全 文 ：·986· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
L—rhamnopyranosyl一(1--．．6)-I孓D—glucopyranoside。
化合物vI：无色透明固体，溶于甲醇。ESI—MS
m／z：355[M+Na]+。1H—NMR(500M z，CD30D)
艿：5．91(1H，dd，J=11．0，18．0Hz，H一2)，4．95(2H，
dd．J=11．5，18．0Hz，H一1)，4．27(1H，d，t厂一8．0
Hz，H一17)，3．80(1H，dd，J=12．0，3．5Hz，H一6’b)，
3．60(1H，dd，J一12．0，5．5Hz，H一6’a)，3．35(1H，
dd，J=11．0，4．0Hz，H一6)，3．20～3．22(3H，ITI，H一
37，47，57)，3．06～3．09(1H，rll，H一27)，2．09～2．13
(1H，m，H一4b)，1．91～1．96(1H，m，H一5b)，1．69～
1．78(1H，ITI，H一5a)，1．50～1．56(1H，ITI，H一4a)，
1．20(3H，S，H一8)，1．14(3H，S，H一9)，1．06(3H，S，H一
10)。13C—NMR(125Hz，CD30D)3：147．45(C一2)，
111．4l(C一1)，85．79(C一6)，77．14(C一7)，74．87(C一
3)，33．68(C一4)，32．28(C一10)，30．06(C一8)，25．75
(C一5)，21．96(C一9)，106．34(C一17)，78．12(C一37)，
77．77(C一5’)，75．34(C一27)，71．58(C一47)，62．75(C一
67)。以上数据与文献报道一致[1州，确定该化合物为
(3S，6R)一trans—linalool一3，7一oxideglucoside。
化合物Ⅷ：无色块状结晶(甲醇)，mp180
183℃。与蔗糖对照品共薄层色谱，在多个展开系统
中色谱行为一致，混合测定熔点不下降，所以确定该
化合物为蔗糖。
化合物Ⅸ：无色长方形块晶(甲醇)，mp103～
105℃。与果糖对照品共薄层色谱，3个系统中(醋
酸乙酯一甲醇一水；氯仿一甲醇一水；醋酸乙酯一乙醇一水)
展开，10％硫酸乙醇喷雾加热后都显土黄色，Rf值
一致；混合测定熔点不下降。由以上实验结果确定该
化合物为果糖。
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党参多糖的分离纯化及其结构研究
任丽靖1，张静2，刘志存1，孙润广H
(1．陕西师范大学物理与信息技术学院生物物理与生物医学工程实验室，陕西西安710062；
2．陕西师范大学食品工程系，陕西西安。710062)
摘 要：目的进行党参多糖的分离纯化及结构的研究。方法 经脱脂、热水抽提、乙醇沉淀、Sevage法脱蛋白得到
的粗提党参多糖(CPPS)，再经DEAE一纤维素柱色谱分离得到纯化的水洗党参多糖(CPPSl)。紫外光谱及Sephadex
G一200凝胶柱色谱鉴定其纯度。气相色谱、红外光谱和原子力显微镜(AFM)分析其结构。结果CPPSl不含蛋白
质，且为均一多糖。单糖组成为阿拉伯糖、核糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖。红外光谱显示CPPSl具有典型的多
糖吸收峰；原子力显微镜(AFM)分析表明CPPSl分子具有高度分枝的结构，并且糖链问形成大小不等的环状结
构。结论CPPSl是一种含呋喃环结构的均一多糖，且具有高度分枝的结构。
关键词：党参；多糖；原子力显微镜
中图分类号：R931．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—0986—04
党参为桔梗科党参属植物党参Codonopsisp losula(Franch．)Nannf．的干燥根，其性味甘、
