全 文 ：表 2 　松节藻醇提物对正常小鼠血清中 SOD、GSH2Px 活性
与 MDA 水平的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 2 　Effect of ethanol extract from R. conf ervoides 　
on activities of SOD and GSH2Px , and level
of MDA in serum of normal mice ( x ±s , n = 10)
组别
剂量/
(mg ·kg - 1 )
SOD/
(U ·mL - 1 )
GSH2Px/
(U ·mL - 1 )
MDA/
(nmol ·mL - 1 )
对照 　- 178188 ± 5117 190119 ±17138 121520 ±11203
松节藻醇提物 　25 240118 ±22116 241105 ±16104 51027 ±11331 3
50 250150 ±16189 3 252108 ±17119 91583 ±11134
100 234175 ±18177 215162 ±24151 111686 ± 01895
　　与对照组比较 : 3 P < 0105
　　3 P < 01 05 vs cont rol group
H2 O2诱导的小鼠淋巴细胞 DNA 损伤 ,同时提高小
鼠体内的 SOD 和 GSH2Px 活性 ,降低血清中脂质
过氧化终产物 MDA 的量 ,减轻活性氧自由基对机
体的攻击 ,具有一定的抗氧化应用前景。
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佛手挥发油对支气管哮喘小鼠外周血、肺泡灌洗液及肺组织中
嗜酸性粒细胞的影响
施长春1 ,王建英1 ,朱婉萍2 ,黄伟华2 ,施金俏1 ,薛洪燕1
①
(11 浙江省金华市人民医院 ,浙江 金华 　321000 ; 21 浙江省中医药研究院 ,浙江 杭州 　310009)
摘 　要 :目的 　观察支气管哮喘模型小鼠外周血、支气管肺泡灌洗液 (BAL F) 及肺组织中嗜酸性粒细胞 ( EOS) 的
改变以及佛手挥发油对以上指标的影响。方法 　C57小鼠以卵白蛋白 (OVA) 致敏造成哮喘模型 ,分为模型组 ,对
照药物组 ,佛手挥发油高、中、低 3 个剂量组 ,另外 10 只为健康对照组。分别检测各组小鼠外周血、BAL F 中 EOS
的水平并观察肺组织病理切片中 EOS 的浸润情况。结果 　模型组外周血、BAL F 与对照组比较 ,EOS 均明显增加
( P < 0101) ;肺组织病理切片显示支气管及血管周围大量 EOS 浸润。各佛手挥发油组与模型组相比外周血 BAL F
中 EOS 均有不同程度下降 ,高剂量组差异尤为显著 ( P < 0101) 。各组肺组织病理切片中 EOS 浸润较模型组减
少 ,剂量越大此作用越明显。结论 　佛手挥发油可抑制哮喘小鼠外周血、BAL F 中 EOS 水平 ,减少肺组织 EOS 浸
润 ,拮抗气道炎症而发挥平喘作用 ,作用强度与剂量有关。
关键词 :佛手挥发油 ; 哮喘 ; 外周血 ; 支气管肺泡灌洗液 (BAL F) ; 嗜酸性粒细胞 ( EOS)
中图分类号 :R286143 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120099203
　　近年来 ,对支气管哮喘的研究取得了重大进展 ,
哮喘的本质是气道反应性增高为特点的慢性炎症疾
病 ,其治疗以抗炎平喘为主[1 ] 。佛手具有舒肝理气、
宽胸化痰等功效 ,在临床上普遍用于支气管炎和支
气管哮喘的治疗 ,具有较好的疗效。挥发油是佛手
所含的主要成分 ,佛手挥发油及醇提液具有抗炎、平
喘、祛痰等作用[2 ] 。本研究旨在利用 C57 小鼠哮喘
模型 ,观察佛手挥发油对致敏 C57小鼠外周血、肺泡
灌洗液 (BAL F) 及肺组织中嗜酸性粒细胞 ( EOS)
的影响 ,探讨佛手挥发油平喘的作用机制。
·99·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008206218
