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炙甘草汤对气血两虚心律失常大鼠血流动力学的影响
陈兰英1 ,2 3 ,罗 　雄2 ,胡瑞刚2 ,龚 　琴1 ,罗颖颖1 ,胡宏辉1 ,陈 　奇2
(11 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 ,江西 南昌 　330006 ; 21 江西中医学院 ,江西 南昌 　330006)
摘　要 :目的 　观察炙甘草汤对气血两虚心律失常大鼠的血流动力学指标的影响。方法 　在放血和环磷酰胺并用
致使大鼠气血两虚的基础上 ,用乌头碱诱导大鼠气血两虚心律失常模型 ,观察炙甘草汤对气血两虚型心律失常大
鼠血流动力学的影响。结果 　炙甘草汤能够明显改善气血两虚心律失常大鼠的左心室压最大上升速率 ( + d p/
d tmax ) 、左心室压最大下降速率 ( - d p/ d tmax ) 、动脉收缩压 (SBP) 、动脉舒张压 (DBP) 以及平均动脉压 (MBP) 等
血流动力学指标。结论 　炙甘草汤可能是通过改善大鼠的血流动力学指标起到改善气血两虚心律失常的作用。
关键词 :炙甘草汤 ; 心律失常 ; 气血两虚 ; 血流动力学
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921438203
　　炙甘草汤由炙甘草、生姜、桂枝、人参、生地黄、
阿胶麦门冬等药物组成 ,原方出自东汉张仲景的《伤
寒论》,是治疗“脉结代、心动悸”的经典名方。气血
亏虚导致的心律失常在临床上很常见 ,临床研究表
明 ,气虚会导致心脏的顺应性降低、心肌的收缩和舒
张功能下降等一系列血流动力学障碍[1～3 ] 。本实验
试从补气的角度观察炙甘草汤对气血两虚型心律失
常大鼠血流动力学的影响。
1 　材料与方法
111 　药物 :炙甘草汤原药材购于江西中医学院附属
医院中药房 ,经江西中医学院中药鉴定教研室鉴定 ,
均符合《中国药典》2005 年版标准 ,将购得的炙甘草
汤原药材加入适量的冷蒸馏水浸泡 015 h ,然后用
武火加热 ,待沸腾后再用文火煎煮 1 h ,重复 3 次 ,
合并 3 次水煎液 ,加入阿胶烊化 ,滤过 ,浓缩至含生
药 214 g/ mL ,4 ℃储藏备用 ,现用现配。
112 　动物 : SPF 级 SD 大鼠 110 只 ,雄性 ,体质量
(200 ±20) g ,由上海西普尔2必凯实验动物有限公司
提供 ,动物质量合格证号为 SCXK(沪) 200820016。
113 　试剂 :环磷酰胺 (江苏恒瑞医药股份有限公
司) 、乌头碱 (中药固体制剂制造技术国家工程研究
中心中工对照品研究室提供) 。
114 　仪器 : Swelab 血球仪 (瑞典) 、Powerlab 电生
理记录仪 (澳洲艾德) 、Sysmex 全自动生化分析仪。
115 　方法
11511 　分组 :所有 SD 大鼠适应性喂养 1 周后 ,戊
巴比妥钠 (40 mg/ kg) [4 ] 麻醉 ,用 Powerlab 电生理
记录仪采集心电图 ,筛选出心电图正常的大鼠。将
心电图正常的 75 只大鼠随机分为对照组、乌头碱
组、气血两虚 + 乌头碱组 (模型组) 、炙甘草汤高剂
量组以及炙甘草汤低剂量组 ,每组 15 只大鼠。
11512 　造模及给药 :模型组大鼠 ,在实验的第 1～9
天 ,每隔 1 天眼眶后静脉放血 516 mL/ kg[ 5～8 ] ,在实
验的第 2～8 天 ,每隔 1 天 ip 0. 4 % 环磷酰胺 (20
mg/ kg) [8 ]生理盐水溶液 ,首剂加倍 (40 mg/ kg) ;于
实验第 9 天用 20 % 乌拉坦 (11 2 g/ kg) 麻醉后 ,左
心室插管和股动脉插管 ,然后舌下 iv 0. 002 % 乌头
碱 (10μg/ kg) [6 ]的生理盐水溶液诱导心律失常 ,并
同步观察血流动力指标的变化。对照组和乌头碱组
的大鼠以相同体积的生理盐水代替药物 ,乌头碱组
大鼠在实验的第 9 天舌下 iv 乌头碱诱导心律失常。