收稿日期：2007—10—12
基金项目：国家自然科学基金资助项月(20572067)l教育部科学技术研究重点项目(104167)
作者简介：任丽靖(198z一)，女，河南南阳人，硕上研究生，生物物理专业。E—mail：renjin98208@126．eom
*通讯作者孙润广E—mail：sunrunguang@snnu．edu．cn
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·987·
平，无毒[¨，具有补中益气、健脾益肺等功效[z]，主治
脾胃虚弱，气短心悸，热病伤津，虚喘咳嗽等症，是我
国传统的补益药口’4]。现代药理学研究证实党参具有
抗肿瘤、增强免疫功能及抗氧化等多种生物学活性，
其主要活性成分为党参多糖(Codonopsispilosula
polysaccharide，CPPS)E5~引。近几年，国内外在党参
多糖生物活性方面进行了深入的研究，但有关党参多
糖的结构研究报道的较少，未见用原子力显微镜观察
党参多糖分子的表面形貌的报道。为此，本实验对党
参多糖进行分离纯化，并对纯化级分的CPPSl结构
进行了研究，这对系统研究党参多糖的结构以及进一
步弄清其结构与功能的关系提供了实验资料。
1材料与方法
1．1 材料与试剂：党参购于西安市中药材批发市
场)，DEAE一纤维素，SephadexG一200凝胶(北京鼎
国生物技术有限公司，其他试剂均为分析纯。
1．2仪器与设备：U一3010Sdetrophotometer型紫
外分光光度计(日本日立公司)；SPM一9500J3型原
子力显微镜(日本岛津公司)；EQUINOX55傅立叶
红外光谱仪(德国Brucher公司)；GF一16RX型日
立牌多用途小型冷冻离心机(日本日立工机有限公
司)；ALPHA1—4型真空冷冻干燥机(德国
CHRlST公司)；E～52AA型旋转蒸发仪(上海亚荣
生化仪器厂)；DBS一100电脑全自动部分收集器
(上海沪西分析仪器厂有限公司)；Z系列色谱柱(50
cmx1．6cm)(上海沪西分析仪器厂有限公司)；
SHB一Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸
有限公司)；HH—S4型电热恒温水浴锅(北京科伟
永型仪器有限公司)；气相色谱仪(美国菲尼根)。
1．3党参多糖的分离与纯化
1．3．1党参的预处理：将党参在60℃烘箱中烘12
h后将其粉碎，然后按照料液质量体积比为1：6的
比例加入95％乙醇回流提取2次，每次2h以脱脂，
药渣在自然条件下晾干备用。
1．3．2党参多糖的提取‘引：称取已干燥的党参药渣
40g，加入400mL蒸馏水，放置于80℃的水浴中加
热提取3次，每次2h，滤过，合并3次提取液，减压浓
缩至原体积的1／5，加入3倍体积95％乙醇，静置过
夜，4000r／rain离心(4℃，20min)，收集沉淀，沉
淀用蒸馏水溶解，经Sevage法[10]除蛋白，流水透析
3d，再加入3倍体积95％乙醇，离心，沉淀相继用无
水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，真空冷冻干燥，得到1．095
g灰白色的党参多糖粗品(CPPS)。
1．3．3党参多糖的分离纯化[1¨：取0．25g党参粗
多糖溶于少量蒸馏水中，进行DEAE一纤维素柱色谱
分离，体积流量为0．5mL／min，每10min收集1管。
先用蒸馏水洗至无糖检出，再用0．1、0．3、0．5mol／L
NaCI洗脱，最后用0．1mol／LNaOH进行洗脱，隔
管用改进的苯酚一硫酸法D23检测，收集各洗脱峰部
分，浓缩，透析，冷冻干燥，得各级分多糖。
蒸馏水洗脱部分为多糖的主要组分，真空冷冻
干燥后为白色粉末状的水洗党参多糖(CPPSl)。
1．4纯度鉴定
1．4．1紫外分光光度法：在紫外光谱仪上200～700
nm扫描。