基金项目 :浙江省自然科学基金资助项目 (302759)
1 　材料与方法
111 　药物与试剂 :佛手挥发油 [ GC2MS 测定 ,含 D2
柠檬烯 40102 %、( + )222蒈烯 21135 %]的提取方法
见文献方法[3 ] ,以无水乙醇2佛手挥发油2纯化水2聚
山梨酯 80 按 1 ∶1 ∶218 ∶012 配成佛手挥发油乳液 ;
桂龙咳喘宁胶囊由山西桂龙医药有限公司提供 ,批
号 20020603。卵白蛋白 (ovalbumin , OVA ) 由
Sigma 公司提供 ,批号 052 K1275 ;佐剂液态铝由
Pierce 公司提供 ,批号 F G70976A。
112 　动物及分组 :60 只 C57 BL/ 6 小鼠 ,6～8 周 ,体
质量 18～22 g ,雄性 ,由浙江省中医药研究院实验
动物中心提供 ,许可证号 SYXK (浙) 200420034。
随机分为 6 组 ,每组 10 只。其中 1 组设为生理盐水
(NS) 刺激健康小鼠对照组 ,另外 5 组以 OVA 致敏
造成哮喘模型。5 组哮喘模型小鼠分为无干预模型
组、对照药物组 (以桂龙咳喘宁胶囊干预 ,0158 g/
kg) ,佛手挥发油高、中、低剂量 ( 11753、01877、
01175 g/ kg) 组。
113 　方法
11311 　致敏液的配制 : 称取 20 mg OVA 加入
1 mL 生理盐水中 ,充分溶解后 ,取出 014 mL 加入
916 mL 生理盐水中 ,混匀 ,取该液与等体积的佐剂
液态铝混合 ,4 ℃放置 30 min 后使用。
11312 　致敏 :5 个致敏组于实验第 0 天与第 14 天
每只小鼠分别 ip 上述致敏液 012 mL ,对照组 ip 等
体积的生理盐水。
11313 　药物干预 :实验第 17 天对照药物组 ig 桂龙
咳喘宁胶囊 0158 g/ kg ,佛手挥发油高、中、低剂量
组分别 ig 20 % 佛手挥发油 01773、01309、01154
mL/ kg ,每日 1 次 ,均给药 10 d。模型组和对照组
不用任何药物干预。
11314 　激发 :实验第 24、25、26 天 ,将小鼠置于一密
闭容器中 ,以 1 % OVA 溶液 10 mL 雾化吸入 ,每天
1 次。
11315 　标本采集及检测 :于最后 1 次抗原激发后
48 h (实验第 28 天) ,将小鼠处死 ,收集外周血及
BAL F 标本。在显微镜下由专人进行白细胞计数。
以瑞氏液染色 ,分别计数其中的 EOS 及其他白细
胞分类。切取左肺叶小片组织制成石蜡切片 ,以
H E 染色 ,镜检观察支气管周围及肺组织细胞变化。
11316 　统计学处理 :数据采用 SPSS 1010 软件进
行统计 ,所得结果以 x ±s 表示 ,对各组数据先进行
正态检验和方差分析 ,若符合正态分布和方差齐性 ,
则进行单因素方差分析 ,多重比较采用 L SD 法 ;若
不符合方差齐性的要求 ,则采用秩和检验 ,多重比较
用 Mannn2Whiteney 法。
2 　结果
211 　对哮喘小鼠外周血白细胞总数及 EOS 的影
响 :结果见表 1。模型组与对照组比较 ,外周血白细
胞数有显著增高 ,EOS 也明显增加 ( P < 0101) 。用
不同剂量佛手挥发油干预后外周血白细胞数和
EOS 均较模型组有所下降。此作用与对照药物
相当。
表 1 　佛手挥发油对哮喘小鼠外周血及 BALF 中的细胞
总数和 EOS 的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 1 　Effect of volatile oil from Fructus Cit ri on WBC　
and EOS in peripheral blood and BALF of asthma
mice ( x ±s , n = 10)
组别
剂量/
(g·kg - 1 )
外周血
WBC/
( ×109 ·L - 1 )
EOS/
( ×104 ·mL - 1 )
BAL F
WBC/
( ×109 ·L - 1 )
EOS/
( ×104 ·mL - 1 )
对照 - 2159 ±0180 0150 ±0184 1141 ± 0177 0130 ±0152
