全 文 ：ƒ¬√¨¦²°³²∏±§¶ º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§©µ²° ·«¨ ¤¯¦²«²¯ ¬¨·µ¤¦·¶²©·«¨ ¶¨ §¨¶¤±§¬§¨ ±·¬©¬¨§¤¶±¬¦²·¬¤±²¶¬§¨ ≤ okuu Σl2
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[ Κεψ ωορδσ] Αλλιυ µ τυβεροσυ µ ~¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶~¶·¨µ²¬§¶¤³²±¬±¶
≈责任编辑 徐美珍
灵芝孢子中抗肿瘤成分的提取与分离
赵东旭t o杨新林t o陈 霖t o王帮武t o徐建兰u o朱鹤孙t
kt q北京理工大学 材料科学研究中心 o北京 tsss{t ~
u q中国无锡三联高科技开发公司 o江苏 无锡 utwsutl
≈摘要 目的 }检测不同破壁率的灵芝孢子的醇提效果并用色谱技术对醇提物中的抗肿瘤成分进行分析 ∀方
法 }乙醇为溶剂对灵芝孢子粉进行振荡浸提 o醇提物依次用硅胶柱和高效液相色谱分析 o以各部分对 ¨¯¤细胞的毒
性作为其抗肿瘤活性的指标 ∀结果 }未破壁孢子 oys h ∗ {s h及 || h破壁率孢子的醇提率分别为 x h oux h ovv h ∀
|| h破壁率灵芝孢子的醇提物经硅胶柱分离 o氯仿洗脱部分对 ¨¯¤细胞无毒害作用 ~甲醇洗脱部分的抗肿瘤活性
约为乙酸乙酯洗脱部分的 vw倍 ~甲醇洗脱部分经高效液相色谱分析 o得到 u种活性较强且组成较为简单的混合物
k µt和 µvl ∀结论 }灵芝孢子破壁后醇提物含量远高于未破壁孢子 ~甲醇2水洗脱系统可用于灵芝孢子醇提物中抗
肿瘤活性成分的 °2°≤ 分析 ∀
≈关键词 灵芝 ~孢子 ~抗肿瘤活性 ~高效液相 ~硅胶柱
≈中图分类号 u{w qu ~ u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussslsx2su{{2sv
灵芝孢子是灵芝的一个重要的生长阶段 o近年
来 o伴随着对灵芝子实体和菌丝体化学成分分析和
药理作用研究的深入 o对灵芝孢子生物活性成分的
分析和药理作用的研究也在逐步加强 o尤其是一些
新的破壁方法≈t ∗ v 的建立加速了灵芝孢子的研究 ∀
陈体强 !蒋家新等≈t ou 分别应用酶法破壁和超声波
破壁技术对灵芝孢子的破壁问题进行了实验性探
索 o虽然破壁效果比较令人满意 o但是这些方法在样
品的回收方面尚存在有一定的困难 ~国外则多应用
高压气流法破壁≈u o其设备一次性投资大且易损坏 ∀
本实验室的前期工作表明 o灵芝孢子除表现出明显
的免疫抗肿瘤作用之外 o其醇提物对一些体外培养
的肿瘤细胞系如人宫颈癌 ¨¯¤细胞 !人肝癌细胞
≈收稿日期 t|||2sy2t|
≈基金项目 原国家科委生命科学技术发展中心主任基金资助
项目
赵东旭现工作单位中国科学院化学研究所生化工程国家重点实
验室 o北京 tsss{t
³¨ u !人白血病细胞 ys等有直接的毒害作
用≈v ow ∀本文将在该工作的基础上 o用硅胶柱和
°≤等技术进一步对灵芝孢子醇提物中的抗肿瘤
成分进行分析 ∀
1 材料
灵芝 Γανοδερµ α λυχιδυ µ k ¨¼¶¶q ¬¨ ƒµql
¤µ¶·q破壁孢子粉和完整孢子粉由无锡三联高科技
开发公司k江苏l提供 o中国科学院微生物研究所李
文忠研究员鉴定 ∀ • ¤·¨µ¶yss∞型高效液相色谱仪 o
