全 文 ：　　综合以上分析得出怀牛膝茎段诱导愈伤组织形
成的优化培养基为 1/ 4 MS + 62BA 015 mg/ L + 2 ,
42D 110 mg/ L 。做验证试验 ,将该培养基与正交试
验中所得结果最好的 1 号培养基进行平行比较试
验 ,30 d 时 ,对照 1 号培养基中愈伤组织鲜质量为
11130 5 g ,ABPS 量为 811785 7 mg/ g ;而优化培养
基中愈伤组织鲜质量为 11260 3 g , ABPS 量为
83. 928 6mg/ g ,均高于对照培养基 ,即优化培养基
中愈伤组织生长速度较快 ,多糖的量较高。
3 　讨论
迄今为止 ,对影响植物细胞生长和次生代谢物
量的各种化学和物理因素已有大量研究[11 ] 。Ha2
yashi 等[12 ]研究指出 ,提高培养基中硝酸盐、磷酸盐
及钾盐浓度有利于促进细胞生长 ,而降低氮源和磷
酸盐浓度则能增加代谢物的量。本研究发现 ,培养
基中大量元素的改变对怀牛膝鲜质量、多糖的量虽
有一定的影响 ,但影响并不显著 ,因此从规模化生产
和经济的角度 , 培养基中添加 1/ 4 MS 大量元
素即可。
植物生长物质对细胞的生长有很大影响 ,生长
素能够诱导细胞分裂 ,促进细胞伸长 ,细胞分裂素主
要作用是促进细胞分裂和使细胞体积加大。生长素
和细胞分裂素对植物愈伤组织的生长及次生代谢产
物的合成有一定的促进作用[13 ] 。李明军等[14 ] 研究
发现 62BA 对怀牛膝茎段愈伤组织中 ABPS 量的影
响显著 ,2 ,42D 达到极显著水平。本研究中发现 62
BA 各水平对怀牛膝愈伤组织的诱导虽不显著 ,但
对多糖的量达到显著影响水平 ,2 ,42D 对多糖的量
影响不显著 ,与李明军的结果部分一致 ,其作用和调
控机制值得深入研究 ,从而为今后规模化生产提供
技术支持。
本实验采用正交设计研究了植物生长物质 4 因
素 3 水平对怀牛膝愈伤组织诱导及愈伤组织中多糖
量的影响 ,用最少的处理组合研究较多的试验因素 ,
通过分析试验结果不仅选择出适宜的培养基 ,还可
以揭示各因素的影响程度 ,最终确定出最适宜的试
验方案。既提高了工作效率 ,又保证了实验结果的
正确性和可靠性。
参考文献 :
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HPLC法测定不同产地喜树果中喜树碱
黄瑞松1 ,3 ,叶云锋2 ,梁启成1 ,周芳礼3 ,苏 　青1 ,付小红4 3 ,林翠悟3①
(1.广西民族医药研究所 ,广西 南宁 　530001 ; 2. 广西兽药监察所 ,广西 南宁 　530001 ; 31 广西大学化学化工学院 ,
广西 南宁 　530003 ; 41 广西中医学院 ,广西 南宁 　530001)
摘 　要 :目的 　建立喜树果药材中喜树碱定量测定的 HPLC 方法 ,并对不同产地喜树果药材中喜树碱的量进行比
较分析。方法 　用 HPLC 法测定喜树果药材中喜树碱的量 ,色谱条件 : 色谱柱为 Dikma Diamonsil C18 柱
(250 mm ×416 mm ,5μm) ,流动相为甲醇2水 (55 ∶45) ,体积流量 :018 mL/ min ,检测波长 :254 nm。结果 　喜树碱
在01112～01672μg 与峰面积有良好的线性关系 ,平均回收率为 102119 % ,RSD = 2190 %( n = 6) 。40 批不同产地喜
·731·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008205210
基金项目 :广西自然科学基金项目 (桂科自 0542055) ;广西大型仪器协作共用网资助项目 (327220062016)3 2001 级实习生
树果药材中喜树碱的量为 01031 5 %～01242 4 %。结论 　建立的喜树果定量测定方法准确可靠 ,不同产地喜树果
药材中喜树碱的量有较大差异。
关键词 :喜树果 ;喜树碱 ;高效液相色谱 ;产地