1．4．2 SephadexG一200凝胶柱色谱法[11。：将
CPPSl进行SephadexG一200柱色谱分离，体积流量
为0．3mL／min，每10min收集1管，用蒸馏水洗脱，
隔管用改进的苯酚一硫酸法[5]检测。
1．5结构研究
1．5．1气相色谱分析：称取20mgCPPSl，放入具
塞试管中，加入2mol／L硫酸溶液5mL后，封管，在
105℃水解8h，水解液加少量蒸馏水，用BaCO。中
和后离心除沉淀，上清液冷冻干燥，将干燥后的样品
依次加入0．3mL吡啶、0．2mL六甲基二硅胺烷、
0．1mL三甲基氯硅烷后封管，60℃烘箱中反应10
min，进行硅烷化。反应产物4000r／min离心，上清
液直接进行气相色谱分析。
气相色谱分析条件：色谱柱为石英毛细管柱，载
气：氮气，流速：10mL／min；检测器：FID，气体流速
比：空气与氢气比为300：30；尾吹气为30；汽化室温
度：250℃；检测器温度：260℃；程序升温：150～
190℃，升温速度为7℃／min，190～260℃，保持
2min，升温速度为15℃／min；进样量为1肛L。
1．5．2 红外光谱测定‘13]：采用KBr压片法，在红外
光谱仪上测定4000～400cm-1的红外光谱。
1．5．3原子力显微镜(AFM)观测：准确称取1mg
CPPSI，配制成20pg／mL多糖溶液，冷却至室温，再
稀释至2肛g／mL。用移液枪吸取3pL多糖溶液，滴在
新鲜解离的云母片上，空气中干燥大约20min，待样
品干燥后即可进行原子力显微镜(AFM)观测。
2结果与分析
2．1党参多糖的纯化结果：党参多糖经DEAE一纤
维素分离纯化后得到5个洗脱峰。蒸馏水洗脱出现
峰I(CPPSI)，0．1mol／LNaCI洗脱出现峰Ⅱ
(CPPS2)，0．3mol／LNaCl洗脱出现峰Ⅲ
(CPPS3)，0．5mol／LNaCI洗脱出现峰Ⅳ
(CPPS4)，0．1mol／LNaOH洗脱出现峰V
万方数据
·988- 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
(CPPS5)，各部分所占比例为44．3％、23．5％、
14．25％、3．75％、15．2％，用0．5mol／LNaCl洗脱
时的峰已经很小。其中，峰I(CPPSl)所占的比例最
大，为党参多糖的主要组分，因此对该部分党参多糖
的结构进行了研究。
2．2纯度鉴定结果：由紫外光谱图可以看出水洗多
糖CPPSl在250～280nm无明显的吸收峰，表明样
品中已尢蛋白质、核酸。
由CPPSl的SephadexG一200柱色谱图，可看出
洗脱峰是单一对称的，表明水洗多糖CPPSl已得到
纯化。
2．3 CPPSl的结构分析
2．3．1单糖组成分析：根据单糖对照品和样品的色
谱保留时间，将CPPSl水解产物的硅烷化衍生物的
气相色谱图(图1)与混合单糖对照品的气相色谱图
(图2)对照比较，其结果列于表l中。从表中可看出
CPPSl的单糖组成为阿拉伯糖、核糖、甘露糖、果
糖、半乳糖、葡萄糖。
ILL
图1 CPPSI的气相色谱图
Fig．IGCChromatogramofCPPSI
2．3．2红外光谱图分析岫“j：从CPPSl的红外光
谱中可看出3389．99、2933．73、1326．03cm叫这3
个吸收峰可初步判断该化合物是糖类化合物。
3389．99cm-1处是一宽而强的吸收峰，由O—H的伸
缩振动造成，说明CPPSl存在分子间的氢键；
2933．73cm“处是一弱的吸收峰，由C—H的伸缩振
1一阿拉伯糖2一鼠李糖3一核糖4一核糖5一木糖
6一甘露糖7一果糖 8一半乳糖 9一山梨糖 lo一葡萄糖
1．Ara2-Rha3-Rib4-Rib5-Xyl
6一Man7-Fru8-Gal9-Sor10一Glu
图2混台单糖对照品的气相色谱图
Fig．2GCChromatogramofmixmonose
referencesubstance
表1单糖对照品及CPPSl中单糖的保留时间
