全 文 ：山茱萸多糖的化学研究
杨云 刘翠平 王浴铭 k河南中医学院 郑州 wxsssvl
刘建鑫 张智军 k河南豫东制药厂 商丘 wzysssl
摘要 目的 }研究山茱萸补益活性成分 ∀方法 }采用热水提取 o乙醇沉淀 o三氯醋酸除蛋白等步骤分
得粗多糖 o⁄∞„∞2纤维素及 ≥ ³¨«¤§¨ ¬Š2uss柱层析分离 o纯化 o高效凝胶渗透色谱鉴定纯度并测定分子
量 o薄层层析 o纸层析 o气相色谱 o气2质联用 o甲基化分析 o部分酸水解及tv ≤ ‘ • 确定多糖的化学结构 ∀
结果 }分离得到一水溶性多糖 ≤²2w o其分子量为 u qwz ≅ tsw o主链为 t ow2连接的 Β2 ∆2葡聚糖 o部分葡萄糖
残基 y位上有分枝 ∀结论 }首次对山茱萸多糖进行较深入的化学研究并阐明水溶性多糖 ≤²2w化学结
构 ∀
关键词 山茱萸 多糖 化学结构
山茱萸是我国传统常用的中药材 o具有补
肝肾 o涩精气 o固虚脱的作用 ∀有关山茱萸的化
学成分 o文献记载有熊果酸 o山茱萸甙 o獐芽菜
甙等≈t  o但关于其多糖的化学研究尚未见报道 ∀
在寻找山茱萸补益成分的研究中 o我们发现多
糖部分具有明显的增强免疫功能及抗衰老活
性 ∀因此对其进行了一系列化学及药理试验 o
本文报道山茱萸多糖的分离纯化及结构研究 ∀
1 材料和仪器
…∏¦®¨ µ ²§¨¯ „≤2wss 核磁共振仪 ∀ ‹°2
ts|s  高效凝胶渗透色谱k带 Š°≤ 软件l o‹°2
tsvz„示差折光仪 o均为美国惠普公司产品 ∀
Λ2…²±§¤ª¨¯ ∞2tsss柱为美国 • ¤·¨µ¶公司产品 ∀
…¬²2• ¤§高效液相色谱仪 k Ž≥2{sx 柱l o≥«¬2
°¤§½∏2|„ 气相色谱仪k’ ∂2uxx 柱l o „×2wwx
气2质联用仪k≥∞2xw交链石英毛细管柱l ∀
山茱萸药材购自河南省医药公司 o经鉴定
为山茱萸科植物山茱萸 Χορνυσ οφφιχιναλισ
≥¬¨¥q¨·∏¦¦q的干燥成熟果肉 ∀
≥ ³¨«¤§¨ ¬ Š系列为 °«¤µ°¤¦¬¤产品 o⁄∞„∞
纤维素k⁄∞2xul为 • «¤·°¤±产品 o≥ ³¨2°¤® ≤¤µ2
·µ¬§ª¨ 柱系美国 ¬¯¯¬³²µ¨ 公司产品 o各单糖标
准品和纤维素板均为  µ¨¦®产品 o标准葡聚糖
°∏¯ ∏¯¯¤± °2{u 系列为 ≥«²º¤§¨ ±¬¦²® Ž公司产
品 ∀
2 实验方法与结果
2 q1 提取分离及纯化
山茱萸干燥果肉以 |x h 乙醇回流脱脂 ∀
药渣干燥后以水k|s ∗ tss ε l提取 v次 o合并提
取液 o浓缩 ovs h oxs h o{s h 乙醇分级沉淀 ∀
{s h乙醇沉淀物加水溶解 otx h三氯醋酸脱蛋
白 o对水透析 o浓缩至 tru o{x h乙醇沉淀 o沉淀
物以无水乙醇 o丙酮 o乙醚相继处理 o°u’x 真空
干燥 o得粗多糖 ≤²2≤ ∀ ≤²2≤ 进行 ⁄∞„∞纤维素
柱层析 o分别以 ‹u ’ os ∗ u°²¯#pt‘¤≤¯梯度洗
脱 o苯酚2硫酸法检测 o合并单一峰位 ∀ ‹u ’ 洗
脱部位再经 ≥ ³¨«¤§¨ ¬Š2u ss反复柱层析 o
s qsu°²¯ #pt ‘¤≤¯洗脱 o洗脱液减压浓缩 o对