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120137204
　　喜树果为蓝果树科 (珙桐科) 植物喜树 Cam p2
tot heca acumi nat a Decne. 的成熟果实 ,为广西中药
材标准 (1990 年版) 收载品种。喜树主要分布于我
国西南各省区 ,特别是广西资源丰富 ,全区各地多有
分布。喜树果有抗癌、散结、破血化瘀的功效 ,广西
民间用于治疗各种肿瘤[1 ] 。广西河丰药业有限公司
以该药材作为原料提取喜树碱单体 ,出口美国、日本
等国家 ,产生了较好经济附加值。文献记载 ,喜树果
主要含生物碱类成分 ,其中喜树碱 (camptot hecin)
为主要活性成分 ,同时也是有毒成分 ,主要表现在消
化系统、泌尿系统及造血功能的抑制[2 ,3 ] 。《广西中
药材标准》该药材没有定量测定项目[1 ] ,未能有效控
制喜树果药材内在质量 ,以致影响生产相关产品的
质量及药材临床用药的安全有效。前文报道应用
TL CS 测定喜树果中喜树碱的量[4 ,5 ] ,本实验则应用
H PL C 法建立喜树果药材喜树碱定量测定方法 ,并
对不同产地喜树果药材进行定量测定 ,比较分析不
同产地喜树果药材的质量。
1 　仪器与试药
111 　仪器 : 2695 型 H PL C 系统 (带自动进样器) ,
2487 紫外检测器 ,2996 型二极管阵列检测器 ,Mil2
lennium32数据处理系统 (均为美国 Waters 公司) ,
A E —240 型 1/ 105 电子天平 (瑞士梅特勒公司) ,
SB2200 超声波清洗器 (上海必能信超声有限公司) 。
112 　试药 :喜树碱对照品 (广西河丰药业有限公司 ,
质量分数 > 9810 %) ; H PL C 流动相所用甲醇为色
谱纯 (天津市四友生物医学技术有限公司) ,水为重
蒸馏水 ,其他化学试剂均为分析纯 ;喜树果分别采于
广西、云南、贵州、重庆、四川和上海等 6 个省、区
(市)的 40 批不同产地 ,其中大部分采于广西 ,经笔
者鉴定均为喜树 Cam ptot heca acumi nat a Decne1
的果实。各样品来源见表 1。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 :色谱柱为 Dikma Diamonsil C18 柱
(250 mm ×416 mm ,5μm) ,流动相 :甲醇2水 (55 ∶
45) ,体积流量 :018 mL/ min ,检测波长 :254 nm ;柱
温 :室温 ;供试品和对照品溶液进样量均为 20μL 。
212 　对照品溶液制备 :精密称取喜树碱对照品
10108 mg ,加甲醇定容至 200 mL ,摇匀。再精密吸
取 1 mL ,加甲醇定容至 10 mL ,摇匀 ,即得。
213 　供试品溶液制备 :取喜树果粉末 (过 60 目筛)约
011 g ,精密称定 ,置 25 mL 具塞锥形瓶中 ,精密加入
甲醇 10 mL ,密塞 ,称定质量。于 60 ℃水浴温浸提取
1 h ,不时轻轻振摇。取出 ,放凉 ,再称定质量 ,用甲醇
补足减少的质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
214 　专属性试验 :分别取 212 和 213 项下的对照品
溶液、供试品溶液和溶剂甲醇各 20μL ,注入高效液
相色谱仪 ,按 211 项色谱条件试验。结果表明 ,供试
品溶液的色谱图中均有与喜树碱保留时间相同的吸
收峰 ,溶剂甲醇无此吸收峰。说明用本方法测定喜
树碱的量无溶剂干扰 ,专属性强。见图 1。3 2喜树碱3 2camptot hecin
图 1 　喜树碱对照品( A) 、喜树果样品( B)和溶剂
甲醇( C)的 HPLC色谱图
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of camptothecin
reference substance ( A) , C1 acuminata
