全 文 ：麝香糖蛋白成分对白细胞介素2{
激活的大鼠中性白细胞功能的影响
王文杰 o白金叶 o程桂芳 o朱秀媛
k中国医学科学院 中国协和医科大学 药物研究所 o北京 tsssxsl
≈摘要 目的 }观察麝香糖蛋白成分麝香2t对白细胞介素2{k2{l激活的大鼠中性白细胞某些功能 o包括超氧阴
离子产生和溶酶体酶释放的影响 ∀方法 }采用大鼠中性白细胞体外温孵系统 ∀用细胞色素 ≤ 还原法测定超氧阴离子
的产生量 ∀以酚酞葡糖醛酸和 ¬¦µ²¦²¦¦∏¶¼¶²§¨¬®·¬¦∏¶为基质的酶反应法测定 Β2葡糖苷酸酶和溶菌酶的释放量 ∀结
果 }与对照组比较 o麝香2t在 t ∗ tssΛª#p t终浓度下 o可使中性白细胞超氧阴离子生成量增加 |t qz h ∗ u|t h o可使
Β2葡糖苷酸酶释放量降低 u qu h ∗ x{ qt h o使溶菌酶释放量降低 v q| h ∗ v| q{ h ∀结论 }麝香2t对 2{激活的大鼠中
性白细胞的功能有明显影响 ∀抑制溶酶体酶释放可能是麝香抗炎作用机制之一 ∀
≈关键词 麝香 ~中性白细胞 ~超氧阴离子 ~Β2葡糖苷酸酶 ~溶菌酶
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstlst2ssxs2sw
麝香是一珍贵中药材 ∀以往实验证明 }麝香水
溶性成分在多种动物模型上有抗炎作用≈t ∀中性白
细胞是宿主防御系统的组成部分 o又是主要的炎性
细胞 o在炎症的发展过程中起关键作用 ∀白细胞介
素2{k2{l是由多种细胞表达的细胞因子 o为重要
的炎性介质之一 ∀对中性白细胞有很强的趋化作
用 o并可刺激中性白细胞使其发生一系列功能变化 o
如产生超氧阴离子和其它活性氧代谢物 o脱颗粒并
释放溶酶体酶等 ∀本研究采用中性白细胞体外温孵
系统 o观察麝香2t 对 2{ 刺激下白细胞功能的影
响 ∀
1 材料和方法
111 材料
11111 动物 • ¬¶·¤µ大鼠 o体重 uxs ∗ vss ªo雌雄
兼用 o由中国医学科学院动物所繁育场提供 ∀
11112 药物和试剂 麝香由中国药材公司四川省
中药材公司提供 ∀经我所宋万志教授鉴定 o为林麝
Μοσχηυσ βερεζοϖσκιι ƒ¯¨ µ²√香囊分泌物 ∀研磨成粉 o
经乙醚 !乙醇提取后 o以水冷渗 o提取液冷冻干燥 o冻
干粉以水复溶 o上 ≥ ³¨«¤§¨ ¬ 2ux柱 o蒸馏水洗脱 o收
集第一色带 o冷干备用 o称麝香2t≈u ∀在小鼠巴豆油
耳炎症模型 ⁄xs约为 vs °ª# ®ªp t o故体外用
≈收稿日期 t|||2tu2ut
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kv|vzs{wul
相应 t ∗ tss Λª# °¯ p t浓度 ∀细胞色素 ≤ o超氧化物
歧化酶 o细胞松驰素
o¬¦µ²¦²¦¦∏¶¼¶²§¨¬®·¬¦∏¶o酚
酞葡糖醛酸购自美国 ≥¬ª°¤公司 ∀2{购自北京医
科大学免疫室 ∀其它试剂由国内化工厂生产 o均为
分析纯 ∀
11113 仪器 ≠¤°¤·²
×2ux型震荡恒温水浴为日
本生产 ∀ ≥²±¬³µ¨³txs超声细胞破碎仪为英国生产 ∀
ƒ²µ°¤≥¦¬¨±·¬©¬¦vtyw ≤ u温孵箱 o
¬²2 ¤§wxs酶标
仪为美国生产 ∀ ⁄w2s q{自动平衡微型离心机为
北京医用离心机厂生产 ∀
112 方法
11211 中性白细胞悬液的制备≈v 大鼠在乙醚麻
醉下 o于右胸肋间注入 t h角叉菜胶 s qu °¯ ow «后
断 头处死 o吸取胸腔渗出液 o冰浴保存 o加含
s qzxw≤¯的 tz °°²¯#p t ×µ¬¶2≤¯缓冲液k³
z qul除去混入的红细胞 ou sss µ#°¬±p t离心 x °¬±o
沉淀的中性白细胞以适当生理溶液洗涤及制成悬
液 ∀
11212 中性白细胞释放超氧阴离子k Αu l的检测≈w
中性白细胞以
≥≥溶液k¤≤¯{ ª#pt o≤¯s qw ª
#p t o≤¤≤ u¯ s qtw ª#p t o ª≤ u¯#u s qu ª#p t o葡
萄糖 t ª#p t o∞°∞≥ u qv{{ ª#p t o³ z qwl悬浮 o
调节为 u ≅ tsz 细胞r °¯ ∀用 |y孔酶标板 o每孔加 w
≅ tsp w °²¯#p t细胞色素 ≤ ux Λ¯ o药物或等体积溶
剂 o以
≥≥补至 txs Λ¯ o加细胞悬液 ux Λ¯ o对照与给
#sx#
第 uy卷第 t期
usst年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qt
