª# °¯ p t
的麝香2t或对照溶剂温孵后 o给药组 °„ƒ 生成量分
别比对照组减少 tv qw h ow| qw h和 xv qw h k图 tl ∀
图 t 麝香2t对大鼠中性白细胞 °„ƒ生成的影响
ν € v 与对照组比较 3 Π s qsx
212 麝香2t对中性白细胞乙酰 ≤²„ 依赖的乙酰转
移酶活性的影响
中性白细胞匀浆与终浓度为 t ots otss Λª# °¯ p t
的麝香2t或对照溶剂温孵后 o给药组 °„ƒ 生成量分
别比对照组减少 vx qt h owx q| h和 t{ qu h o表明麝
香2t可明显抑制乙酰 ≤²„ 依赖的乙酰转移酶的活
性k图 ul ∀
图 u 麝香2t对大鼠中性白细胞乙酰转移酶活性的影响
ν € w 与对照组比较 3 Π s .sx 3 3 Π s qst
213 麝香2t对中性白细胞胞内游离钙水平的影响
中性白细胞悬液与终浓度为 t ots otss Λª# °¯ p t
的麝香2t或对照溶剂温孵后 o给药组胞内游离钙水
平分别比对照组降低 ty qv h ouw qz h和 vz q{ h o表
明麝香2t可明显抑制刺激剂引起的中性白细胞胞内
游离钙水平的升高k图 vl ∀
#wvz#
第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtu
⁄¨ ¦qousss
图 v 麝香2t对 © °引起大鼠中性
白细胞内游离钙水平升高的影响
ν € x 与对照组比较 3 Π s .sx 3 3 Π s qst
3 讨论
血小板活化因子k°„ƒl是一个 t位以醚链连结
长碳链 !u位连结乙酰基 !v位连结磷酸胆碱的甘油
酯 o在体内有两条合成途径 ∀其一是膜磷脂经 °„u
作用水解掉 u位的花生四烯酸残基 o生成溶血 °„ƒ
k¯ ¼¶²2°„ƒl o再经乙酰辅酶 „ 依赖的乙酰转移酶作
用 o将 u位羟基乙酰化 o生成 °„ƒ o故称之为去酰化2
再酰化途径 o又称为再修饰kµ¨ °²§¨ ¬¯±ªl途径 ∀其二
是从烷基甘油磷酸开始 o经乙酰转移酶 !磷酸胆碱转
移酶等作用 o最终合成 °„ƒ o故称之完全合成k§¨ ±²2
√²l途径 ∀前一种途径与炎症密切相关 o后一种途径
在于维持正常的生理功能 ∀本研究结果证明麝香2t
可抑制中性白细胞 °„ƒ 的生成及乙酰辅酶 „ 依赖
的乙酰转移酶的活性 o可能是其抗炎作用的机制之
一 ∀
从研究结果看 o麝香2t对 °„ƒ生成及乙酰转移
酶活性的抑制作用 o并不完全呈剂量依赖关系 ∀这
是由于再修饰途径中 o°„ƒ 生成受 °„u 和乙酰转
移酶两种酶活性的影响 o我们在前文中曾以花生四
烯酸
释放为指标观察到麝香2t在 tss Λª# °¯ p t浓度下对
°„u活性有轻度增强 o可能部分掩盖了其对乙酰转
移酶的抑制作用 ∀另外 o麝香2t在 t Λª# °¯ p t浓度
下 o对乙酰转移酶活性的抑制率明显高于对 °„ƒ 生
成的抑制率 o可能是由于前者采用的是细胞匀浆 o后
者采用的是细胞悬液 o而麝香2t是分子量较大的水
溶性糖蛋白 o在短时间内透过细胞膜较少 o胞内浓度
低于胞外浓度之故 ∀
由文献可知 o中性白细胞胞内游离钙水平的升
高可引起乙酰辅酶 „依赖的乙酰转移酶的激活 ∀本
研究结果证明麝香2t可明显抑制胞内游离钙水平的
升高 o与其可抑制乙酰转移酶的活性相一致 ∀至于
二者抑制率间不完全平行 o可能由于实验条件和所
用刺激剂不同 o另外 o也可能对乙酰转移酶活性的抑
制还有其它机制参与 ∀
≈参考文献 
≈t  朱秀媛 o王文杰 o徐桂芳 o等 1 麝香的药理研究 µ 麝香及其有
效成分的抗炎作用 1 药学学报 ot|{{ ouvkyl }wsy1
≈u  柳雪枚 o李虹奇 o肖 宣 o等 1 天然麝香抗炎蛋白质的研究 ´
 ˜2¤2t分离纯化及其部分性质的鉴定 1 动物学报 ot||u ov{
