全 文 ：≈参考文献 
≈t  ¬±ª2²¬ ≠²∏±ªq׫¨ ∞¯ ¦¨·µ²³«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯ ∞©©¨ ¦·¶²© ∆2§¬¦¨±2
·µ¬±¨ ²±·«¨ ≤²±§∏¦·¬²± ≥¼¶·¨° ²© • ¤¥¥·¬¦ ‹ µ¨¤·q…µ °«¤µ°¤2
¦²¯ ot||w ottv }y| q
≈u  云南省卫生厅 q云南省药品标准 1 昆明 }云南科技出版社 o
t|zw1vty q
≈v  李惠兰 o苏 沧 o王方材 1 左旋荷包牡丹碱对豚鼠胆囊和胆道
口括约肌的解痉作用 q昆明医学院学报 ot||x otykvl }xs q
≈w  高木敬次郎 1 药理实验方法 q北京 }化学工业出版社 o
t|{t1wwu q
≈x  ∂¤± • ²¶¶¤°   q≤²°∏¯¤·¬√ 2¨§²¶¨ • ¶¨³²±¶¨ ≤∏µ√ ¶¨q „µ¦« Œ±·
°«¤µ°¤¦²§¼± ot|yv qtwv q
≈y  陈 修 1 心血管药理学 1 北京 }人民卫生出版社 ot||z1uss q
Εφφεχτ οφ Λ2∆ιχεντρινε ον Χοντραχτιον οφ Ρατ Στοµ αχη Μυσχλε Στριπσ
Œ ‹∏¬2¯ ¤±o ‹ „‘Š • ²±ª2³¬±ªo ≠ ∞ ‹¤¬2·¤²o • „‘Š ‹²±ª
k⁄¨ ³¤µ·° ±¨·²© °«¤µ°¤¦²¯²ª¼ oŽ∏±°¬±ª  §¨¬¦¤¯ ≤²¯¯¨ ª¨ oŽ∏±°¬±ª yxssvt o≠∏±±¤±o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε:ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨ ¦·²© Λ2§¬¦¨±·µ¬±¨ ²±·«¨ ¦²±·µ¤¦·¬²± ²©µ¤·¶·²°¤¦« °∏¶¦¯¨¶·µ¬³¶¬±2
§∏¦¨§¥¼ x2‹ × o«¬¶·¤°¬±¨ Žn ¤±§≤¤u n qΜετηοδ :Œ±2√¬·µ² ¬¨³¨µ¬° ±¨·¬±ª²±µ¤·¶·²°¤¦« °∏¶¦¯¨ ¶·µ¬³¶qΡεσυλτσ:
׫¨ ¦²±·µ¤¦·¬²± ²©·«¨ ¶·µ¬³¶¬±§∏¦¨§¥¼ x2‹ × «¬¶·¤°¬±¨ Žn ¤±§≤¤u n ¤©·¨µ«¬ª«Žn §¨ ³²¯¤µ¬½¤·¬²± º¤¶°¤µ®¨ §2
¼¯ ¬±«¬¥¬·¨§¥¼ Λ2§¬¦¨±·µ¬±¨ ²µ³¤³¤√ µ¨¬±¨ o¶«²º¬±ª¤±²±2¦²°³¨·¬·¬√¨¤±·¤ª²±¬¶° q׫¨ ¦²±·µ¤¦·¬²±¬±§∏¦¨§¥¼ x2
‹ × º¤¶¬±«¬¥¬·¨§¥¼ Λ2§¬¦¨±·µ¬±¨ ¬± ≤¤u n ©µ¨¨¶²¯∏·¬²±qΛ2⁄¬¦¨±·µ¬±¨ ¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ¦²±·µ¤¦·¬²± ¬±§∏¦¨§¥¼ x2
‹ × o§¨ ³¨ ±§¬±ª²± ≤¤u n µ¨¯¨ ¤¶¨§©µ²° ·«¨ ¬±·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ¶·²µ¨ q• «¨ ±·«¨ ≤¤u n ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¬± ¥²·«¶²¯∏·¬²±¶º¤¶
µ¨¶·²µ¨§oΛ2§¬¦¨±·µ¬±¨ §¬§±²·¬±©¯∏¨ ±¦¨ ·«¨ ¦²±·µ¤¦·¬²±¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ qΧονχλυσιον : Λ2⁄¬¦¨±·µ¬±¨ ¦²∏¯§µ¨ ¤¯¬·«¨ µ¤·
¶·²°¤¦«¶°²²·« °∏¶¦¯¨ qŒ± µ¤·¶·²°¤¦«¶°²²·« °∏¶¦¯¨ ¶·«¨ µ¨ ¬¨¬¶·x2‹ × µ¨¦¨³·²µ¶q