¤±qousst
药均设 x个复孔 ∀置 vz ε ≤ u温孵箱内 ovs °¬±后
加 tss Λª# °¯ p t2{ t qy Λ¯ o继续温孵 us °¬±∀在
xxs ±°滤光片酶标仪上读数 ∀以消光系数 ut ≅ tsv
#k°²¯#lp t#¦°p t计算 2u的生成量 ∀
11213 中性白细胞酶液的制备≈x 中性白细胞以
⁄∏¯¥¨¦¦². ¶液悬浮 o调节为 u qx ≅ tsy 细胞r °¯ o用 ts
°¯ 试管 o加药物或等体积溶剂 o细胞悬液 uxs Λ¯ o均
设 w个复管 ∀置 vz β≤ 水浴 o震荡温孵 tx °¬±o加 t
≅ tsp v °²¯#pt细胞松驰素
u qx Λ¯ o温孵 x °¬±o再
加 tss Λª# °¯ p t 2{ u Λ¯ o温孵 x °¬±o将试管移入冰
浴 o终止反应 ∀w sss µ#°¬±p t离心 x °¬±o取上清作
为释放酶液 ∀取细胞悬液 v °¯ o在冰浴下用
≥²±¬³µ¨³txs细胞破碎仪超声 t °¬±k强度 us °l o
wsss µ#°¬±p t离心 tx °¬±o上清作为总酶液 ∀取总
酶液 t °¯ o于 {s ε 水浴中灭活 tx °¬±o作为灭活酶
液 ∀
11214 Β2葡糖苷酸酶的检测≈x 依文献原理改为
微量法 ∀采用 |y孔酶标板 o每孔加释放酶液 o或总
酶液 o灭活酶液 ux Λ¯ ou qx °°²¯#p t酚酞葡糖醛酸
ux Λ¯ os qt °²¯ #pt醋酸缓冲液k³w qyltss Λ¯ ∀置
vz ε ≤ u 温孵箱内 t{ «∀每孔加 s qu °²¯ # pt
¤ vss Λ¯ o终止反应并显色 ∀在 xxs ±°滤光片
的酶标仪上读数 ∀计算酶释放量占总酶的百分数 ∀
11215 溶菌酶的检测≈y 采用 |y孔酶标板 o每孔
加释放酶液 o或总酶液 o灭活酶液 xs Λ¯ os quw °ª#
°¯ p t °¬¦µ²¦²¦¦∏¶¼¶²§¨¬®·¬¦∏¶k悬浮于 s qt °²¯#pt
¤u°w o³ y qxluss Λ¯ o置 vz ε ≤ u温孵箱内 tx
°¬±∀在 wxs ±°滤光片酶标仪上读数 ∀计算酶释放
量占总酶的百分数 ∀
11216 统计方法 用 τ检验进行组间比较 oΠ
s qsx为有显著性差异 ∀
2 结果
211 麝香2t对中性白细胞产生 Αu 的影响
中性白细胞在 s q{ Λª# °¯ p t2{作用下 Αu 生
成量比空白对照组增加了 x{ qv h k Π s qsxl ∀中性
白细胞在 2{存在下分别与终浓度为 t ots otss Λª
# °¯ p t的麝香2t或对照溶剂温孵后 o给药组 Αu 生成
量 分别比2{对照组增加|t qz h otyy h k Π
s qstl和 u|t h k Π s qsxlk图 tl ∀表明麝香2t可明
显增加中性白细胞 Αu 的产生 ∀
212 麝香2t对中性白细胞释放 Β2葡糖苷酸酶的影
响
中性白细胞在 s q{ Λª# °¯ p t2{作用下 Β2葡糖
苷酸酶的释放量比空白对照组增加ut qy h k Π
s qstxl ∀中性白细胞分别与终浓度为 t ots otss Λ¯#
°¯ p t的麝香2t或对照溶剂温孵后 o给药组 Β2葡糖苷
酸酶的释放量分别比 2{对照组降低 u qu h o{ qz h
kΠ s qsx{l和 x{ qt h k Π s qssszlk图 ul ∀表明麝
香2t可明显抑制中性白细胞 Β2葡糖苷酸酶的释放 ∀
图 t 麝香2t对 2{激活的大鼠中性白细胞 Αu 生成的影响
ν w 与 ΙΛ2{对照组比较 3 Π s .sx 3 3 Π s .st
与空白对照组比较 n Π s qsx
图 u 麝香2t对 2{激活的大鼠中性白细胞
Β2葡糖苷酸酶释放的影响
ν v 与空白对照组比较 n Π s qsx
与 2{对照组比较 3 3 3 Π s qsst
213 麝香2t对中性白细胞释放溶菌酶的影响
中性白细胞在 s q{ Λª# °¯ p t2{作用下溶菌酶
的释放量比空白对照组增加 ut q| h k Π s qswxl ∀
中性白细胞分别与终浓度为 t ots otss Λª# °¯ p t的麝
香2t或对照溶剂温孵后 o给药组溶菌酶的释放量分
别比 2{对照组降低 v q| h out qs h k Π s qsxzl和
v| q{ h k Π s qstvlk图 vl ∀表明麝香2t可明显抑制
中性白细胞溶菌酶的释放 ∀
3 讨论
以前研究表明 }麝香在整体动物模型上有很强
的抗炎作用 ∀其作用机制尚未完全清楚 ∀2{是近
年发现的炎症介质 o可引起中性白细胞的趋化反应 !