硅胶柱用硅胶 tys ∗ uss目k青岛化工厂l ∀
2 方法与结果
2 q1 灵芝孢子醇提物的制备
称取灵芝破壁k破壁率分别为 ys h ∗ {s h o
|| h l和未破壁孢子粉各 tss ªo用 t sss °¯ 无水乙
醇提取kv次l o浸提间不断振摇 ∀浸提液经减压蒸
干后得油状物 ∀
2 q2 细胞毒性检测
参考文献≈w 方法 ∀指数生长期的 ¨¯¤细胞 o
用 tx h小牛血清的 tyws培养基k≥ l接种于 |y
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第 ux卷第 x期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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孔培养板上 o每孔约 tsx个细胞 o继续培养至细胞
贴壁 o然后换用含灵芝醇提液和 u h血清的培养基
继续培养 ot h乙醇为对照 ∀每隔 uw «在倒置显微
镜下观察细胞生长状况 o连续观察 zu «o观察各提取
液对 ¨¯¤细胞的毒害程度 o最后用 × × 法对样品
的抗肿瘤活性进行定量测定 ∀
2 q3 不同破壁率灵芝孢子醇提效果的比较
tss ª完全破壁 !ys h ∗ {s h破壁率 !未破壁的
灵芝孢子粉 o乙醇提得油状物分别为vv qs oux qs o
x qs ªo提取率分别为 vv h oux h ox h ∀
2 q4 硅胶柱色谱分析
称取完全破壁k|| h破壁率l的灵芝孢子的醇提
物k油状物lx qs ªo正己烷溶解 o上硅胶色谱柱 o依次
用氯仿 !乙酸乙酯和甲醇洗脱 ∀活性检测结果表明 o
氯仿洗脱部分在 x °ª# °¯ p t时 o处理 ¨¯¤细胞 zu «
对其生长基本无作用 ~乙酸乙酯洗脱部分在 u qw °ª
# °¯ p t时的抗肿瘤活性与甲醇洗脱部分在 s qsz °ª#
°¯ p t时相当k可导致 ys h ∗ {s h细胞死亡l o是氯仿
洗脱部分的 vw倍 ∀因此对甲醇洗脱部分进行更深
入的分离和纯化 ∀
2 q5 °≤ 分析
≤t{反相柱 o紫外检测波长 uxw ±°k见图 tl o
xs h甲醇洗脱 u{ °¬±o然后甲醇洗脱至 ys °¬±oys ∗
zy °¬±再 xs h甲醇洗脱k见图 u2l ∀共收集 w 份
k ´ t ∗ ´ wl o减压浓缩后进行细胞毒性检测 o结果在
s qsz °ª# °¯ p t时 o´ w可导致 {s h以上细胞死亡 o表
明具有细胞毒性 ∀
´ w进行二次 °≤ 分析 ∀ {s h 甲醇洗脱 ts
°¬±o然后甲醇洗脱k见图 u2
l o共收集 v 份k µt ∗
µvl o减压浓缩 o细胞毒性检测 o结果在 s qsz °ª#
°¯ p t时 oµt oµv 可导致 {s h以上细胞死亡 oµu 几
乎无作用 ∀
3 讨论
3 q1 长期以来 o用于研究和临床的孢子大部分是未
经过破壁处理的样品 o由于灵芝孢子的外部包裹了
两层坚韧的外壁 o耐酸 !耐碱 !耐机械力 o限制了对其
有效成分的充分吸收和利用 ∀实验结果表明 o灵芝
孢子破壁后 o其醇提物比未破壁孢子高 y 倍以上 ∀
我们以前的研究结果≈w ox 亦表明 o灵芝孢子破壁后 o
图 t 甲醇洗脱部分的紫外吸收光谱
图 u 甲醇洗脱部分的 °≤ 图谱
t ∗ w q´ t ∗ ´ w o x ∗ z qµt ∗ µv
其水提物中多糖含量远高于未破壁孢子 o而且破壁
孢子的醇提物对 ¨¯¤细胞有极强的毒性 o未破壁孢
子则无毒性 o因此 o在进行灵芝孢子有效成分的提取
