全 文 ：丝的研究已积累了相当丰富的资料∀尤其是其
免疫药理学作用以及在慢性肝病中的应用受到
较广泛的关注∀本文虫草菌丝提取物及大鼠饲
喂虫草菌丝提取物后的药物血清对体外培养大
鼠枯否氏细胞生成 Œ2toŒƒ‘o× ‘ƒ 的实验结
果表明o细胞在虫草菌丝提取物及其药物血清
作用后o再由 ≤²± „ 所诱生的 Œ2toŒƒ‘ 及
× ‘ƒ 的量显著提高o尤以提高 Œ2t及 Œƒ‘为
著o且呈一定的剂量依赖性∀提示虫草菌丝对枯
否氏细胞功能确有一定的调整作用∀
Œƒ‘的作用较为明确o而 Œ2t在免疫或炎
症反应中起着传递信息!促使细胞分化繁殖等
多方面的作用o虫草菌丝提高枯否氏细胞生成
Œ2t的量可能与其调整慢性肝病患者的免疫机
能具有一定的关系∀这一点与小柴胡汤及柴胡
皂甙治疗慢性肝病的作用机制是类似的1w2∀
中药粗提物中非药效的成分对体外培养细
胞所造成的影响o一直是体外药效实验难以解
决的问题o有鉴于此o本文同时观察了动物体内
给药后分离的药物血清对细胞的作用o其得到
的结果既与药物提取物的作用基本一致o又更
具重复性和良好的稳定性∀其中yªÙ®ª体重给
药的药物血清提高细胞 Œ2t生成的量明显高
于任何一种剂量药物的直接添加效果∀
4 参考文献
t 刘成等q上海中医药杂志 t|{y~kylÚ vs
u 刘平等q上海中医学院 上海市中医药研究院学报
t|{|~vÚ ux
v 朱剑亮等q中国中西医结合杂志 t||u~tukwlÚ usz
w 尾关恒雄 他q汉方医学 t||t~txÚ uvy
t||x) su) tt收稿
汉防己甲素对阿霉素或长春新碱
耐药株人癌细胞的逆转抗药性作用
叶祖光 孙爱续 李兰芳 曹秀芳 叶文华
k中国中医研究院中药研究所 北京tsszssl
摘要 在敏感株和阿霉素耐药株  ≤ ƒ 2z和  ≤ ƒ 2zل §以及敏感株和长春新碱耐药株 Ž… 和
Ž…√uss两种人癌细胞的体外试验中o发现汉防己甲素对耐药细胞株的  ≤ ƒ2zل §具有明
显的选择性作用o而且基本上可以完全逆转  ≤ ƒ2zل §或Ž…√uss对阿霉素或长春新碱
的抗药性∀
关键词 汉防己甲素 阿霉素 长春新碱 Ž…细胞  ≤ ƒ 2z细胞
肿瘤细胞产生多药耐药性k ∏¯·¬§µ∏ª µ¨2
¶¬¶·¤±¦¨l是导致癌症化疗失败的主要因素之
一∀有试验证明o一些钙离子通道阻断剂能够有
效地逆转肿瘤细胞的多药抗药性1t2o目前越来
越多的证据表明中药汉防己的有效成分汉防己
甲素是一种钙离子拮抗剂1u2∀我们以前的试验
结果表明o汉防己甲素对体外培养的人恶性疟
原虫的抗药性具有逆转作用1v2∀最近有人证明
它对中国仓鼠卵巢细胞系的抗药性也具有逆转
作用1w2∀本文拟采用阿霉素耐药株的人乳腺癌
 ≤ ƒ 2zل §细胞以及长春新碱耐药株的人口
腔上皮样癌Ž…√uss细胞o在体外试验中进一步
研究汉防己甲素对人癌细胞抗药性的逆转作
用∀
1 材料与方法
111 药品与试剂 抗肿瘤药阿霉素和长春新
碱分别为中国浙江海门制药厂和北京医科大学
实验药厂的产品o两种药品均用生理盐水配制o
过滤除菌∀汉防己甲素为浙江金华制药厂的产
品o将其溶于酸水k³‹ € yl中o除菌过滤∀上述
药液在试验时用培养基配制成一系列的稀释
液∀蓝四氮唑k × × l为美国 ≥¬ª°¤公司的产
#|yv# 中国中药杂志 t||y年第ut卷第y期
品∀二甲基亚砜k⁄ ≥’ l为化学试剂级国产品∀
112 肿瘤细胞及其培养 人乳腺癌  ≤ ƒ2z细
胞及其阿霉素耐药株  ≤ ƒ 2zل §细胞源于美
国 ‘Œ≤ o它们均在含有 txh 小牛血清的 ⁄2
 ∞ 培养基内于vzε oxh ≤’ u恒温箱中培养o
人口腔上皮样癌Ž…细胞及其长春新碱耐药株
Ž…√uss细胞由中国医学科学院药物研究所提
供o用与上述同样条件在含有tsh 小牛血清的
• ° Œ tyws培养基中进行培养o用s1uxh 胰蛋
白酶消化传代或进行药物试验∀
113  × × 法测定药物的抗癌活性 取生长
良好的癌细胞o每孔加tssΛt的细胞悬液在|y