活性氧生成及溶酶体酶释放 ∀由于溶酶体酶在杀灭
#tx#
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¤±qousst
图 v 麝香2t对 2{激活的大鼠中性白细胞溶菌酶释放的影响
ν v 与空白对照组比较 n Π s qsx
与 2{对照组比较 3 Π s qsx
微生物的同时又会造成自身组织损伤 o是炎症反应
的次级原因 o故抑制 2{引起的溶酶体酶释放可能
是麝香抗炎作用的又一机制 ∀
中性白细胞活性氧的生成有赖于一种 ⁄°
氧化酶 ∀此酶在正常情况下无活性 o在某些刺激剂
如趋化三肽 !血小板活化因子 !白三烯
w !2{等作
用下可被激活 ∀激活的途径被认为由受体 !鸟苷酸
结合蛋白 !磷脂酶 ≤ 组成 ∀通过磷脂酶 ≤ 激活蛋白
激酶 ≤ o后者再激活氧化酶 ∀本研究结果显示麝香2
t不抑制 2{引起的 Αu 生成 o而明显增加 Αu 生
成 o并与剂量呈正相关 o表明麝香2t 本身可增强
⁄° 氧化酶的活性 ∀
一般来说 o可清除氧自由基的化合物具有抗炎
作用 ∀麝香2t明显增加中性白细胞 Αu 生成似乎与
其抗炎作用相悖 o但另一方面却有利于宿主的防御
机能 o可能对有感染的炎症更适用 ∀有研究者合成
某些抑制 x2脂氧酶同时兼有增加产生 Αu 作用的化
合物时 o曾提出这种观点≈z ∀
≈参考文献
≈t 朱秀媛 o王文杰 o徐桂芳 o等 1 麝香的药理研究 µ麝香及其有
效成分的抗炎作用 1 药学学报 ot|{{ ouvkyl }wsy1
≈u 柳雪枚 o李虹奇 o肖 宣 o等 1 天然麝香抗炎蛋白质的研究 ´
∏2¤2t分离纯化及其部分性质的鉴定 1 动物学报 ot||u ov{
kvl }vsu1
≈v ≠ ∏¨ × o∂¤µ°¤⁄ o°²º¨¯¯o • ≥ q∞©©¨ ¦·¶²©°µ²·¨¬± ⁄¨ ©¬¦¬¨±2
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Μετηοδ :±¬± √¬·µ²¬±¦∏¥¤·¬²±¶¼¶·¨° º¤¶∏¶¨§q≥∏³¨µ²¬¬§¨ ¤±¬²± ³µ²§∏¦·¬²± º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ ¦¼·²¦«µ²°¨≤
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Χονχλυσιον :±«¬¥¬·¬²± ²© ¼¯¶²¶²°¨¯ ±¨½¼°¨µ¨¯¨ ¤¶¨ °¬ª«·¥¨ ¦²±¶¬§¨µ¨§¤¶²±¨ ²© ° ¦¨«¤±¬¶°¶²©¤±·¬¬±©¯¤°°¤2
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[ Κεψ ωορδσ] °∏¶®~³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯¨ ¤µ¯ ∏¨®²¦¼·¨ ~¶∏³¨µ²¬¬§¨ ¤±¬²±~Β2ª¯∏¦∏µ²±¬§¤¶¨ ~ ¼¯¶²½¼°¨
≈责任编辑 方文贤
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