sample ( B) , and methanol solvent ( C)
215 　线性关系考察 :分别精密吸取喜树碱对照品溶
液 (5016μg/ mL) 110、210、310、410、510、610 mL 置
10 mL 量瓶中 ,各加甲醇至刻度 ,摇匀。分别进样
20μL 。以峰面积积分值为纵坐标 ,进样量 (μg) 为
横坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程为 Y = 51 305 ×
10 6 X - 88 662 , r = 01999 5。喜树碱在 01112～
01672μg 与峰面积呈良好线性关系。
216 　精密度试验 :精密吸取同一供试品溶液各 20
μL ,连续进样 5 次 ,测定峰面积 ,计算得喜树碱质量
分数的 RSD 为 0131 %。
217 　重现性试验 :取同一批号药材粉末 (过 60 目
筛) 6 份 ,每份 011 g ,精密称定 ,制备供试品溶液。
各精密吸取 20μL ,分别进样 ,测定喜树碱峰的峰面
积 ,计算得喜树碱质量分数的 RSD 为 2100 %。
218 　稳定性试验 :精密吸取同一供试品溶液 20μL ,
分别于 0、2、4、6、8 和 24 h 进样测定 ,结果表明 ,24 h
·831· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
内各次测得的喜树碱质量分数的 RSD 为 1107 %。
219 　回收率试验 :采用加样回收法 ,分别称取同一
批号药材粉末 (过 60 目筛) 0105 g 共 6 份 ,精密称
定 ,各加入喜树碱对照品溶液 (01005 01 mg/ mL) 10
mL ,按照 213 项下方法制备供试品溶液 ,同法测定
喜树碱质量分数 ,计算回收率 ,结果平均回收率为
102119 % ,RSD 为 2190 %。
2110 　样品测定 :分别取 40 批样品粉末 (过 60 目
筛)各 011 g ,按 212 和 213 方法制备对照品和供试
品溶液 ,按 211 色谱条件进行喜树碱测定。结果表
明 ,40 批样品喜树碱的量在 01031 5 %～01242 4 % ,
结果见表 1 (以药材干燥品计算质量分数) 。
表 1 　喜树果药材不同产地和采集时间的喜树碱测定结果( n = 2)
Table 1 　Determination of camptothecin in various habitats and collection periods of C. acuminata fruit ( n = 2)
样品
编号
产　地 采集时间 喜树碱/ %
1 广西药用植物园竹排沟边 2004208 01180 6
2 广西药用植物园草本区 2004209 01080 2
3 广西药用植物园木本区 2005208 01069 8
4 广西中医学院 2005208 01140 8
5 广西植物研究所 2005209 01159 0
6 广西兴安县氮肥厂 2004209 01221 5
7 广西兴安县城公路边 2005209 01140 6
8 广西永福县三皇乡 2005209 01122 5
9 广西永福县县城 2005209 01150 1
10 广西柳江县 2005209 01242 4
11 广西河池市 2002209 01099 6
12 广西巴马县 2004209 01090 2
13 广西东兰县三石镇 2002208 01120 8
14 广西东兰县四孟乡 2006208 01209 2
15 广西百色市 2003209 01080 7
16 广西百色市那毕乡 2004208 01132 5
17 广西百色市永乐乡 2004209 01089 2
18 广西乐业县 2002208 01096 2
19 广西田林县 2004209 01101 6
20 广西那坡县 2005209 01093 6
样品
编号
产　地 采集时间 喜树碱/ %