炙甘草汤高剂量组和低剂量组大鼠的造模方法与观
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3 收稿日期 :2009204209　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家“十一五”科技支撑计划资助项目 (2006BAI08B04210)
作者简介 :陈兰英 (1966 —) ,女 ,博士 ,教授 ,研究方向为中药药效评价及作用机制研究。
Tel : (0791) 7119611 　E2mail : clyxy2513 @163. com
察指标同模型组 ,并从实验第 1 天开始每天 ig 炙甘
草汤水煎液 ,连续 9 d ,高剂量为生药 24 g/ kg ,低剂
量生药 12 g/ kg。
11513 　观察指标 : 大鼠心律失常的潜伏时间、维
持时间 ; 同步观察血流动力学和心电图的变
化情况。
116 　统计学方法 :应用 SPSS 1115 统计软件进行
数据分析 ,计量资料是比较采用 One2Way ANOVA
分析。
2 　结果
211 　心律失常的变化情况 :从表 1 可知 ,用乌头碱
诱导心律失常后 ,与乌头碱组比较 ,模型组大鼠的心
律失常潜伏时间显著缩短、维持时间明显延长。炙
甘草汤高、低剂量组在造模的同时给予炙甘草汤后 ,
心律失常的潜伏时间较模型组明显延长、维持时间
较模型组显著缩短。
212 　血流动力学变化 :见表 2 和 3。同步观察的血
流动力学图和心电图结果显示 ,模型组大鼠造模后
左心室收缩压 (LVSP) 、左心室舒张末期压 (L V2
EDP) 、左心室压最大上升速率 ( + d p/ d tmax ) 、左心
室压最大下降速率 ( - d p/ d tmax ) 、动脉收缩压
(SBP) 、动脉舒张压 ( DBP) 以及平均动脉压
(MBP) 与对照组和乌头碱组比较 ,差异有显著性意
义 ( P < 0105) ;炙甘草汤高、低剂量组大鼠与模型组
比较 ,各项指标均差异显著 ( P < 0105) 。
表 1 　炙甘草汤对气血两虚心律失常大鼠的影响
( x ±s , n = 15)
Table 1 　Effect of Zhigancao Decoction on arrhythmla rats
with syndrome of def iciency of both Qi and blood
( x ±s , n = 15)
组　别 剂量 潜伏时间/ min 维持时间/ min
对照 　　- 　　- 　　　-
乌头碱 10μg ·kg - 1 101 06 ±5100 3 371 80 ±16191 3 3
模型 10μg ·kg - 1 31 72 ±1187 681 90 ±19146
炙甘草汤 24 g ·kg - 1 91 54 ±3113 3 171 21 ±17181 3 3
12 g ·kg - 1 91 09 ±4129 3 191 25 ±17168 3 3
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
表 2 　炙甘草汤对气血两虚心律失常大鼠血流动力学的影响 ( x ±s , n = 15)
Table 2 　Effect of Zhigancao Decoction on hemodynamics indexes of arrhythmia rats with syndrome
of def iciency of both Qi and blood ( x ±s , n = 15)
组　别 剂量 L VSP/ mm Hg L V EDP/ mm Hg + d p/ dtmax/ (mm Hg ·s - 1) - d p/ d tmax/ (mm Hg ·s - 1)
对照 　　- 178105 ±261 92 3 01 11 ±31 38 3 3 11 3421 75 ±2 9571 46 3 - 7 381175 ±2 032131 3 3