水透析 o透析液减压浓缩 o冷冻干燥得多糖 ≤²2
w ∀
2 q2 纯度及分子量测定
纯度测定 ≤²2w加 s qsu h ‘¤‘v 溶解 o滤
过 o滤液注入 Š°≤ 仪 o流动相 s qsu h ‘¤‘v o流
速 s qx °¯ # °¬±p t o洗脱峰为单一对称峰 o又经
‹°≤ 检测 os qsst°²¯#pt‘¤’ ‹ 洗脱 o结果相
同 ∀
分子量测定 先以 Š°≤ 测定各标准葡聚
糖 °∏¯ ∏¯¯¤± °2{u 系列k°2wss ouss otss oxs ous o
ts oxl在柱上的保留时间k洗脱条件同纯度测
定l o以 ²ª • k Ψ)对保留时间( Ξ)回归得回
归方程 Ψ € s .sy{{z Ξv p t .utz Ξu n y .tz Ξ p
w qsstk数据处理过程均由 Š°≤ 软件自动完
#wty# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 ts期
成l ∀测定 ≤²2w的保留时间 o从标准曲线求得
≤²2w的分子量为 u qwz ≅ tsw ∀ ≤²2w的 ‹°Š°≤
图谱见图 t ∀
图 t ≤²2w的 ‹°Š°≤ 图谱
2 q3 结构研究
2 q3 q1 层析及气相色谱分析 ≤²2wkw°ªl用
u°²¯#pt× ƒ„封管 otus ε 水解 t qx«o除去剩余
× ƒ„得 ≤²2w完全水解液 o取部分进行纤维素与
硅胶薄层层析及纸层析 o展开剂分别为醋酸乙
酯2吡啶2冰醋酸2水kxΒxΒtΒvl和正丁醇2吡啶2水
kyΒwΒvl≈u  o苯胺2邻苯二甲酸显色 o结果表明
≤²2w不含糖醛酸 ~另取 ≤²2w完全水解液 ‘¤…‹w
室温下还原 o冰醋酸中和后减压浓缩 o甲醇处理
多次 o抽干 otss ε 烘 tx°¬±o醋酐 v °¯ 乙酰化 o
甲苯处理 o减压浓缩至干 o氯仿溶解 o水洗涤多
次 o氯仿层无水硫酸钠干燥 o减压浓缩制成阿尔
迪醇乙酸酯衍生物k¤¯§¬·²¯ ¤¦¨·¤·¨l o以各种标准
单糖的阿尔迪醇乙酸酯衍生物为对照 o进行气
相色谱分析k见图 ul o结果表明 o≤²2w含有葡萄
糖 !木糖 !半乳糖和岩藻糖 o其摩尔比为 z qzxΒ
v q{{Βv qusΒt ∀
图 u 标准糖和 ≤²2w乙酸酯衍生物的 Š≤ 图谱
„ q标准糖 …q≤²2w乙酸酯衍生物 t q©∏¦²¶¨ u q¤µ¤¥¬±²¶¨
v q¬¼¯ ²¶¨ w q°¤±±²¶¨ x qª∏¯∏¦·²¶¨ y qª¯∏¦²¶¨
2 q3 q2 甲基化分析 ≤²2w按文献≈v 甲基化 o
再 |s h甲酸 tss ε 水解 w«ou°²¯#pt׃„水解
y«o水解液减压浓缩 o甲醇处理 o‘¤…‹w 还原 o
醋酐乙酰化 o得全甲基化阿尔迪醇乙酸酯衍生
物 o进行气2质联用分析k见表 tl ∀从表 t可看
出 ou ov2二甲基葡萄糖及 u ov oy2三甲基葡萄糖
的总摩尔比为 w{ qx h o说明 ≤²2w的主链为 t ow
连接的 Β2 ∆2葡聚糖 o部分葡萄糖残基 y位上有
分枝 o而 u ov ow oy2四甲基半乳糖 ou ov ow oy2四甲
基葡萄糖 ou ov ow2三甲基木糖 ou ov ow2三甲基岩
藻糖的检出说明支链中含木糖 o半乳糖 o葡萄糖
