全 文 ：ªµ¤³«¼ ¤±§ ¤¨¦«¶¨¦·¬²± º¬·«§¬©©¨ µ¨±·©√¤¯∏¨ º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ qΡεσυλτ ανδ Χονχλυσιον : ±±¨ µ¬±2
«¬¥¬·²µ¼¶∏¥¶·¤±¦¨¶ º¬·« «¬ª« ¤¦·¬√¬·¼ ¬¨¬¶·¶¬± Αχαντηοπαναξ σεντιχοσυσ ©µ∏¬·¶¤±§·«¨¬µ²∏·¨µ¦²¤·¶o °¬§§¯¨
¦²¤·¶¤±§·«¨ ¶¨ §¨¶q ׫¨ ¬±±¨ µ¬±«¬¥¬·²µ¼ ¶∏¥¶·¤±¦¨¶¶«²º §¨¶·µ²±ª¨µ¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨ ¦·²± ·«¨ ª¨µ°¬±¤·¬²± ²©
µ¤¶¶¬¦¤¦«¬±¨ ±¶¬¶¶¨ §¨¶·«¤±·«¨ ªµ²º·«²©¬·¶¼²∏±ª¨µµ²²·¶q׫¨ ©s qt ¶¨¦·¬²± ²©·«¨ ·¨«¨ µ ¬¨·µ¤¦·²© ¦¤±2
·«²³¤±¤¬¶¨±·¬¦²¶∏¶©µ∏¬·¦²¤·¶¶«²º §¨·«¨ ¶·µ²±ª¨¶·¬±«¬¥¬·²µ¼ ¤¦·¬√¬·¼ ²±·«¨ ª¨µ°¬±¤·¬²± ²© Βρασσιχα χηινενσισ
¶¨ §¨¶¤±§·«¨ ªµ²º·«²©¬·¶¼²∏±ªµ²²·¶q׫¨ µ²∏ª« ¬¨·µ¤¦·¶²© Αχαντηοπαναξ σεντιχοσυσ©µ∏¬·¶¦²∏¯§¬±«¬¥¬·¨·«¨
¤¦·¬√¬·¼ ²©·«¨ kΑ2¤°¼¯ ¤¶¨ ¬±·«¨ ³µ²¦¨¶¶²© º«¨ ¤·¶¨ §¨¶ª¨µ°¬±¤·¬²±q׫¨ §²µ°¤±√¼ ²© Αχαντηοπαναξ σεντιχοσυσ
¶¨ §¨¶¬¶µ¨ ¤¯·¨§·²·«¨ ¬±«¬¥¬·²µ¼ ¶∏¥¶·¤±¦¨¶º¬·««¬ª«¤¦·¬√¬·¼¬± Αχαντηοπαναξ σεντιχοσυσ©µ∏¬·¶¤±§¶¨ §¨¶
[ Κεψ ωορδσ] Αχαντηοπαναξ σεντιχοσυσ ¶¨ §¨¶~ ¬±«¬¥¬·²µ¼ ¶∏¥¶·¤±¦¨¶~ ³¤³¨µ¦«µ²°¤·²ªµ¤° ~ © √¤¯∏¨ ~
Α2¤°¼¯ ¤¶¨
≈责任编辑 王康正
芦荟的快速繁殖与多倍体诱导
张兴翠 o梁国鲁 o扬光伟 o阎 勇
k西南农业大学 生物技术中心 o重庆 wssztyl
≈摘要 目的 }改良现有的芦荟栽培品种 o丰富遗传育种资源 ∀方法 }在无菌条件下 o将丛生芽浸入 s qsu h o
s qsx h os qu h os qx h ot qs h秋水仙碱水溶液中浸泡 uw «o然后转入 ≥ n u ∗ u °ª#p ty2
n s qu °ª#p t
中培养 ∀结果 }培养 ws ∗ ys §后各处理丛生芽的叶片逐渐变肥大 ∀通过根尖细胞染色体检测 o变异芽为四倍体或
嵌合体 ∀结论 }以浓度为 s qx h的秋水仙碱溶液处理丛生芽 uw «效果最好 ∀得到的变异芽 |s h为纯合的四倍体 ∀
其染色体数量由 twku± u¬ twl变为 u{ku± w¬ u{l ∀
≈关键词 中华芦荟 ~库拉索芦荟 ~快速繁殖 ~多倍体
≈中图分类号 ≥ xyz ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstls{2sxv{2sv
芦荟属 Αλοε 是原产非洲热带的百合科多年生
肉质的常绿草本植物 ∀后来作为药用和观赏植物传
到世界各地 ∀近年来芦荟又作为当今保健食品及美
容化妆品的一颗新星而跻身于国际超级市场上 o深
受消费者的欢迎 ∀芦荟的有效成分≈t 主要是芦荟素
