全 文 ：肾茶对阿霉素肾病大鼠血清 NF- KB、 IL- 8水平的干预研究
王丽敏 ,王　蕾 ,徐海波 ,张颖杰 ,张　岩
(佳木斯大学附属第一医院儿科 ,黑龙江 佳木斯 154003)
摘要: 目的 : 观察肾茶对阿霉素肾病大鼠外周血中核因子 - KB ( Nuclear factor- KB, NF- KB)、白细胞介素 - 8
( Interleukin- 8, IL- 8)表达的影响 , 探讨肾茶治疗肾病综合征 ( Nephrotic Syndrome, NS)的可能机制。方法: 40只 Wistar雄
性大鼠随机分为两组:正常组 ( n= 10)注射生理盐水 0. 5mL ,肾病组 ( n= 30)尾静脉单次注射阿霉素 5mg /kg (用生理盐水溶解
至 0. 5m L)制备 NS模型。注射后第 7天检测所有大鼠 24h蛋白尿 ,尿蛋白> 30mg /24h者为 N S模型成功。将模型成功的肾病组
再随机分为两组: 肾病组 ( n= 10)、肾茶组 ( n= 10)。肾茶组在造模成功后第 7天开始灌胃给药 5m L /kg ,正常组和肾病组给予等
量生理盐水灌胃。第 7、 21、 42天测各组大鼠 24h尿蛋白定量 (免疫比浊法 )及外周血单个核细胞提取物 N F- KB(酶联免疫吸附
法 )及其上清液 IL- 8(酶联免疫吸附双抗体夹心法 )的变化。结果: ①肾病组 24h尿蛋白定量、 N F- KB及 IL- 8含量均高于正
常组和肾茶组 ,有显著性差异 (P < 0. 01)。②肾茶组 24h尿蛋白定量、 NF- KB及 IL- 8含量均比肾病组明显下降 ,有显著性
差异 (P < 0. 01)。③肾病组和肾茶组的 24h尿蛋白、 NF- KB、 IL- 8两两之间呈直线相关性 (P < 0. 01)。结论:肾茶可能直接
或间接抑制 N F- KB,降低 IL- 8水平 ,减轻尿蛋白 ,从而延缓疾病进展。
关键词: 阿霉素肾病 ; N F- KB; IL- 8;肾茶 ;蛋白尿
中图分类号: R285; R692　文献标识码: A　文章编号: 1008- 0104( 2013) 01- 0019- 02
　　肾病综合征 ( nephro tic syndrome, N S)是指由多种病因
引起的 ,以大量蛋白尿 ( 24h尿蛋白> 0. 05g /kg )、低白蛋白
血症 (血浆白蛋白 < 30g / L)、高度水肿、高脂血症 [1]为主要临
床表现的一组综合征 ,是儿科临床常见病、多发病 ,微小病变
型肾病是儿童肾病综合征最常见的类型 ,其病理生理改变为
肾小球基膜通透性增加伴肾小球滤过率降低。现有治疗方案
以激素为主 ,存在疗程长、副作用多、易复发、患者依从性差
等缺点 ,严重威胁患儿的健康。NS的发病机制与多种因子有
关 , NF- KB是参与基因转录的蛋白质分子之一 ,广泛存在
于机体各种组织细胞中 [2] ,且当细胞受到外界因素刺激时 ,
胞质内 NF- KB与抑制蛋白 ( IK- BS )分离并活化 ,进入细
胞核内与 DN A结合启动基因转录 ,调节包括细胞因子和炎
症介质 (如 IL- 8、 IL- 2、 IL- 2a、 1L- 6、 V CAM、 ICAM、 E-
selectin、 IFN- B、 MCP- 1、 RAN TES等 )在内的众多蛋白质
表达。 IL- 8与靶细胞上特异受体结合 , 引起肾小球基底膜
硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 (分布于细胞膜与细胞外基质中 )分
解代谢增加 , 合成代谢减少 , 导致肾小球静电屏障破坏 ,从
而使大量带负电荷血浆清蛋白从肾小球基底膜漏出 , 产生
蛋白尿 [3]。肾茶又名猫须草 ,目前已从中分离出熊果酸、迷迭
香酸等多种成分。刘勇等 [4 ]研究表示 ,熊果酸能剂量依赖性
的抑制 CD3、 CD28单抗促发的 N F- KB P65细胞核转位 ,下
调 T细胞的作用。本研究拟建立阿霉素致 NS大鼠模型 ,检
测大鼠外周血中 N F- KB和 IL- 8的变化 ,并观察大鼠尿蛋
白的变化及探讨肾茶治疗 NS的可能机制。
1　 材料与方法
1. 1　 材料
1. 1. 1　 实验对象: 雄性 Wista r大鼠 40只 ,体重为 ( 120± 20)
g ,两次尿蛋白定性阴性 ,由大连医科大学实验动物中心提
供。
1. 1. 2　 药物及试剂: 盐酸阿霉素 (浙江省海正药业有限股
份公司 );肾茶 (泉州市医药公司 ) ; IL- 8试剂盒、核蛋白提取
试剂盒、 NF- KB试剂盒 (美国 Activemo tif公司 )。