[ Κεψ ωορδσ] Λ2§¬¦¨±·µ¬±¨ ~¶·²°¤¦«¶°²²·« °∏¶¦¯¨ ~µ¨ ¤¯¬¤·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
温阳散结中药诱导 …∞2zwsu细胞凋亡的初步研究
张 侠t o刘端棋t o刘彦珠u o王 沛u o陈信义u
kt1 北京军区总医院 o北京 tsszss ~u1 北京中医药大学东直门医院 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }探讨温阳散结中药的抗肿瘤机制 o研究温阳散结中药诱导 …∞2zwsu细胞凋亡作用 ∀方法 }采
用细胞形态学 !原位末端标记和流式细胞技术 o观察温阳散结中药对 …∞2zwsu细胞的影响 ∀结果 }…∞2zwsu细胞
经中药处理后 o光镜下可见凋亡细胞的形态学特征性改变 o× ˜‘∞标记阳性 o流式细胞仪分析 ⁄‘„ 含量 o在非凋
亡细胞二倍体峰kŠtl之前细胞出现典型的凋亡细胞峰k„³峰l ∀s1ssx ª# °¯ p t中药组和 s1st ª# °¯ p t中药组发生
凋亡的细胞数分别为 tv1| h和 ut1y h ∀结论 }温阳散结中药可诱导 …∞2zwsu细胞发生凋亡 o并有随浓度升高作
用增强的趋势 o实验结果表明 o诱导肿瘤细胞凋亡可能是温阳散结中药治疗肝癌的作用机理之一 ∀
≈关键词  中药 ~细胞凋亡 ~…∞2zwsu细胞
≈中图分类号  • u{x qx ~• |z| qt ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussslsz2swu{2sv
我国肝癌年发病率高于万分之一 o近年来发病
≈收稿日期  t||| 2s|2s|
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv|{zs|s{l
率又呈增高趋势 o死亡率也已由原来的第 v位上升
至第 u位≈t  ∀目前中医治疗肝癌多采用疏肝理气 !
活血化瘀 !清肝利湿 !健脾益气 !滋阴养肝等治则治
法 o疗效无较大突破 ∀据临床观察 o多数肝癌患者有
#{uw#
第 ux卷第 z期
usss年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qz∏¯¼ ousss
畏寒 !纳差 !消瘦 !神疲乏力 !腹泻 !面色晦暗 !舌质紫
暗等表现 o经中医证侯学分析 o认为本病主要病机为
阳虚阴毒结聚 ∀立法温阳散结 o以附子 !山慈菇 !莪
术等药治疗本病 o取得较好疗效 ∀以往研究证实温
阳散结法体外可明显抑制人 …∞2zwsu肝癌细胞增
殖 o为探讨其作用机制 o本实验采用细胞形态学 !原
位末端标记和流式细胞仪 o对温阳散结中药诱导细
胞凋亡作用作了初步研究 ∀
1 材料与方法
111 细胞培养 …∞2zwsu细胞由中国军事医学科
学院惠赠 ∀将细胞株培养于含 ts h胎牛血清的 • °2
Œ2tywsk美国 ≤Œ…≤ ’l培养液中 o长满后以 s1t h
胰蛋白酶消化传代 ∀取对数生长期细胞 os1t h胰
蛋白酶消化 o°…≥ 洗涤 u 次 o离心 o吸弃上清 o用含
ts h胎牛血清的 • ° Œ2tyws培养液配成 t ≅ tsxr °¯
细胞悬液 o用于实验 ∀
112 中药制备 主要由附子 !黄芪 !白术 !川椒 !莪
术 !青皮 !白芍 !甘草等组成 ∀采用水煮醇沉法制成
含 u ªr°¯ 生药药液 o工艺从略 ∀
113 反应体系 取 y孔板 o每孔加入浓度为 v ≅ tsy
r°¯ 的细胞悬液 t °¯ o实验第 t ou组分别加入 t °¯
终浓度为 s1ssx os1st ªr°¯ 的中药制剂 o对照组加
入含 ts h胎牛血清的 • ° Œ2tyws培养液 o每组设 x
个复孔 o置 vz ε ox h ≤ ’u 培养箱中共同孵育 w{ «
后收获细胞 o用于检测 ∀
114 检测方法
11411 细胞形态学观察 将细胞均匀涂片 o甲醛冰