孔细胞培养板中培养过夜o次日加入含有不同
浓度试药的培养液o继续培养zu小时o然后
 × × 染色并用 …¬²2• ¤§ wxs型酶标仪xzs±°
处测定光吸收度o以未用药物处理的对照组的
吸收度平均值为tssh o算出试药各种浓度的抑
制率o并进而求出 Œ≤ xs∀
2 结果
211 单用阿霉素k„ ⁄• l!长春新碱k∂ ≤ • l或
汉防己甲素k× × l的抗癌活性 单用阿霉素对
药物敏感株  ≤ ƒ 2z和耐药株  ≤ ƒ2zل §的抗
癌效价 Œ≤ xs分别为s1xwovs1wxΛ° ²¯Ùk见表
tl∀二者相差约xy倍∀单用 ∂ ≤ • 对药物敏感株
Ž…和耐药株Ž…√uss的 Œ≤ xs分别为s1ys±° ²¯Ù
和t1|sΛ° ²¯Ùo二者相差约vsss倍k见表ul∀单
用 × × 时o它对耐药株  ≤ ƒ2zل §的 Œ≤ xs明显
地低于对药物敏感株  ≤ ƒ 2z的 Œ≤ xsk° s1sxo
见表tlo二者的比值为v1xkvw1{vÙ|1|xl∀这说
明 × × 对  ≤ ƒ 2zل §癌细胞的抗癌活性显著
地强于它对  ≤ ƒ 2z的作用∀在Ž…细胞系的试
验中o× × 对耐药株 Ž…√uss的 Œ≤ xs也低于它对
药物敏感株的 Œ≤ xsk见表ulo但二者没有显著性
差异k° s1sxl∀
212 在联合用药中 × × 的逆转抗药性作用
当用vv±° ²¯Ùos1tsos1vvot1ssΛ° ²¯Ùw个不
同浓度的 × × 分别和 „ ⁄• 联合用药时o„ ⁄•
对耐药株  ≤ ƒ2zل §的 Œ≤ xs随着 × × 浓度的
增加而降低k见表tlo当t1ssΛ° ²¯Ù的 × × 和
„ ⁄• 联合用药时o„ ⁄• 的 Œ≤ xs为s1uxΛ° ²¯Ùo
该值甚至低于单用 „ ⁄• 对该药的敏感株
 ≤ ƒ2z的 Œ≤ xsks1xwΛ° ²¯Ùlo图t清楚地表明o
s1tsΛ° ²¯Ù× × 和 „ ⁄• 合并用药的剂量2反
应曲线开始向左偏移o而t1ssΛ° ²¯Ù的 × × 和
„ ⁄• 合并用药的剂量2反应曲线则进一步向左
移动以致和单用 „ ⁄• 对  ≤ ƒ2z的剂量2反应
曲线完全重合或甚至向左超出之∀
表t × × 和 „ ⁄• 联合用药
对  ≤ ƒ 2z耐药株细胞的作用kŒ≤ xsl
Λ° ²¯Ù
药 物 剂 量  ≤ ƒ 2z  ≤ ƒ 2zل §
× × vw1{v |1|xtl
„ ⁄• s1xw vs1wx
„ ⁄• n × × s1svv t{1sv
„ ⁄• n × × s1tss tw1uw
„ ⁄• n × × s1vvs {1xt
„ ⁄• n × × t1sss s1ux
注}tl汉防己甲素对  ≤ ƒ 2z和  ≤ ƒ 2zل §两株细胞的 Œ≤ xs
值有显著的差异k° s1sxl
表u × × 和 ∂ ≤ • 联合用药
对Ž…耐药株细胞的作用kŒ≤ xsl
Λ° ²¯Ù
药 物 剂 量 Ž… Ž…√uss
× × x1xw w1vt
∂ ≤ • s1sssy t1|s
∂ ≤ • n × × s1svv tu1{s
∂ ≤ • n × × s1tss s1{x
∂ ≤ • n × × s1vvs s1u{
∂ ≤ • n × × t1sss s1sszy
在Ž…细胞系的试验中o× × 和 ∂ ≤ • 的联
合用药也呈现与上述相类似的逆转作用k见表
ul∀vv±° ²¯Ù的 × × 和 ∂ ≤ • 联合用药完全没
有任何逆转作用o其 Œ≤ xs反而显著地大于单用
∂ ≤ • 的 Œ≤ xs∀然而o当s1tsos1vvot1ssΛ° ²¯Ù
的 × × 分别和 ∂ ≤ • 联合用药时o ∂ ≤ • 对
Ž…√uss的 Œ≤ xs随 × × 浓度增加而减少o当
t1ssΛ° ²¯Ù的 × × 和 ∂ ≤ • 联合用药时o∂ ≤ •
的抗癌活性与单用 ∂ ≤ • 相比提高了约uxs倍
kt1|sÙs1sszylo而且联合用药的 ∂ ≤ • Œ≤ xs已
接近于单用 ∂ ≤ • 对Ž… 的 Œ≤ xs∀在图u中可以