1. 1. 3　仪器: 代谢笼、 DNX- 9620电脑洗板机、 DNM- 9602
酶标分析仪、电热恒温水温箱、 - 80℃超低温冰箱、自动旋转
振荡仪、离心机等均由佳木斯大学实验中心提供。
1. 2　 方法
1. 2. 1　 模型制备: 大鼠在佳木斯大学动物室适应性饲养一
周。随机分为两组: 正常组 ( n= 10)注射生理盐水 0. 5m L,肾
病组 ( n= 30)参照王峥等 [5]方法尾静脉单次注射阿霉素 5mg /
kg (用生理盐水溶解至 0. 5m L)制备 NS模型 ,注射后第 7天检
测所有大鼠 24h蛋白尿 ,尿蛋白> 30mg /24h者为 NS模型成
功。期间死亡 6只 ,不合格者 4只予以剔除。剩余肾病组再随机
分为两组: 肾病组 ( n= 10)、肾茶组 ( n= 10)。
1. 2. 2　 给药方法:肾茶组在造模成功后第 7天开始灌胃给
药 5mL /kg,正常组和肾病组给予等量生理盐水灌胃。
1. 2. 3　 各组大鼠 24h尿蛋白的测定: 在阿霉素注射后第 6、
20、 41天收集 24h尿液 ,用免疫比浊法检测 24h尿蛋白。
1. 2. 4　 各组大鼠 NF- KB、 IL- 8的测定: 第 7、 21、 42天大鼠
清晨空腹采静脉抗凝血 2mL ,用淋巴细胞分离液分离出单个
核细胞 , PBS制成 2× 106 /m L细胞悬液 ,用酶联免疫吸附法
检测外周血单个核细胞提取物 NF- KB;同时采集非抗凝血
1mL ,分离血清置于 - 80℃冰箱保存备用 ,取其上清液用酶
联免疫吸附双抗体夹心法检测 IL- 8。以上步骤严格按照说
明书进行操作。
1. 3　 统计学分析
应用 SPSS17. 0统计分析软件 ,实验结果用均数±标准
差 (x± s)表示。三组均数间比较用随机区组方差分析 ;两组
均数间差别用 t检验 ;相关分析采用 Pea rson直线相关析。
P < 0. 05有统计学意义。
2　 结果
2. 1　各组大鼠尿蛋白比较
见表 1。
表 1　 各组大鼠尿蛋白定量 (x± s, mg /24h, n= 10)
组　别 　　 7d 　 21d 　 42d
正常组 6. 59± 0. 33 6. 84± 0. 32 7. 17± 0. 30
肾病组 40. 85± 1. 15△ 101. 13± 11. 43△ 209. 4± 6. 20△
肾茶组 38. 46± 1. 26△ 92. 65± 7. 73△★ 100. 3± 4. 47△●
F值 　 3617. 37 　 417. 87 　 5246. 03
　　注: △与正常组比较 P < 0. 01 ;★与肾病组比较 P > 0. 05 ;●与
肾病组比较 P < 0. 01。
肾病组及肾茶组在第 7天尿蛋白均高于正常组
(P < 0. 01) ; 肾病组的尿蛋白在第 21～ 42天持续升高 ;第 21
天 肾茶 组尿蛋 白低 于同 期肾 病组 ,无 统 计学 差异
( t = 0. 07, P > 0. 05) ; 第 42天肾茶组尿蛋白低于同期肾病
组 ,有显著性差异 ( t = 5. 71, P < 0. 01)。
·19·HEILON GJIANG M EDICIN E AND PHARM ACY Feb. 2013, Vol. 36 No. 1　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
2. 2　 各组大鼠 NF- KB活性比较
见表 2。
表 2　各组大鼠 N F- KB活性 (x± s, OD值 , n= 10)
组　别 　　 7d 　　 21d 　　 42d
正常组 0. 168± 0. 032 0. 298± 0. 034 0. 302± 0. 022
肾病组 0. 406± 0. 022△ 0. 510± 0. 051△ 0. 721± 0. 031△
肾茶组 0. 345± 0. 032△ 0. 492± 0. 024△★ 0. 602± 0. 039△●
F值 　 179. 022 　 95. 222 　 477. 290
　　 注: △与正常组比较 P < 0. 01; ★　与肾病组比较 P > 0. 05; ●　与
肾病组比较 P < 0. 01。
肾病组及肾茶组在第 7天 N F- KB均高于正常组
(P < 0. 01) ; 肾病组的 NF- KB在第 21～ 42天持续升高 ;第
21天肾茶组 N F- KB低于同期肾病组 ,无统计学差异
( t = 0. 32, P > 0. 05) ; 第 42天肾茶组 NF- KB低于同期肾