醋酸等固定 vs °¬±o酒精脱色 ot h核固红 ts °¬±o
t h结晶紫 vs °¬±染色 o|x h酒精分色 o然后按常规
病理切片处理 ∀
11412 原位末端标记k× ˜‘∞l 试剂购自德国宝
灵曼公司 ∀按试剂盒说明书进行 ∀
11413 流式细胞仪检测≈u  取培养细胞 u ≅ tsy o胰
蛋白酶消化 ow ε °…≥洗涤 u次 o加入 {s h冷乙醇 ow
ε vs °¬±o°…≥洗涤 v次 o加碘化丙啶k°ŒoŠŒ…≤ ’l
xs Λª# °¯ p t os1t h ×µ¬·²±÷2tss os1t °²¯r∞⁄× „
k‘¤lu o• ‘¤¶¨ xs Λªr°¯ o置黑暗室温中半小时待测 ∀
°Œ用 w{{ ±°氩激光激发 o功率 txs °∂ o用大于 yts
±°滤色片检测细胞 ⁄‘„ 含量 o并以此估计发生细
胞凋亡的细胞量 ∀
115 统计学处理采用 τ检验 ∀
2 结果
211 形态学观察 光镜下发现 o中药组细胞体积较
小 o有些细胞出现发泡 !核边集 !核固缩 !核碎裂及核
小体等细胞凋亡特征 ∀对照组细胞则大小不一 o胞
核形态极不规则 o常见多极性病理核分裂相 ∀
212 原位末端标记 中药组可见呈蓝色的阳性细
胞 o对照组镜下未见阳性细胞 o非凋亡细胞的细胞核
经核固红复染呈红色 o核相对较大 ∀
213 流式细胞仪检测结果 各组细胞 „³峰出现的
情况 图 t为对照组碘化丙啶染色后 ⁄‘„ 峰的情
况 o在 Št峰之前未见明显小峰k„³峰l出现 o图 u为
s1ssx ªr°¯ 中药组 ⁄‘„峰 o可见在 Št峰之前有一
小 „³峰 o为凋亡细胞的 ⁄‘„ 峰 o约为 tv1| h ~图 v
为 s1st ªr °¯ 中药组 ⁄‘„ 峰 o在 Št峰之前也可见
„³峰 o约为 ut1y h ∀
图 t 对照组 °Œ染色后 „³峰出现的情况
图 u s qssxªr °¯ 浓度组 °Œ染色后 „³峰出现的情况
图 v s qstªr °¯ 浓度 °Œ染色后 „³峰出现的情况
#|uw#
第 ux卷第 z期
usss年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qz∏¯¼ ousss
3 讨论
细胞调亡k„³²³·²¶¬¶l是胚胎发生和个体发育清
除细胞以维持细胞数目正常的调节机制 ∀细胞凋亡
调节的紊乱与肿瘤的发生 !发展有着密切的关系 ∀
通过物理 !化学和生物等手段诱导肿瘤细胞的凋亡
已成为肿瘤治疗的有效途径之一 ∀
对凋亡现象的检测早年主要是根据细胞凋亡的
特殊形态 o继而采用核酸电泳的方法来研究 ∀但是
形态和核酸电泳检查只能定性检测细胞凋亡的发
生 o这对于精细深入地研究细胞凋亡远远不够 ∀流
式细胞术虽可较为深入地分析凋亡细胞的染色体 o
并使凋亡细胞检测逐渐由定性发展为定量 o但仍对
凋亡细胞内部发生的本质变化不能反应 o如难以将
早期凋亡的细胞 o即才出现断裂而细胞形态尚无明
显变化的细胞检出 ∀因而确定细胞形态学的改变 o
再进行 ⁄‘„含量分析和末端标记实验三者并行为
更准确≈v  ∀
本实验中 o不同浓度温阳散结中药作用于 …∞2
zwsu肝癌细胞 w{ «o发现凋亡细胞的形态学特征性
改变 o× ˜‘∞标记阳性 o流式细胞仪分析 ⁄‘„ 含
量 o在非凋亡细胞二倍体峰kŠtl之前细胞出现典型
的凋亡细胞峰k„³峰l ∀多种方法证实温阳散结中
药可诱导 …∞2zwsu细胞发生凋亡 o并有随浓度升
高作用增强的趋势 o诱导肿瘤细胞凋亡可能是温阳
散结中药治疗肝癌的作用机理之一 o其深入机制有
待于进一步研究 ∀
≈参考文献 
≈t  彭承宏 o彭叔牖 q肝癌根治性切除后复发率及危险因素 q实用肿
瘤杂志 ot||z otuktl }z q
≈u  ר¯©²µ§ • Š oŽ¬±ª∞oƒµ¤®¨ µ° q⁄¼ ¶¨¬± ⁄¨ ·¨¦·¬²± ²© „³²³·²2
¶¬¶2„¶¶²¦¬¤·¨§ ≤«µ²°¤·¬± ⁄¨ ªµ¤·¬²± ¥¼ ©¯²º ≤¼·²° ·¨µ¼ q≤¼·²° 2¨