和岩藻糖 ∀
表 t ≤²2w和 ° ´2 ´的 Š≤2  ≥数据
甲基化糖 键类型
摩尔比k h l
≤²2w °Œ2Œ
u ov ow2  v¨2÷¼¯ ÷¼¯ kt ψ v q{xktx q|l u qz|ktu qxl
u ov ow2  v¨2ƒ∏¦ ƒ∏¦kt ψ t qsskw qtl
v ow2  u¨2÷¼¯ ψ ul÷¼¯ kt ψ v qsuktu qxl t qxtky q{l
u ov ow oy2  w¨2 Š¯ ¦ Š¯ ¦kt ψ t q{tkz qxl u qwskts q{l
u ov ow oy2  w¨2Š¤¯ Š¤¯kt ψ t qsskw qtl t qsskw qxl
u ov oy2  v¨2 Š¯ ¦ ψ wlŠ¯ ¦kt ψ x qu|kut q|l { quykvz qul
v ow oy2  v¨2Š¤¯ ψ ulŠ¤¯kt ψ t qz|kz qwl
u ov2  u¨2 Š¯ ¦ ψ wlŠ¯ ¤kt ψ y qwwkuy qyl y quyku{ qul
2 q3 q3 部分酸水解及其产物分析 ≤²2w
kuz°ªl以 s qt°²¯#pt × ƒ„tss ε 封管水解 t«o
除去多余 ׃„ o加水溶解 o≥ ³¨«¤§¨ ¬ Š2tx柱层
析 o水洗脱 o苯酚2硫酸法检测 o合并单一峰位 o
得 °Œ2Œ和 °Œ2ŒŒ∀ °Œ2Œ同法进行部分酸水解 o得
到 °Œ2Œ2„ ∀ °Œ2Œ2„和 °Œ2ŒŒ进行纸层分析 o条件
同 2 q3 q1 o结果均检出少量半乳糖和木糖 ∀部分
°Œ2Œ经 x次甲基化后用 ≥ ³¨2³¤® ≤¤µ·µ¬§ª¨ 柱层
析分离 o得到完全甲基化多糖 o制备全甲基化阿
尔迪醇乙酸酯衍生物 o进行气2质联用分析k见
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表 tl o结果表明 °Œ2Œ不含岩藻糖 o进一步提示
岩藻糖 !半乳糖和木糖为 ≤²2w 支链的组成部
分 o而侧链中葡萄糖因直接与主链相连 o在较温
和的条件下 o比五碳糖难水解则是纸层析未能
检出葡萄糖的原因之一 ∀
2 q3 q4 核磁共振鉴定 tv ≤ ‘ • k ×  ≥l∆ }
tsy qxk ≤2t oΒ2 ∆2Š¤¯l otsw qxk ≤2t oΒ2 ∆2 Š¯ ¦l o
tst qsk≤2t oΑ2 ∆2÷¼¯ l o{s q|xk≤2w oΒ2 ∆2 Š¯ ¦l o
yv qtk≤2y oΒ2 ∆2 Š¯ ¦l ot{ qtk≤ ‹v oƒ∏¦l≈w  ∀
综上分析 o≤²2w的主链为 t ow连接的 Β2 ∆2
葡聚糖 o部分葡萄糖残基 y位上有分枝 ∀其支
链组成为 }Α2 ∆2÷¼¯ kt ψ oΑ2 ∆2÷¼¯ kt ψulΑ2 ∆2÷¼¯
kt ψ oΒ2 ∆2 Š¯ ¦kt ψ oΒ2 ∆2Š¤¯kt ψ ulΑ2 ∆2÷¼¯ kt
ψ oƒ∏¦kt ψ ulΒ2 ∆2Š¤¯kt ψ ulΑ2 ∆2÷¼¯ kt ψ ~相
应摩尔比为 u q{Βt qsΒt q{Βt qsΒt qs ∀
3 讨论
对于多糖的纯度及分子量测定 o国内大多
文献采用凝胶过滤法或电泳 o而国外则越来越