21 广西靖西县 2003209 01081 5
22 广西蒙山县 2005209 01139 1
23 广西金秀县长垌乡 2004209 01123 1
24 广西金秀县长垌乡六架村 2005209 01200 6
25 广西龙州县 2006208 01161 1
26 贵州省 (河丰药业有限公司) 2002212 01111 3
27 贵州省 (购于玉林药市) 2004210 01120 5
28 贵州黎平县德风镇城关 2005210 01124 2
29 贵州黎平县德风镇城南 2005210 01144 6
30 贵州从江县丙妹镇 2005211 01228 7
31 贵州从江县丙妹镇沙村 2005211 01167 6
32 贵州瓮安县 2005211 01150 7
33 云南文山州 2004210 01120 3
34 云南马关县 2004211 01131 3
35 昆明植物研究所 2005209 01031 5
36 云南西畴县 2005210 01093 5
37 重庆万州区余家镇 2004212 01097 3
38 重庆万州区巫山县 2006210 01119 7
39 四川都江堰 2006210 01229 4
40 上海杨浦区 2005209 01194 8
3 　讨论
311 　供试品溶液的制备方法有乙醇溶液水浴温浸
和超声提取[6 ,7 ] 。根据喜树碱在 70 %乙醇、乙醇、甲
醇中均有一定溶解度 ,本实验试用上述溶剂分别采
用温浸、超声方法提取喜树果。结果以 70 %乙醇、
乙醇、甲醇等溶剂温浸提取的样品液 ,色谱主峰与杂
质峰分离效果较好。为此 ,应用正交试验方法 ,采用
4 因素 3 水平的 L9 (34 )正交表进行水浴温浸提取条
件的优选 ,即对提取溶剂 (70 %乙醇、乙醇、甲醇) 、药
材破碎度 (通过 20、40、60 目筛的粉末) 、水浴温度
(40、50、60 ℃) 和温浸时间 (30、60、90 min) 等 4 因
素 3 水平进行喜树碱得率的考察。结果优化出喜树
果最佳提取条件为 :以甲醇作为提取溶剂、药材破碎
度为过 60 目筛的粉末、水浴温度为 60 ℃及温浸时
间为 60 min。
312 　本试验采集的样品共涉及 6 省、区 (市) 的 40
批不同产地 (包括部分同一产地不同区域采集的样
品) ,样品批次多 ,涉及面广 ,具有一定的代表性。测
定结果表明 ,40 批喜树果药材喜树碱的质量分数为
01031 5 %～01242 4 % ,产地不同质量分数差异较
大。其中广西柳江县 (10 号) 量最高 (01242 4 %) ,
云南昆明植物研究所 (35 号) 量最低 (01031 5 %) ;
同一省区各地药材中喜树碱量差异亦较大 ,广西量
最高为柳江县 (01242 4 %) ,最低为南宁市广西药用
植物园木本区 (2 号 ,01069 8 %) ;贵州省最高为从
江县丙妹镇 (30 号 ,01228 7 %) ,最低为河丰药业有
限公司送检的样品 (26 号 ,01111 3 %) ;云南省最高
为马关县 (34 号 ,01131 3 %) ,最低为昆明市昆明植
物研究所 (35 号 , 01031 5 %) ;即使产于同一市或
县 ,样品采集地点或区域不同 ,质量分数差异亦较
大 ,如广西南宁市内采于广西药用植物园竹排沟边、
草本区和木本区 (1～3 号) 和广西中医学院 (4 号) ,
广西东兰县三石镇 (13 号)和四孟乡 (14 号) ,贵州从
江县丙妹镇 (30 号) 和丙妹镇沙村 (31 号) 等虽然为
同一地区 ,但采集地点或区域不同 ,样品的量亦有所
差异 ;甚至在同一地点不同植株的量差异也较大 ,如
·931·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
广西药用植物园 1～3 号样均采自植物园内的不同
植株 ,但 3 者的量差异也较大。这可能与喜树的生
长环境和树龄有关。
致谢 :试验所用部分样品分别由中国科学院昆
明植物研究所杨世雄研究员、四川省中药研究院舒