·µ¼ ot||u otv }tvz q
≈v  „±¶¤µ¬…o≤²¤·¨¶° oŠµ¨ ±¨¶·¨¬± … ⁄o¨·¤¯ qŒ± ≥¬·∏∞±§¯¤¥¨ ¬¯±ª ⁄¨ 2
·¨¦·¶⁄‘„ ≥·µ¤±§ …µ¨¤®¶¬± „³²³·²¶¬¶¤±§ ’·«¨µ°«¼¶¬²¯ ²ª¬¦¤¯
¤±§°¤·«²¯²ª¬¦¤¯ ≥·¤·¨¶q°¤·«²¯ ot||v otzsktl }t q
Πρελιµιναρψ Στυδψ ον Αποπτοσισ οφ ΒΕΛ2zwsu ΧελλσΙνδυχεδ βψ
Χηινεσε Ηερβσφορ Ωαρµινγ Ψανγ ανδ ∆ισπερσινγ Στασισ
‹ „‘Š ÷¬¤t oŒ˜ ⁄∏¤±2 ¬´t oŒ˜ ≠¤±2½«∏u o • „‘Š ° ¬¨u o≤ ‹∞‘ ÷¬±2¼¬u
kt q…¨ ¬­¬±ª ¬¯¬·¤µ¼ Š ±¨¨ µ¤¯ ‹²¶³¬·¤¯ o…¨ ¬­¬±ª tsszss o≤«¬±¤~
u q⁄²±ª½«¬° ±¨ ‹²¶³¬·¤¯ „©©¬¯¬¤·¨§·² …¨ ¬­¬±ª × ≤  ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o…¨ ¬­¬±ª tsszss o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ¤±·¬·∏°²µ° ¦¨«¤±¬¶° ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¥¨µ¥¶©²µº¤µ°¬±ª ¼¤±ª ¤±§
§¬¶³¨µ¶¬±ª¶·¤¶¬¶¤±§²¥¶¨µ√¨·«¨ ¤¦·¬²± ²©·«¨ ¶¨ «¨ µ¥¶¬±¬±§∏¦¬±ª¤³²³·²¶¬¶²©…∞2zwsu ¦¨¯¯¶q Μετηοδ :„³²³·²2
¶¬¶²©…∞2zwsu ¦¨¯¯¶¬±§∏¦¨§¥¼·«¨ ¤¥²√ §¨2¶¤¬§«¨µ¥¶º¤¶§¨·¨¦·¨§·«µ²∏ª«©¤¶·µ¨§·¤¥¯ ·¨¶·¤¬±¬±ªo©¯²º ¦¼·²°2
·¨µ¼ ¤±§·¨µ°¬±¤¯ ∏µ¬§¬±¨ §¨ ²¬¼±∏¦¯¨ ²·¬§¼¯ ¤±§ ¤¯¥¨ ¬¯±ªk× ˜‘∞l q Ρεσυλτ : „©·¨µ·µ¨¤·¬±ª …∞2zwsu ¦¨¯¯¶º¬·«
·«¨ «¨µ¥¶·¼³¬¦¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¶¦²∏¯§¥¨ ¶¨ ±¨ ∏±§¨µ ¬¯ª«·°¬¦µ²¶¦²³¨ ¤±§ × ˜‘∞³²¶¬·¬√¨¦¨¯¯¶ º µ¨¨
§¨·¨¦·¤¥¯¨q׫¨ ¤³²³·²·¬¦µ¤·¨ º¤¶tv q| h k§µ∏ª¦²±¦¨±·µ¤·¬²± s qx h l ¤±§ut qy h k§µ∏ª¦²±¦¨±·µ¤·¬²± t h l
Χονχλυσιον :≤«¬±¨ ¶¨ «¨ µ¥¶©²µº¤µ°¬±ª ≠¤±ª¤±§§¬¶³¨µ¶¬±ª¶·¤¶¬¶¦²∏¯§¬±§∏¦¨ ¤³²·²¶¬¶²© …∞2zwsu ¦¨¯¯¶¤±§
·«¬¶ ©¨©¨ ¦·§¨ ³¨ ±§¶²± §µ∏ª¦²±¦¨±·µ¤·¬²±qŒ±§∏¦¬±ª·«¨ ¤³²³·²¶¬¶²©·∏°²µ¦¨¯¯¶ °¤¼ ¥¨ ³¤µ·²©·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶°
§¬¶³¯¤¼¨ §¥¼ ≤«¬±¨ ¶¨ «¨ µ¥¶©²µº¤µ°¬±ª ≠¤±§¤±§§¬¶³¨µ¶¬±ª¶·¤¶¬¶¬±·µ¨¤·¬±ª «¨ ³¤·²°¤q
[ Κεψ ωορδσ] ≤«¬±¨ ¶¨ «¨ µ¥¶~¤³²³·²¶¬¶~…∞¯2zwsu ¦¨¯¯¶
≈责任编辑 方文贤 
#svw#
第 ux卷第 z期
usss年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qz∏¯¼ ousss