乌头碱 10μg ·kg - 1 176120 ±301 82 3 01 07 ±31 39 3 3 10 8451 98 ±2 8501 33 3 - 7 686121 ±1 866195 3
模型 10μg ·kg - 1 129129 ±221 46 51 91 ±41 82 7 3641 89 ±3 3391 07 - 4 886147 ±1 452181 3
炙甘草汤 24 g ·kg - 1 171135 ±371 38 3 01 42 ±21 87 3 3 10 5321 12 ±1 8121 88 3 - 6 916104 ±1 819152 3
12 g ·kg - 1 171131 ±521 19 3 01 50 ±21 88 3 3 11 1991 49 ±2 0281 10 3 - 6 641145 ±1 448174 3
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
表 3 　炙甘草汤对气血两虚心律失常大鼠血压的影响
( x ±s , n = 15)
Table 3 　Effect of Zhigancao Decoction on blood pressure
of arrhythmia rats with syndrome of diff iciency
of both Qi and blood ( x ±s , n = 15)
组 　别 剂量 SBP/ mmHg DBP/ mmHg MBP/ mmHg
对照 - 149159 ±40195 3 85127 ±27150 3 106168 ±31145 3 3
乌头碱 10μg ·kg - 1 144182 ±31167 3 80^ 31 ±24160 3 101181 ±25145 3 3
模型 10μg ·kg - 1 109118 ±19182 66135 ±20124 71158 ±15166
炙甘草汤 24 g ·kg - 1 143192 ±29122 3 66183 ±19168 95173 ±22121 3
12 g ·kg - 1 146171 ±34102 3 67101 ±27153 97167 ±20100 3
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
3 　讨论
　　程志清等[9 ]认为心功能指标可作为评价心气虚
的客观指标。本实验造模结束后 ,模型组大鼠与对
照组相比 ,状态不佳 ,体质量减轻 ;心律失常潜伏时
间明显缩短和维持时间明显延长 ; + d p/ d tmax 、
- d p/ d tmax均明显下降 ,说明心肌的收缩舒张功能
下降 ,顺应性降低 ,LVSP、LV EDP 和血压的改变提
示模型组大鼠舒缩功能的减退 ,泵血功能的减弱。
以上结果表明 ,放血和环磷酰胺并用能够明显抑制
大鼠的血流动力学指标 ;给予炙甘草汤后 , + d p/
d tmax 、- d p/ d tmax 、LVSP、LV EDP 等血流动力学指
标均得到不同程度的改善 ,心律失常的潜伏时间明
显延长、维持时间显著缩短。基于以上认识 ,心律失
常的发生可能与血流动力学的障碍密切相关。
本实验制备了气血两虚型心律失常模型 ,采用
了一种复合造模方法 ,即在中医药理论的指导下 ,先
采用放血和环磷酰胺并用让大鼠出现气血两虚证 ,
在此基础上 ,再用乌头碱诱发心律失常。这种造模
方法复制出来心律失常模型伴有气血两虚的症状 ,
与中医临床上“心悸”的病因之一体质虚弱 ,气血亏
虚非常相似 ,符合中医学家提出的“动物症候模型的
诊断依据必须与临床诊断依据一致 ,复制动物模型
必须依据病因”。实验研究证明炙甘草汤对大鼠气
·9341·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
血两虚心律失常具有保护作用[10 ] ,深入研究炙甘草
汤对血流动力学的影响可进一步解释炙甘草汤诸药
合用而使气血充实 ,阴阳调和 ,则“脉结代、心动悸”
皆得其平的作用机制。
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曼宋酮 E对白血病 K562 细胞增殖和凋亡的影响