病组 ,有显著性差异 ( t = 6. 54, P < 0. 01)。
3. 3　 各组大鼠 IL- 8浓度比较
见表 3。
表 3　 各组大鼠 IL- 8浓度 ( x± s, pg /m L, n= 10)
组别 　 7d 　 21d 　 42d
正常组 2825± 101 3174± 87 3410± 120
肾病组 3759± 75△ 3955± 274△ 601± 68△
肾茶组 3509± 72△ 3754± 241△★ 3872± 49△●
F值 　 334 　 354 　 507
　　注: △与正常组比较 P < 0. 01; ★　与肾病组比较 P > 0. 05; ●　与
肾病组比较 P < 0. 01。
　　肾病组及肾茶组在第 7天 IL - 8均高于正常组
(P < 0. 01) ; 肾病组的 IL- 8在第 21天至 42天持续升高 ;第
21天肾茶组 IL - 8低于同期肾病组 , 无统计学差异
( t = 0. 08, P > 0. 05) ; 第 42天肾茶组 IL- 8低于同期肾病
组 ,有显著性差异 ( t = 3. 42, P < 0. 01)。
3. 4　 尿蛋白、 NF- KB和 IL- 8之间的相关分析
肾病组和肾茶组各组的 N F- KB与 IL- 8具有相关关
系 ( r = 0. 969, 0. 870, P均 < 0. 01); 正常组 NF- KB与 IL
- 8不具有相关关系 (r = 0. 160, P > 0. 05)。肾病组和肾茶
组各组的尿蛋白与 IL- 8具有相关关系 (r = 0. 972, 0. 874, P
均 < 0. 01); 正常组尿蛋白与 IL - 8不具有相关关系
( r = 0. 062, P > 0. 05)。
4　 讨论
微小病变型肾病以肾小球基膜通透性增加伴肾小球滤
过率降低为主要病理改变 ,大量蛋白尿为主要临床表现。长
期大量蛋白尿可加重肾脏的损害 ,故减少尿蛋白对治疗肾病
综合征至关重要。以往研究表明 , IL- 8与靶细胞上特异受体
结合后可破坏肾小球基底膜电荷屏障 ,导致大量蛋白尿的产
生。这与本实验研究相一致 ,肾病组尿蛋白与正常组和肾茶
组有显著性差异 (P < 0. 01) , 且肾病组的 IL- 8与尿蛋白具
有相关性 (P < 0. 01)。另有国外研究报道 [6 ] ,肾病综合征患
儿外周血单个核细胞 ( PBMCs )中 N F- KB活性与血浆 IL
- 8浓度呈正相关趋势。这与本实验结果相一致 ,说明在 N S
病理状态下 NF- KB活性水平与 IL- 8含量呈直线相关关
系 (P < 0. 01)。钟桴等 [7]研究发现 ,肾病患儿 NF- KB活性
高于正常儿童 , 提示原发性肾病综合征 NF- KB信号途径
过度活化。NF- KB的激活是许多病理状态的决定因素 ,参
与调节细胞凋亡、免疫应答、炎症反应等 [8 ] ,且 NF- KB活性
的增加可引起其下游因子之一 IL- 8的浓度增加 ,故通过抑
制 NF- KB活性水平逐渐成为相关疾病的治疗靶点 , 预期
可阻断疾病的发生和发展 [9 ]。
本研究发现 ,肾病大鼠 NF- KB及其下游因子之一 IL
- 8明显增高 ,尿蛋白与正常组大鼠也有显著性差异 ,三者之
间具有直线相关关系 ,提示通过抑制 N F- KB活性可降低肾
病大鼠的尿蛋白 ,从而为治疗 NS提供新的途径 ,这与钟桴
等 [7]研究相一致。大量文献报道 [10 ] ,肾茶具有利尿 ,抗炎 ,抗
菌 ,免疫调节等作用。本实验以肾茶为治疗组 ,结果显示肾茶
组的 NF- KB比肾病组明显减少 ,差异具有统计学意义 ,这
与刘勇 [4 ]等研究结果相一致 ,且肾茶组大鼠尿蛋白明显低于
肾病组 ,故肾茶可为治疗 NS提供新的途径。
综上所述 ,本实验通过肾茶抑制 N F- KB而抑制其下游
因子之一 IL- 8,从而减少尿蛋白的产生 ,治疗肾病综合症。
肾茶为单味中药 ,且对呼吸系统、神经系统无明显影响 ,循环
系统 [11]研究中 ,仅对麻醉犬的血压有暂时的降低作用 ,副作
用小 ,故肾茶可为治疗 N S提供新的治疗途径。但由于本实
验周期短 ,检测指标及实验动物例数有限 ,且 NS发病机制
复杂 ,影响疾病发展的因素众多 ,不易干预治疗 ,故本实验仅
为初步研究阶段。且 NF- KB在体内执行生理功能方面具有
重要作用 ,也是机体正常防御和修复的重要机制。因此 ,寻求
合理的给药间隔、方式、剂量 ,是否联合应用激素能更有效、
适当抑制 NF- KB,减少尿蛋白从而治疗肾病综合征等一系
列问题 ,将有待于以后的继续研究。