#szv# 中国中药杂志 t||y年第ut卷第y期
清楚地看到o联合用药对 Ž…√uss的剂量2反应
曲线随 × × 浓度的增加而逐渐向左偏移o并接
近于 ∂ ≤ • 对Ž…的剂量2反应曲线∀
图t 汉防己甲素和阿霉素
联合用药对耐药株  ≤ ƒ 2zل §的抗癌作用
„ 1单用阿霉素对药物敏感株  ≤ ƒ 2z细胞 …1单用阿霉素对
耐药株  ≤ ƒ 2zل §细胞 ≤ 1s1tΛ° ²¯Ù汉防己甲素和阿霉
素联合用药对耐药株  ≤ ƒ 2zل §细胞 ⁄1t1sΛ° ²¯Ù汉防
己甲素和阿霉素联合用药对耐药株  ≤ ƒ 2zل §细胞
图u 汉防己甲素和长春新碱
联合用药对耐药株Ž…√uss的抗癌作用
„ q单用长春新碱对药物敏感株 Ž…细胞 …q单用长春新碱对
耐药株 Ž…√uss细胞 ≤ qs1tΛ° ²¯Ù汉防己甲素和长春新碱
素联合用药对耐药株 Ž…√uss细胞 ⁄qs1vΛ° ²¯Ù汉防己甲
素和长春新碱素联合用药对耐药株 Ž…√uss细胞 ∞q
t1sΛ° ²¯Ù汉防己甲素和长春新碱素联合用药对耐药株
Ž…√uss细胞
3 讨论
× × 是中药汉防己的有效成分o现代药理
学研究证明它具有抗炎和心血管方面的生物活
性1xoy2∀在本试验中o发现 × × 虽然本身抗癌活
性与已知抗癌药 „ ⁄• 和 ∂ ≤ • 相比较弱o但它
对耐药株人癌细胞具有特殊的选择性抗癌作
用∀这在  ≤ ƒ 2z细胞系的体外试验中表现得尤
为明显∀× × 对  ≤ ƒ2zل §的抗癌效价约为它
对  ≤ ƒ2z的v1x倍o我们以前在抗疟体外试验
中已经发现 × × 对抗氯喹株人恶性疟原虫具有
明显的选择性作用1z2∀× × 对抗药性恶性疟的
抗疟效价是其对药物敏感株恶性疟的u∗ x倍∀
不仅如此o我们在抗疟试验中还发现 × × 具有
抗疟增敏作用1v2∀本试验结果证明o× × 对耐药
株的人癌细胞具有逆转抗药性的作用∀无论是
用 „ ⁄• 的耐药株  ≤ ƒ2zل §细胞o还是用
∂ ≤ • 耐药株Ž…√uss细胞进行实验o× × 和相应
的抗癌药 „ ⁄• 或 ∂ ≤ • 合并用药时o均显示出
较强的逆转活性∀× × 的逆转活性有效浓度范
围 为 s1ts ∗ t1ssΛ° ²¯Ù∀ 如 果 说 s1tso
s1vvΛ° ²¯Ù的 × × 在联合用药中仅能部分逆
转癌细胞的抗药性o那么t1ssΛ° ²¯Ù的 × × 基
本上可以tssh 地逆转癌细胞的抗药性∀在试验
中ot1ss∗ u1ssΛ° ²¯Ù的 × × 单用时对体外培
养的  ≤ ƒ 2z和 Ž… 细胞系的生长基本上没有
任何抑制作用∀
肿瘤细胞多药耐药性的产生机理之一是由
于一种细胞膜中的糖蛋白) ) tzsŽ§的 °2糖
蛋白过度表达1{2∀上述试验结果提示o× × 可能
是作用于 °2糖蛋白从而表现出选择性抗癌作
用和逆转抗药性作用∀在本试验中o× × 对
 ≤ ƒ2z细胞系的选择性抗癌活性以及逆转抗
药性作用均强于它对Ž… 细胞系的活性o这可
能和两个细胞系的生物学差异有关o也可能和
两种耐药株细胞的抗药性产生机理不尽相同有
关∀
4 参考文献
t × ¶∏µ∏² × ·¨¤¯q ≤ ¤±¦¨µ• ¶¨ t|{t~wtÚ t|yz
u 方达超等q中华医学杂志 t|{v~yvÚ zzu
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z ≠ ¨  ·¨¤¯q …¬²¦«¨ ° …¬²³«¼¶• ¶¨≤ ²°°∏± t|{|~tx|Ú
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{ ≤ ²µ±º ¨¯¯   ·¨¤¯q °µ²¦‘¤·¯ „ ¦¤§ ≥¦¬˜ ≥„ t|{y~
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t||x) sz) t{收稿
#tzv# 中国中药杂志 t||y年第ut卷第y期