王 　一1 ,张 　玎1 ,连小云1 ,苗玉迪1 ,王 　晖1 ,黄世亮2 3
(11 陕西省人民医院 血液科 ,陕西 西安 　710068 ; 21 中山大学药学院 ,广东 广州 　510052)
摘 　要 :目的 　观察曼宋酮 E 对 K562 细胞增殖的影响 ,探讨其诱导凋亡作用及可能机制。方法 　台盼蓝拒染实
验检测曼宋酮 E 对 K562 细胞的生长抑制作用 ;荧光显微镜观察细胞核形态的变化 ;流式细胞仪测定细胞凋亡率 ;
免疫印迹法测定 caspase23、caspase28、caspase29 及 PARP 的活性及 Bcl22、Bax 和 Bcl2XL 的表达。结果 　曼宋酮 E
抑制 K562 细胞增殖呈时间和浓度相关性 ;1215μg/ mL 的曼宋酮 E 处理 K562 细胞 0、12、24、48 h 细胞凋亡率分
别为 (211 ±018) %、(312 ±116) %、(1513 ±819) %、(2511 ±1114) % ;在曼宋酮 E 诱导 K562 细胞凋亡过程中 ,
caspase23 和 caspase28 以及 PARP 出现活化断裂 ,casepase29 表达无明显变化 ;Bcl22 家族蛋白 Bcl22、Bax 和 Bcl2L
表达无显著改变。结论 　曼宋酮 E 可抑制诱导 K562 细胞增殖 ,并通过 caspase28 途径介导凋亡。
关键词 :曼宋酮 ; 白血病 K562 细胞 ; 增殖 ; 凋亡
中图分类号 :R285191 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921440204
　　曼宋酮类化合物 (mansonones) 是一类具有醌
类结构或其前体的天然产物 ,曼宋酮类化合物自
1965 年至今 ,已发现近 20 种 ,主要是从梧酮科植物
曼宋梧桐及榆科无毛榆的心材中提取分离得
到[1～4 ] 。近期的研究结果提示 8 种从榉树心材中提
取的曼宋酮类化合物有明显抗枯草杆菌、抗金黄色
葡萄球菌以及抗粪肠球菌功能、并且对多种肿瘤细
胞具有明显抗肿瘤作用[5 ] 。在 20 多种化合物中曼
宋酮 E 具有较明显的抗肿瘤作用[ 5～7 ] 。本研究以天
然的曼宋酮 E 作为研究对象 ,观察其对白血病
K562 细胞增殖及凋亡的影响 ,初步研究曼宋酮 E
抗白血病作用及可能机制。
1 　材料
111 　肿瘤细胞株 : K562 白血病细胞 (陕西省人民
医院血液病研究室保存) ,从液氮中复苏后 ,培养至
对数生长期后备用。
112 　药品与试剂 :曼宋酮 E 由中山大学药学院提
取纯化 ,质量分数 99 % 以上。RPMI 1640 培养基
和小牛血清购于 Gibcobrl 公司 ;台盼蓝购于 Sigma
公司 ;碘化丙啶 ( PI) 和 RnaseA 购于 Angus 公司 ;
鼠抗人 caspase23 抗体、兔抗人 PA RP 抗体、
caspase23、鼠抗人 caspase28 抗体、兔抗人 caspasec2
9 抗体、鼠抗人 bcl22 抗体、兔抗人 bcl2XL 抗体、鼠
抗人 BA X 抗体、抗鼠2HRP 抗体和抗兔2HRP 抗体
均购于美国 Santa cruz 公司 ;β2actin 抗体为 Sigma
公司产品 ;其余均为国产试剂。
2 　方法
211 　细胞增殖抑制实验 :将处于对数生长期的
K562 细胞以 1 ×105 / mL 加入 24 孔板中 ,每孔 1
mL ,加入不同质量浓度的曼宋酮 E ,于 12、24、36、
·0441· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
3 收稿日期 :2009202225　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :王　一 (1971 —) ,女 ,博士 ,副主任医师 ,主要从事血液病及肿瘤的基础和临床研究。
Tel : 13571936193 　E2mail : wangyi5182003 @yahoo. com. cn