与分析时 o最好选用破壁的灵芝孢子作材料 ∀
3 q2 实验结果表明 o甲醇2水洗脱系统在 °2°≤
分析灵芝孢子中抗肿瘤成分是可行的 ∀
≈参考文献
≈t 陈体强 o李开本 o郑 宇 q原木灵芝孢子及其破壁形态观察简
报 q食用菌学报 ot||y otvktl }yt q
≈u 蒋家新 o赵澎涛 o王新辉 q灵芝孢子酶法破壁的研究 q食品科
学 ot||y otzkwl }t| q
≈v 徐建兰 o匡 群 q首届海内外世纪中医药学术发展研讨会交流
论文 q重庆 }重庆大学出版社 ot||y qt q
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≈x 杨新林 o朱鹤孙 o赵东旭 o等 q灵芝破壁孢子与不破壁孢子的显
微镜观察与生化测定比较研究 q中草药 ot||z ou{ktul }zut q
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Εξτραχτιον ανδ Σεπαρατιον οφ Αντιτυµ ορ Χοµ πονεντσ
φροµ Γανοδερµ α λυχιδυµ (Λεψσσ. εξ Φρ .) Καρστ .
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Μετηοδ :׫¨ Γ . λυχιδυ µ ¶³²µ¨¶ º µ¨¨ ¶²¤®¨ §¤±§ ¬¨·µ¤¦·¨§ º¬·« ¤¥¶²¯∏·¨ ¤¯¦²«²¯ q ׫¨ ¤¯¦²«²¯ ¬¨·µ¤¦·º¤¶
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≈责任编辑 徐美珍
草红藤中的黄酮成分
曹延怀 o黄远征 o丁立生
k中国科学院 成都生物研究所 o四川 成都 ytsswtl
≈摘要 目的 }研究民间植物药草红藤的化学成分 ∀方法 }聚酰胺柱分离 o 谱鉴定结构 ∀结果 }分离鉴定出 u个
黄酮 o为杨梅素和白蔹素 ∀结论 }均为首次从该植物中分离得到 ∀
≈关键词 草红藤 ~杨梅素 ~白蔹素
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussslsx2su|s2su
草红藤又称铁马豆 !蝴蝶草等 o是豆科宿苞豆属
植物 o分布于广西 !贵州 !云南 !四川等省 o全草可入
药 o有清热 !解毒及消炎的功效 o民间常用于治疗阑
尾炎 !腮腺炎和虚劳咳嗽等≈t ∀该植物的化学成分
研究未见报道 o我们对其全草的水煮液进行分析 o发
现含有较多的黄酮成分 o经分离纯化得到 u个化合
物 o分别鉴定为杨梅素ktl和白蔹素kul ot和 u均具
有一些生理活性≈u ∀
1 仪器和材料
≈收稿日期 t|||2sy2t{
µ∏®¨ µ°2vss型核磁共振仪k溶剂 ⁄ ≥2§y o
内标 × ≥l ∀样品采自四川省金堂县 o植物标本由
本所肖顺昌副研究员鉴定为 Σηυτερια παµ πανινι2
αννα ¤±§q2 ¤½½q∀
2 提取分离
草红藤全草干品 t qu ®ªo水煎煮 u次 o每次 t «o
过滤 ∀滤液冷却后过聚酰胺kuss ªl柱 o少量水洗 o
∞· 2u 梯度洗脱 o合并相同流分 o分别用聚酰胺
柱 ≈ ¨ 2 ¦∞·2 u kv }t }tl 精制得化合物t
ks qxz ªl和化合物 uks qw{ ªl ∀
3 结构鉴定
#s|u#
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