参考文献:
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(收稿日期: 2012- 12- 03)
基金项目: 佳木斯大学科研课题资助项目 ,编号: L2012- 047。
作者简介: 王丽敏 ( 1963～ )女 ,黑龙江佳木斯人 ,硕士 ,主任医师 ,教授 ,研究生导师。
通讯作者: 王蕾 ( 1985～ )女 ,河南焦作人 ,在读硕士研究生。E- mail: w wlllei@ 163. com。
(下转第 21页 )
·20·　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　黑龙江医药科学　 2013年 2月第 36卷第 1期
MRI在主动脉夹层中的诊断与应用
时建文 ,孟凡荣 ,张　健
(佳木斯大学附属第一医院 ,黑龙江 佳木斯 154003)
摘要: 目的:探讨 M RI对主动脉夹层的诊断与临床应用价值。方法: 搜集主动脉夹层 40例 ,分析其 MRI表现。结果: 主动脉
夹层诊断准确率 100% , M RI表现为: ( 1)不同信号双腔影 ; ( 2)剥离的内膜片 ; ( 3)内膜破口。结论: M RI能够对主动脉夹层作出
快速、安全的诊断 ,并为临床治疗提供详尽、可靠的信息 ,是主动脉夹层的首选无创性检查方法。
关键词: 主动脉夹层 ; 核磁 ; 诊断 ; 价值
中图分类号: R445. 2; R543. 1　文献标识码: B　文章编号: 1008- 0104( 2013) 01- 0021- 02
　　主动脉夹层 ( ao rtic dissection, AD)指由各种原因造成的
主动脉壁内膜破裂 ,血液通过内膜的破口进入主动脉壁中层
而形成血肿 ,导致血管壁分层 ,剥离的内膜片分隔形成“双腔
主动脉” [1]　。主动脉夹层是心血管疾病中危重症之一 ,虽然
发病率较低 ,但发病急剧 ,进展迅速 ,死亡率很高。因此对主
动脉夹层进行及时准确的诊断、全面完整的确定病变信息是
及时有效治疗和降低病死率的关键。目前彩超、 DSA、 SCT A、
螺旋 CT、M RI等都可用于对主动脉夹层的诊断 ,但 M RI在
主动脉夹层的诊断和指导临床治疗中体现出了极大的优
势 [2, 3]。
1　一般资料
随机选取 2011- 03～ 2012- 10在佳木斯大学附属第一
医院确诊的主动脉夹层患者 M RI影像资料 40例 ,其中男 29
例 ,女 11例 ,年龄 23～ 84岁 ,平均 56岁。临床表现: 40例表现为
胸痛或心前区呈撕裂样、持续性痛 , 7例向背部放射 ; 3例表现
为上腹痛 ; l例胸背腰左下肢序贯性疼痛 , l例咽部梗阻感 ; 1
例腹部搏动性疼痛。
2　检查方法
使用佳木斯大学附属第一医院 M RI室的 GE Signa
Contour 3. 0T核磁共振扫描仪器 ,呼吸和心电门控 ,体表线
圈。所有患者例均作 SE轴位、矢状位、冠状位、垂直于室间隔
心脏短轴 T1WI序列扫描 ,层厚 4～ 6mm,层间距 1mm。cine
M RI多数以垂直于室间隔心脏轴位并能完整显示主动脉全
程的层面为基础 ,多采用冠状位 ,单层快速多相位回转梯度
回波 ( FM PGR)采集 ,获取一个心动周期内不同角度不同的
时相图像 15～ 30帧 ,然后用心脏电影软件 ( Paging )观察心脏
大血管内血流影像。
(上接第 20页 )
The intervention study of Cl erodendranthus spicatus on NF- KB
and IL- 8 level of rats with adriamycin nephropathy
W ANG Li-min,W ANG Lei , XU Hai-bo, Z HANG Ying-jie, Z HANG Yan
( Department of Pediat rics, First Af filiated Hospi tal of Jiamusi Univ ersi ty, Jiamusi 154003, China)
Abstract: Objective: To observ e the effects of Clerodendranthus spicatus on nuclear factor - KB ( N F-
KB ) and interleukin - 8 ( interleukin - 8, IL- 8) expression in peripheral blood of rats with adriamycin