kvl }vsu1
≈v  ≠ ∏¨ × o∂¤µ°¤⁄ • o°²º¨¯¯ • ≥ q∞©©¨ ¦·¶²©°µ²·¨¬± ⁄¨ ©¬¦¬¨±¦¼
²±·«¨  ·¨¤¥²¯¬¶° ²© „µ¤¦«¬§²±¬¦„¦¬§¥¼ • ¤·°¯ ∏¨µ¤¯ °²¯¼°²µ2
³«²±∏¦¯ ¤¨µ¨∏®²¦¼·¨¶q…¬²¦«¬° …¬²³«¼¶„¦·¤ot|{v ozxt ovvu q
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨ ¦·¶²© ∏¶® ª¯∏¦²³µ²·¨¬± ²± ³¯¤·¨¯ ·¨¤¦·¬√¤·¬±ª©¤¦·²µk°„ƒl
³µ²§∏¦·¬²± ¤±§·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©¦¼·²¶²¯¬¦©µ¨¨ ≤¤u n ¬± ³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ¯ ∏¨®²¦¼·¨¶²©µ¤·q Μετηοδσ: „±¬±
√¬·µ²¬±¦∏¥¤·¬²± ¶¼¶·¨° º¤¶∏¶¨§o³µ²§∏¦·¬²± ²©°„ƒ ¤±§¤¦·¬√¬·¼ ²©¤¦¨·¼¯ ·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§¥¼¬¶²·²³¨
#xvz#
第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtu
⁄¨ ¦qousss
¬±¦²µ³²µ¤·¬²± o·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©¦¼·²¶²¯¬¦©µ¨¨≤¤u n º¤¶ ∏´¤±·¬·¤·¨§∏¶¬±ª·«¨ ©¯∏²µ¨¶¦¨±·≤¤u n ¬±§¬¦¤·²µƒ∏µ¤2
u qΡεσυλτσ:  ∏¶®2t ¤·¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©t ∗ tss Λª# °¯ p t ¦¤± ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¬±«¬¥¬·³µ²§∏¦·¬²± ²© °„ƒ o¤¦·¬√¬·¼ ²©
¤¦¨·¼¯ ·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ ¤±§·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ²©¦¼·²¶²¯¬¦≤¤u n ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¬± ³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ¯¨ ∏®²¦¼·¨¶²©µ¤·qΧον2
χλυσιον : °¤µ·²© ° ¦¨«¤±¬¶°¶∏±§¨µ¯¼¬±ª¤±·¬¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ¤¦·¬²± ²©  ∏¶®2t¬¶·«µ²∏ª«¬±«¬¥¬·¬±ª·«¨ ¶¼±·«¨¶¬¶²©
°„ƒ ¤±§·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ²©¦¼·²¶²¯¬¦≤¤u n¯¨ √¨¯ q
[ Κεψ ωορδσ]  ∏¶®~³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯¨ ¤µ¯ ∏¨®¦¼·¨ ~°„ƒ ~¤¦¨·¼¯ ·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ ~¦¼·²¶²¯¬¦©µ¨¨ ≤¤u n