k¤¯²¬±l o为芦荟甙k¥¤µ§¤¯²¬±l及其异构体异芦荟甙
k¶²¥¤µ¥¤¯²µ±l与 Β2芦荟甙kΒ2¥¤µ¥¤¯²¬±l的混合物 o以
芦荟甙为主 ∀近年又分离出抗癌药物 Β2芦荟素 ∀
具有清肝热 !通经 !泻火 !消炎 !杀菌 !解毒等作用 ∀
各种芦荟的有效成分含量及生物产量差异很大 o为
了提高芦荟单位面积产量 !质量及抗性 o我们对中华
芦荟 !美国芦荟等进行多倍体诱导 o以期培养出抗
寒 !优质 !高产量的芦荟新品种 ∀同时为了缩短育种
进程 o加速新品种的推广应用 o我们对其快速繁殖
技术进行同步研究 ∀
≈收稿日期 usss2sz2sv
1 材料与方法
以中华芦荟 Αλοε χηινλεσσ k¤º ql
¤®¨ µo库拉
索 Α . ϖερα q为实验材料 ∀
1 q1 丛生芽的诱导
以中华芦荟 !库拉索的腋芽及其走茎为外植
体≈u ∗ w o在无菌条件下 o将芦荟茎和腋芽用 zs h酒
精消毒 vs ∗ ys ¶o再放入 s qt h升汞溶液中消毒 {
°¬±o用无菌水清洗 v ∗ x次 o切成 s qx ¦°切段 o接种
于 ≥ n u °ª#pt ∗ v °ª#pty2
n s qu °ª#p t
的培养基中培养 ∀培养温度kux ? ul ε o光强 t
xss ¬¯照射 ts «k下同l ∀
1 q2 增殖培养
切割丛生芽转入分化培养基中培养 ∀
1 q3 生根培养
切割具有w ∗ x片叶的无根苗 o转入tru ≥ n
s qu °ª#pt 的培养基中培养 ∀
1 q4 诱导方法
#{vx#
第 uy卷第 {期
usst年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²q{
∏ªqousst
将幼小的丛生芽浸入 s qsu h os qsx h os qu h o
s qx h ot qs h的秋水仙素溶液中 uw «o再转入分化培
养基中培养 o每一处理接种 w瓶 o每一瓶接种 x个组
织块 ∀
1 q5 染色体检测
采用改良去壁低渗法
2 结果与分析
2 q1 丛生芽的诱导
两种芦荟在分化培养基中培养 us ∗ vs §后 o皆
能在切口基部诱导出 z ∗ ts个白色的小突起 o继续
培养数天后 o小突起分化成绿色的丛生芽k如图 tl ∀
但是 o以 ≥ n u °ª#pty2
n s qu °ª#pt的
培养基配方最好 o增值倍数是 us ∗ vs的增殖 ts倍 o
且形态正常易于分割 ∀激素浓度过高时分化的丛生
芽细小密集不易分辨 ∀
图 t 中华芦荟丛生芽
2 q2 增殖培养
丛生芽在分化培养基中培养 vs §后 o在其基部
又产生无数丛生芽 o或先形成愈伤组织块 o再在愈伤
组织块表面分化出不定芽 ∀不断重复切割丛生芽或
不定芽的愈伤组织块转到分化培养基中培养 ovs §
左右又分化产生无数的丛生芽 o如此循环 o就能达到
快速繁殖的目的 ∀
2 q3 生根培养
培养 ts ∗ us §后在其切口基部形成 v ∗ x条金
黄色的根系 o随着时间的延长 o逐渐变成褐色 ∀或者
将 w ∗ x叶的丛生芽 o在自然环境条件下炼苗 z ∗ tw§
后 o直接切割植入腐殖土与细沙kvΒtl混合的基质
中 o保持空气 {s h湿度 ous ∗ vs §后在切口基部产
生 v ∗ x条根 ∀
2 q4 多倍体诱导结果
x种浓度秋水仙素溶液均能诱导出多倍体植株
k见表 tl ∀其中以丛生芽浸入 s qx h的秋水仙素溶
液 uw «效果最好 o不但诱导率高kxs h l o而且获得
的多倍体纯合体与嵌合体比为 |Βt ∀秋水仙素处理
后的丛生芽在分化培养基中逐渐膨大 o并失去原有
的光泽 ows ∗ ys §后在极度肿大的叶片组织表面分
化出变异芽 ∀切割变异芽转入分化培养基中继续培
养增殖 o在短时间内可获得无数的变异芽 ∀用原始