nephropathy, and to explo re the possible mechanisms of the Clerodendranthus spicatus t reatment of neph rotic
syndrome ( neph rotic syndrome, N S) .Methods: Fo rty Wistar rats w ere random ly divided into 2 groups: normal
g roup( n= 10) were injected wi th saline( 0. 5mL) , Nephropathy g roup( n= 30) received single tail v ein injection
of adriamycin ( w ith physiological saline solution to 0. 5mL) in 5mg /kg to build NS model. 24hours urine
protein w as detected in all rats on the Seventh days after injection. Those wi th urine protein> 30mg /24h
became successful N S model. The successful modeling rats w ere randomly divided into 2 groups: Neph ropathy
g roup( n= 10) , and Clerodendranthus spicatus g roup( n= 10) . The Clerodendranthus spicatus g roup w as giv en
intrag astric administ ration in 5ml /kg on 7d af ter modeling success, and the normal g roup and neph ropathy
g roup w ere giv en the same amount of saline lav age. On 7d, 21d, 42d, 24 hours urine protein quantity( Immune
turbidimetry ) , peripheral blood monouclear pro tein ex t ract N F- KB ( ELISA) and supernatant of IL- 8 (
ELISA double antibody sandwich method) of all the rats w ere tested to find the changes. Results:① Compared
w ith the normal group and the spicatus group, the quanti tate of 24 hour urine protein, N F- KB and IL- 8 in
the nephropathy g roup increased significantly (P < 0. 01) . ② Compared with the nephropathy g roup, the
quantity of 24 hour urine protein, N F- KB and IL- 8 in the spicatus g roup reduced significant ly (P < 0. 01) .
③ The 24- hour urine pro tein w as linear correlated with N F- KB and IL- 8 in nephropathy g roup and spicatus
g roup. Conclusions: Clerodendranthus spicatus may direct ly or indirectly inhibi t NF - KB, reduce urinary
protein, and therefo re delay the prog ression of disease.
Key words: adriamycin nephropathy; N F- KB; IL- 8; Clerodendranthus spicatus; proteinuria
·21·HEILON GJIANG M EDICIN E AND PHARM ACY Feb. 2013, Vol. 36 No. 1