≈责任编辑 方文贤 
东亚钳蝎毒抗癌多肽对 ‹uu荷瘤
小鼠免疫调节作用
杨建斌t o李晓雯u o董伟华u o孔天翰u o宋红霞t o郑相予u o刘桂亭u
kt q长治医学院 附属医院 o山西 长治 swysss ~u q河南医科大学 o河南 郑州 wxssxul
≈摘要  目的 }探讨东亚钳蝎毒抗癌多肽k„°… ∂ l对 ‹uu荷瘤小鼠免疫功能的影响 ∀方法 }采用  × × 比色法
和血清溶血素测定法检测了经 „°… ∂ 及其与 x2ƒ∏联合用药治疗的 ‹uu荷瘤小鼠的细胞及体液免疫功能 ∀结果 }
„°… ∂ 组及 „°… ∂ 与 x2ƒ∏联用组的 ‘Ž细胞活性明显增高k Π s qsxl o≤²±„ 诱导的淋巴细胞转化指数明显增
高k Π s qsx ~Π s qstl o与 x2ƒ∏组比较差异显著k Π s .sx ; Π s qstl ∀ ⁄‘≤…诱导的皮肤迟发型超敏反应表明 o
„°… ∂ 组及其与 x2ƒ∏联用组的耳重差显著增高k Π s .st ; Π s qsxl o与 x2ƒ∏组比较也有显著差异k Π s qstl ∀
x2ƒ∏组的白细胞数最低 o与 „°… ∂ 组及 „°… ∂ 与 x2ƒ∏联用组比较有显著差异性k Π s .sst ; Π s qsxl o„°…2
 ∂ 组的半数溶血值k‹≤xsl显著增高k Π s qstl ∀结论 }„°… ∂ 可显著增强 ‹uu荷瘤小鼠免疫功能 o减低肿瘤或
化疗所致的免疫功能低下 ∀
≈关键词  蝎毒 ~移植肿瘤 ~免疫系统
≈中图分类号 • u{x qx ≈文献标识码 … ≈文章编号 tsst2xvsukusssltu2szvy2sw
全蝎作为名贵的中药其抗肿瘤作用已见诸多报
道≈t  ∀蝎毒k¶¦²µ³¬²± √ ±¨²°l是成年活蝎受激惹时
尾节毒囊分泌的毒液 o其具有包括抗癌作用的多种
药理作用≈t  ∀东亚钳蝎毒抗癌多肽 k „±·¬¦¤±¦¨µ
³²¯¼³¨ ³·¬§¨ ©µ²° …∏·«∏¶¤µ·¨±¶¬¬∂ ±¨²° o„°… ∂ l
是从河南马氏钳蝎毒中新近分离出的一种成分 o我
们已观察到其对食管癌细胞 ∞¦¤2ts|细胞和宫颈癌
细胞 ‹¨¯¤细胞的毒性作用≈u  o以及与 x2ƒ∏对 ‹uu荷
瘤小鼠的联合抗肿瘤作用≈v  ∀本文进一步探讨其对
‹uu荷瘤小鼠的免疫功能的影响 ∀
1 材料
1 q1 主要试剂 „°… ∂ }源于河南东亚钳蝎 ∀由
≈收稿日期  usss2sv2s|
≈基金项目  河南省/九五0科技攻关项目k|xtusstsul
河南医科大学生物毒素中心进行采毒k电脉冲法l !
分离 !鉴定 !并提供 „°… ∂ ∀冻干粉 }xsΛªr支 o
p us ε 低温保存 o使用时用生理盐水溶解 o配成所
需浓度 ∀刀豆蛋白 „k¦²±¦¤±¤√¤¯¬± „ o ≤²±„l }美国
≥¬ª°¤公司产品 ∀二硝基氯苯k§¬±¬·µ²¦«¯²µ²¥¨ ±½²±¨ o
⁄‘≤…l }北京化工二厂产品 ∀绵羊红细胞k¶«¨ ³¨
µ¨§¥¯²²§¦¨¯¯ o≥• …≤l }羊血由河南省实验动物中心
提供 o压积 ≥• …≤ 自行制备 ∀豚鼠血清k补体l }豚
鼠购自河南省实验动物中心 o豚鼠血清自行制备 ∀
1 q2 细胞株 Žxyu 细胞株 }为人红白血病细胞
株 o‘Ž细胞的靶细胞株 o由河南省肿瘤研究所刘雄
伯研究员馈赠 ∀小鼠腹水型肝癌 ‹uu瘤株 o由河南
省医学科学研究所引进 ∀
1 q3 动物 昆明种小鼠 o雄性 oy ∗ {周龄 okus ? ul
ªo由河南省实验动物中心提供 ∀
#yvz#
第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtu
⁄¨ ¦qousss