TableRetentivemofmonosereference
substancedmoaoseofCPPSl
单糖
保留时
CPPSl单糖 竺留时CPPSI
闻／min 问／rain
阿拉伯糖4．1834．176甘露糖 6．277 6．267
鼠李糖4．302 果糖 6．398 6．392
核糖4．5454．50 半乳糖 6．805 6．792
4．713 山梨糖 6．848
木糖 5．177 葡萄糖 7．108 7．09
动造成；1326．03cm“处是不太尖的吸收峰，由C—
H的变角振动造成。由1135～1031cm“的2个吸
收峰，940～810cm_1的3个吸收峰，可判断该多糖
有呋哺糖苷的存在。935．69cm“和820．34cm“是
两个较为明显的呋哺糖苷的特征吸收峰，分别由呋
喃环的对称伸缩振动和呋喃环的C—H变角振动造
成；870．74cm“是甘露糖的吸收峰，由次甲基的横
向振动造成。
2．3．3原子力显微镜(AFM)观察分析：CPPSl的
原子力显微镜(AFM)如图3和图4所示。
图3 CPPSl的原子力显微镜图(12．们lam×12．08¨m)
Fig．3AFMImagesofCPPSI(12．08um×12．08um)
。悖㈣¨一6●●●●●●?●jjⅢjr㈧I●●lllIlllI{ljJ
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7,El·989·
图4 CPPSI的原子力显微镜图(6．OO；Am×6．OOpm)
Fig．4AFMImagesofCPPSl(6．00pm×6．OOpro)
图3的扫描范围是12．08ram×12．08,um，从其
平面图和立体图中分别可以较为清楚地看至IJCPPSl
呈现多分枝的结构，并且糖链分布的密度大小不一。
根据文献报道[1引，糖链的密度依赖于初始浓度及其
沉积到云母片表面的量，因此制样对研究多糖分子
表面形貌有很重要的意义。
图4的扫描范围是6．oopm×6．00弘m，从图中
能够更清楚地观察到CPPSl分子的链问通过糖单
元不同的连接方式衍生出许多大大小小的环状
结构。
3讨论
本实验发现CPPSl除了由阿拉伯糖、核糖、甘
露糖、果糖、半乳糖和葡萄糖这些单糖组成外，同时
还有一个未知糖。从图1中很明显可以看到有一个
很突出的未知单糖色谱峰，此峰尚待进一步确认。从
气相色谱分析结果来看，阿拉伯糖、核糖等五碳糖一
般比甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖等六碳糖的保留
时间更短，更容易出峰，因此推测这个未知的单糖可
能属于六碳糖。
本实验利用原子力显微镜观察了CPPSl分子
的表面形貌，能够很清楚地看到其糖链具有高度分
枝的结构，并且糖链间形成大小不等的环。同时，马
秀俐等[153用原子力显微镜观察到西洋参多糖的分
子链聚集状态呈多股紧密并行螺旋形排列；
Ludwing等[161利用原子力显微镜研究了多糖及超
分子结构。多糖具有特殊的生物功能，与其结构密切
相关，原子力显微镜是研究多糖高级结构的一个十
分有用的工具口7‘。有关党参多糖的结构与生物活性
之间的关系，有待于我们进一步进行研究。
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万方数据
党参多糖的分离纯化及其结构研究
作者： 任丽靖， 张静， 刘志存， 孙润广
作者单位： 任丽靖,刘志存,孙润广(陕西师范大学物理与信息技术学院,生物物理与生物医学工程实验室
,陕西,西安,710062)， 张静(陕西师范大学食品工程系,陕西,西安,710062)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
被引用次数： 7次

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