未处理的材料作对照 o对其根尖细胞作染色体制片
检测 o变异植株的染色体数目由 u± u¬ twk如图
ul变成 u± w¬ u{k如图 vl ∀变异体的植物形态表
现为叶色浓绿 o叶片增厚 o根系粗大k图 wl ∀
表 t 不同浓度秋水仙素溶液诱导芦荟多倍体结果
秋水仙
素浓度
r h
处理
芽数
r个
膨大
芽数
r个
变异
芽数
r个
嵌合
体
r个
死亡
芽数
r个
诱导
率
r h
纯合体
Β嵌合体
s qsu us us u u s ts sΒt
s qsx us us w w x us sΒt
s qus us us z v { vx wΒv
s qxs us us ts t ts xs |Βt
t qs us ty v s tz tx
图 u 二倍体中华芦荟染色体
k二倍体芦荟l
图 v 四倍体中华芦荟染色体
k四倍体芦荟l
#|vx#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²q{
∏ªqousst
图 w 不同倍体中华芦荟形态特征比较
t q四倍体 u q二倍体
3 讨论
3 q1 芦荟繁殖一般用侧芽插条进行 o但是生根时间
长 o出侧芽系数小 o不能满足大面积栽培和推广 ∀如
用组织培养快速繁殖法 ot年内可培育出数以万计
的植株 ∀
3 q2 利用快繁技术 o不仅可缩短育种年限 o而且可
使新品种在短时期内得以推广应用 ∀
3 q3 中华芦荟 !库拉索芦荟及其 w倍体都可在 ≥
n u qs °ª#pty2
n s qu°ª#p t 的培养基中
分化成苗 o并快速增殖 ∀
3 q4 利用秋水仙素作诱导剂 o在无菌条件下采用浸
泡处理可培育出多倍体 ∀其中以丛生芽浸入 s qx h
的秋水仙素溶液 uw «效果最好 o不但诱导率高
kxs h l o且获得的多倍体纯合体与嵌合体比为 |Βt ∀
3 q5 由于药用植物多倍体育种对增加产量和化学
成分含量 o对培育具有利生物学特性的新品种 o具有
极大的潜力 ∀而药用芦荟多倍体育种至今还属空
白 ∀因此 o我们希望对中华芦荟和库拉索芦荟进行
多倍体诱导 o获得多倍体植株 o经过进一步的研究 o
选育优质 !高产量的芦荟新品种 ∀
≈参考文献
≈t 肖志艳 q芦荟属植物的化学成分 q国外医药#物药分册 ot||t o
tykxl }u|u q
≈u 张镜清 q芦荟 q生物学通报 ot||| ovwkttl }ww q
≈v 谢启昆 q药用植物组织培养 q上海 }上海科学出版社 ot|{x qtux q
≈w 袁阿兴 o康书华 o覃 凌 q斑纹芦荟中芦荟苦素的分离鉴定 q中
国中药杂志 ot||t otykxl }u|u q
≈责任编辑 王康正
不同产地冬虫夏草腺苷含量的测定
夏文娟t o曾晓英u o袁海龙v o尹定华t o杨大坚t o秦松云t o肖小河v
kt q重庆市中药研究院 o重庆 wsssyx ~
u q广东太阳神集团公司 o广东 广州 xtsyus ~v q中国人民解放军第 vsu医院药学部 o北京 tsssv|l
≈摘要 目的 }评价不同产地冬虫夏草的药材内在质量 ∀方法 }以腺苷含量作为评价冬虫夏草内在质量的主
要指标 o以高效液相法测定来源于 tv个产地的优质冬虫夏草的腺苷含量 ∀结果 }tv个产地冬虫夏草的腺苷含量为
s qtwux ∗ s qv|yy °ª#ªp t o其中藏草腺苷含量高于川草 ~在川草中 o炉草腺苷含量高于滇草 o灌草最低 ∀结论 }产地
不同 o冬虫夏草的腺苷含量不同 ∀在商品虫草两大类型k道地品牌l中 o藏草优于川草 o川草中又以炉草为胜 ∀
≈≈关键词 冬虫夏草 ~高效液相色谱 ~腺苷
≈中图分类号 u{u qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstls{2sxws2sv
冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草 Χορδψχεπσ
σινενσισ k
¨ µ®ql ≥¤¦¦q寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上
的子座及幼虫尸体的复合体 o具有补肺益肾 !止血化
痰等功效 ∀冬虫夏草是我国特有的珍稀名贵药材 o
主产于四川 !西藏 !青海 !云南等省区 o生长在海拔
v sss ∗ x sss °的高寒山区 !草原 !河谷和草丛 ∀在
商品虫草药材中 o产于西藏北部的称为藏草 ~产于川
西北和滇西高寒地带的称为川草 o川草因地域不同
≈收稿日期 usss2sz2sv
细分为炉草k产于四川巴塘 !里塘一带l !灌草k产四
川松番一带l !滇草k产滇西一带l ~此外 o寄主昆虫种
的不同 o生长海拔高度不同 !冬虫夏草外部形态和内
在品质均表现出明显的差异 ∀为了阐明不同产地冬
虫夏草的药材道地性及其品质特点 o本文采用
°≤ 法分析了 tv个产地的冬虫夏草中主要有效
成分腺苷的含量 ∀
1 仪器与药品
1 q1 仪器 美国惠普公司 °ttss 液相色谱仪 o
#swx#
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∏ªqousst
±∃ 型铺板器 ∀硅胶 k青岛海洋化工厂l o⁄∃
zzss超声清洗器
1 q2 药品 腺苷k中国药品生物制品检定所l o甲醇
k光谱纯l o其它试剂均为分析纯 ∀
1 q3 实验材料 材料来源见表 t o均采自冬虫夏草
的主产区 ∀全部样品由尹定华研究员 !秦松云副研
究员提供并鉴定 ∀
表 t 冬虫夏草中腺苷的测定结果 °ª#ªp t
编号 产 地 道地虫草商品类型 腺苷含量 各类虫草腺苷含量平均值
t 四川康定县蛇海子 炉草 s qu|xu
u 四川康定县拆多塘 炉草 s qux|s
v 四川康定县雅家埂 炉草 s qtywz s quwyy
w 四川康定县白海子 炉草 s quzvy
x 四川康定县白马雪山 炉草 s quwsz
y 四川马尔康县木宗乡 灌草 s qtwvz
z 四川小金县日隆镇 灌草 s qtwux s qtyzz
{ 四川小金县宗德乡 灌草 s qutzs
| 云南中甸县 滇草 s quvss s qutxs
ts 云南丽江县 滇草 s qt|||
tt 西藏那曲比如县吾龙山 藏草 s qvzyx
tu 西藏那曲比如尼马龙乡 藏草 s qvvyu s qvy|{
tv 西藏那曲索县瓦喀山 藏草 s qv|yy
注 }ν u
2 薄层定性鉴别
取样品粗粉 u ªo置圆底烧瓶中 o加 |s h甲醇 ws
°¯ o回流提取 vs °¬±o过滤 o滤液回收甲醇 o残渣以
|s h甲醇 t °¯ 溶解 o作为供试品溶液 ∀另取腺苷对
照品适量 o用 |s h甲醇配成 t °ª# °¯ p t的对照品溶
液 ∀吸取上述供试品和对照品溶液各 x Λ¯ o分别点于
同一含 w h磷酸氢二钠的羧甲基纤维素钠溶液为粘
合剂的硅胶 ƒuxw薄层板上 o以氯仿2乙酸乙酯2异丙
醇2水2浓氨试液k{ΒuΒyΒs qvΒs qul为展开剂 o上行展
开 ts ¦° o取出 o晾干 o置紫外光灯kuxw ±°l下检视 ∀
结果表明各产地冬虫夏草薄层色谱基本一致 o均含
腺苷 ∀
3 腺苷含量测定
3 q1 色谱条件 ∞≤ ≥°∞ ∞≤t{ x Λ¯ kw qy ±°
k uxs °°l为固定相 o磷酸盐缓冲液k³y qxl≈取
s qst °²¯#pt磷酸二氢钠 y{ qx °¯ 与 s qst °²¯#pt
磷酸氢二钠 vt qx °¯ o混合k³ y qxl 2甲醇ktzΒvl为