多的采用 ‹°Š°≤ ∀本文采用 ‹°Š°≤ 测定山茱
萸多糖 ≤²2w的纯度及分子量 o结果进一步证实
‹°Š°≤ 具有快速 o高分辨 o重现性好及简便等
优点 ∀本文未对岩藻糖的构型进行进一步研
究 ∀此外 ≤²2w的药理活性正在进一步的研究
中 ∀
4 参考文献
t 黄泰康主编 q常用中药成分与药理手册 q北京 }中国医药科
技出版社 ot||w qvy{
u 张维杰主编 q复合多糖生化技术 q上海 }上海科学技术出版
社 ot|{y qtut
v ‘¨ §¨¶o‘¨ §¨¶° • o≥¨¯√ ±¨§µ¤± • • o¨·¤¯ q„√²¬§¬±ª ’¬¬§¤·¬√¨
⁄¨ ªµ¤§¤·¬²± ⁄∏µ¬±ª≥²§¬∏° ‹¼§µ²¬¬§¨  ·¨«¼¯ Œ²§¬§¨2  §¨¬¤·2
§¨ ≤¤µ¥²«¼§µ¤·¨  ·¨«¼¯ ¤·¬²± ¬± ⁄¬° ·¨«¼¯ ≥∏¯©²¬¬§¨ q ≤¤µ¥²2
«¼§µ¤·¨ • ¶¨¨¤µ¦«ot||v ouwxktl }t
w „ªµ¤º¤¯ ° Žq ‘ • ≥³¨ ¦·µ²¶¦²³¼ ¬± ·«¨ ≥·µ∏¦·∏µ¤¯ ∞¯ ∏¦¬§¤2
·¬²± ²© ’ ¬¯ª²¶¤¦¦«¤µ¬§¨¶ ¤±§ Š¯ ¼¦²¶¬§¨¶q °«¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼ o
t||u ovtktsl }vvsz
致谢 中国科学院上海药物研究所方积年研究员 !
董群副研究员对本实验给予了支持和帮助 o郑州轻工学
院孙雨安代测多糖纯度及分子量 ∀
t||{2tt2sy收稿
• °2‹°≤ 测定大黄栀子中
环烯醚萜甙类的含量
王钢力 赵淑杰 陈德昌
k中国药品生物制品检定所 北京 tsssxsl
摘要 目的 }测定大黄栀子中环烯醚萜甙类成分的含量 ∀方法 }采用反相高效液相色谱法 o以栀子
酸 !栀子甙和鸡矢藤次甙甲酯为对照品 ∀结果和结论 }栀子酸 !栀子甙和鸡矢藤次甙甲酯分别在 s qs|z
∗ s qysyΛªos qsyv{ ∗ v q||sΛªos qt|{ ∗ t quv|Λª线性良好 ∀v种成分的平均加样回收率分别为 tss qs h o
|| q| h otss qt h oΡΣ∆分别为 t .uv % ,t .v{ % ,t .xv %( ν € xl ∀
关键词 大黄栀子 环烯醚萜甙 ‹°≤
大黄栀子 Γαρδενιασοοτεπενσισ ‹∏·¦«q的果
实具有活血消肿之功效 o在傣族民间作为民族
药使用≈t  ∀山栀子 Γ . ϕασµινοιδεσ ∞¯ ¬¯¶的果实
是传统中药 o药理实验表明 o以栀子甙为代表的
环烯醚萜甙类成分为栀子的主要活性成分≈u  ∀
目前已有一些采用 ׏≤ 扫描或 ‹°≤ 法对这
类成分进行含量测定的报道 o但大多数方法都
不够理想 o如操作复杂 !保留时间太长 !分离未
能达到基线≈v o{  ∀本文建立的 • °2‹°≤ 法 o不
仅可以同时测定大黄栀子中所含的 v种环烯醚
萜类化合物k栀子酸 !栀子甙和鸡矢藤次甙甲
酯l的含量 o还可同时测定山栀子中所含的该类
#yty# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 ts期