光明研究员、中国科学院广西植物研究所梁小燕副
研究员、广西药用植物园药用植物保育中心等采集
提供。
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HPLC法测定鸭跖草中异荭草素
康明芹 ,赵士敏 ,杨卫萍 ,陆 　娟 ,金永日 ,李绪文
①
(吉林大学化学学院 ,吉林 长春 　130012)
摘 　要 :目的 　建立鸭跖草中异荭草素的定量测定方法 ,为鸭跖草质量标准的建立提供科学依据。方法 　采用反
相高效液相色谱法。色谱柱 :ZORBAX EXTEND C18柱 (250 mm ×4. 6 mm ,5μm) ,流动相 :乙腈20. 1 %磷酸 (15 ∶
85) ,检测波长 :350 nm。结果 　线性良好 ,异荭草素平均加样回收率为 99. 98 % ,RSD 为 1. 62 %。结论 　本方法准
确、简便 ,精密度和分离度良好 ,可用于测定鸭跖草药材中异荭草素的量。
关键词 :鸭跖草 ;异荭草素 ;高效液相色谱
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120140202
　　鸭跖草是鸭跖草科 (Commelinaceae) 植物鸭跖
草 Com mel i na com m unis L . 的干燥地上部分 ,具有
清热解毒、利水消肿之功效 ,用于风热感冒、高热不
退、咽喉肿痛、水肿尿少、热淋涩痛、痈肿疔毒等
症[1 ] ,华东、华北、西南均有分布。2005 年版《中国
药典》收载了该品种 ,但尚无定量测定的指标。文献
报道鸭跖草中主要含有鸭跖黄酮苷、木栓酮、黑麦芽
内酯、β2谷甾醇、12carbomet hoxy2carboline、花色苷、
正十三烷醇、对羟基桂皮酸、胡萝卜苷、D2甘露醇及
异荭草素 ,其中异荭草素的量较高[2 ] 。本实验利用
H PL C 法测定了鸭跖草中异荭草素的量 ,其研究结
果可为鸭跖草质量标准建立提供定量测定指标。
1 　仪器与试药
　　仪器 : Agilent 1200 series 高效液相色谱仪 ;
G1310A 四元泵 , G1322A 在线脱气机 , G1316A 柱
温箱 , G1314B 紫外可见检测器 ,配备 Agilent 1200
色谱工作站。
试剂 :乙腈 (色谱纯 ,山东禹王集团) ,水为重蒸馏
水 ,磷酸 (色谱纯 ,山东禹王集团) ,异荭草素对照品为
自制 ,并经 UV、IR、1 H2NMR、13 C2NMR、MS 等光谱
鉴定确认其结构 ,按本方法色谱条件 ,归一化测得其
质量分数大于 99. 9 %。实验所用药材采自吉林省长
春市郊区 ,系野生鸭跖草 ,经长春中医药大学邓明鲁
教授鉴定为鸭跖草 Commelina communis L. 。
2 　方法与结果
2. 1 　色谱条件 :色谱柱为 ZORBA X EXTEND C18
柱 (250 mm ×4. 6 mm ,5μm) ,流动相 :乙腈20. 1 %
磷酸 (15 ∶85) ,体积流量 : 1. 0 mL/ min ; 柱温 : 25
℃;检测波长 :350 nm ;进样量 :5μL 。在该条件下 ,
异荭草素与其他组分色谱峰的分离度大于 1. 5 ,色
谱图见图 1。
2. 2 　对照品溶液的制备 :精密称取干燥的对照品异
荭草素 20. 0 mg ,置于 50 mL 量瓶中 ,加适量甲醇溶
解并定容至刻度 ,摇匀。精密移取上述标准溶液
·041· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008206219
基金项目 :吉林省科技厅项目 (20060903)
作者简介 :康明芹 (1982 —) ,女 ,山东滨州市人 ,硕士研究生 ,研究方向为天然产物化学成分及质量控制。
Tel :13504338478 　E2mail :mqkang @yahoo. cn3 通讯作者　李绪文　Tel : (0431) 85628012 　E2mail :xwli @jlu. edu. cn