流动相 o流速 t qs °¯ # °¬±p t o检测波长为 uys ±° ∀
理论板数按对照品峰计算 o应不低于 u sss ∀在以上
条件下 o样品分离状况良好 o见图 t !图 u ∀
3 q2 线性关系考察 精密称取干燥至恒重的腺苷
对照品 y qv °ª于 ux °¯ 容量瓶中 o加 |s h甲醇溶解
配制成 °¯ 含 s quxu °ª腺苷对照品的贮备液 ~分别
精密吸取 s qt os qu os qw os q{ ot qs °¯ 贮备液 o用 |s h
甲醇定容成腺苷浓度为 u qxu ox qsw ots qs{ ous qty o
xs qws Λª# °¯ p t的对照品溶液 o吸取对照品溶液 ts Λ¯
进样 o按测定条件测定峰面积 o以峰面积为纵坐标 o
浓度为横坐标进行回归分析 o得回归方程 } Ψ
|tvxxyu .tv Ξ p tz|u|w .{s , ρ s q|||v o线性范围为
s qsuxu ∗ s qxsw Λª∀
图 t 腺苷对照品色谱图
t q腺苷k图 u同l
图 u 冬虫夏草液相色谱图
#twx#
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∏ªqousst
3 q3 精密度试验 取对照品溶液 o重复进样 x次 o
每次 ts Λ¯ o对照品峰面积的 ΡΣ∆为 s qtv h ∀
3 q4 稳定性试验 取对照品溶液在 s ou ow oy o{ «
分别进样 ts Λ¯ o记录峰面积 o结果 x次进样腺苷峰面
积的 ΡΣ∆为 t qzx h o可见对照品溶液在 { «内较稳
定 ∀
3 q5 重复性试验 取 t号样品 o按含量测定项下方
法测定 x次 o结果其腺苷的平均含量为 s qu|xu °ª#
ªp t oΡΣ∆为 s .ywsu%( ν xl ∀
3 q6 加样回收率试验 取已知含量的 t号样品 s qx
ªo添加腺苷对照品适量 o按含量测定项下方法测定 o
x次测定的结果为k|{ qs| ? u qxwl h ∀
3 q7 含量测定 分别精密称定 t ∗ tv号冬虫夏草
粉末k过三号筛ls qx ªoo置圆底烧瓶中 o加入 |s h甲
醇 ts °¯ o回流提取 ys °¬± o过滤 o滤液回收甲醇 o残
渣用 |s h甲醇定容于 ts °¯ 容量瓶中 o用 s qwx Λ°
滤膜过滤 o取续滤液 o吸取 ts Λ¯ 进样 o按上述色谱条
件测定 o外标一点法计算含量 o结果见表 t ∀
4 结果分析
由表 t可见 o产区不同 o冬虫夏草的腺苷含量不
同 ∀产于西藏北部的藏草 o腺苷含量明显高于产于
川西北和滇西高寒地带的川草 ~在川草中 o炉草的腺
苷含量最高 o滇草次之 o灌草最低 ∀在商品虫草两大
类型k道地品牌l中 o传统认为藏草品质优于川草 o川
草中又以炉草为胜 o有一定的科学道理 ∀
上述 tv个产地的冬虫夏草腺苷含量均大于 s qt
°ª#ªp t o符合 usss年5中国药典6冬虫夏草项下要
求 o品质优良 ∀
≈参考文献
≈t 中国药典 q一部 qusss q{y q
≈u 彭国平 o李红阳 q冬虫夏草与人工蛹虫草的成分比较 q南京中
医药学大学学报 ot||y otukxl }uy q
≈v 龚 范 o彭源贵 o崔 卉 o等 q联用色谱用于冬虫夏草的化学成
分测定 q药学学报 ot||| ovwkvl }utw q
≈w 冯 颐 o傅莲英 q天然冬虫夏草与虫草菌提取液薄层对比试验 q
天津药学 ot||y o{kwl }|v q
≈x 李雪芹 o王 雁 o包天桐 q反相高效液相色谱法测定人工冬虫夏
草中腺苷的含量 q中国中药杂志 ot||| ouwktl }tu q
≈责任编辑 王康正
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