模型 - 4171 ±1150 # # 2157 ±0198 # # 15106 ± 5164 # #10129 ±6175 # #
桂龙咳喘宁 0158 3133 ±0123 3 3 0183 ±0198 3 3 14120 ± 8191 3 3 5150 ±8153 #
佛手挥发油 11753 3117 ±0179 3 3 1133 ±0182 3 8184 ± 3191 3 1100 ±1126 3 3
01877 3128 ±0140 3 3 1117 ±1117 3 16160 ±13155 1150 ±1176 3
01175 3120 ±0170 3 3 1114 ±0169 3 3 10171 ± 7183 4114 ± 4106
　　与对照组比较 : # P < 0105 　# # P < 0101
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　# P < 01 05 　# # P < 01 01 vs cont rol group
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
212 　对哮喘小鼠 BAL F 中细胞总数及 EOS 的影
响 :结果见表 1。模型组与对照组比较 ,BAL F 中白
细胞数也有显著增高 , EOS 也明显增加 ( P <
0101) 。用不同剂量佛手挥发油干预后高剂量组
BAL F 白细胞数、高中剂量组 BAL F 中 EOS 较模
型组有所下降。而对照药物组及佛手挥发油低剂量
组与模型组相比无明显下降。
213 　对哮喘小鼠肺组织 EOS 浸润的影响 :肺组织
病理切片显示对照组支气管及血管周围无炎症细胞
浸润 ,未见 EOS ,上皮完整 ,平滑肌层均匀 ;模型组
支气管及血管周围大量炎症细胞浸润 , EOS 多见 ,
局部上皮不完整 ,平滑肌增厚明显。佛手挥发油干
预后支气管及血管周围炎症细胞浸润较模型组减
少 ,EOS 减少 ,局部上皮细胞破坏情况减轻 ,平滑肌
增厚不明显。以上改变随佛手挥发油剂量的加大而
好转。结果见图 1。
3 　讨论
　　哮喘是一种气道慢性变应炎症性疾病 ,EOS、肥
大细胞及 T淋巴细胞等多种炎性细胞参与气道慢
·001· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
图 1 　佛手挥发油对哮喘小鼠肺组织 EOS 的影响
Fig. 1 　Effect of volatile oil from Fructus Cit ri on EOS in lung tissue of asthma mice
性炎症的发生。糖皮质激素及支气管平滑肌解痉药
(平喘药) 由于能抑制气道慢性炎症 ,降低气道高反
应性 ,可缓解哮喘的急性发作 ,被认为是目前治疗哮
喘最有效的药物。然而应用糖皮质激素和平喘药副
作用较多 ,使病人难以长期坚持用药[4 ] 。因此 ,寻求
安全有效和依从性较好的既有抗炎又有平喘、祛痰、
止咳等作用的支气管哮喘治疗药物成了国内外哮喘
研究领域的热门课题。
佛手原产于佛教之国印度 ,后传入我国种植。
根据种植地的不同有广东的广佛手、福建的建佛手、
四川的川佛手和浙江金华的金佛手之分。本实验所
用的金佛手 ,据《本草纲目》记载 :“香味浓郁 ,味辛、
苦、酸 ,归肝脾经”,具有理气止痛、宽胸化痰、和胃止
呕等功效。现代药学研究发现佛手含有挥发油、多
糖类、黄酮类、香豆素类等物质 ,其中挥发油是佛手
所含的主要药效成分[2 ] 。本课题组曾对金佛手挥发
油的化学成分进行过气相色谱2质谱分析 ,发现主要
为 D2柠檬烯和蒈烯 ,质量分数分别达到 40102 % 和
21135 %[5 ] 。还发现佛手挥发油在动物实验中具有
对抗二甲苯和甲醛所致炎症的作用[3 ] 。国内学者曾
报道佛手醇提物能减少氨水所致小鼠咳嗽次数 ,增
加小鼠呼吸道酚红分泌量 ,延长吸入组胺所致豚鼠
哮喘的潜伏期限 ,具有明显的镇咳、祛痰、平喘等作
用[2 ] 。通过本实验研究 ,发现经过佛手挥发油的干
预 ,支气管哮喘小鼠外周血、BAL F 中白细胞总数和
EOS 均较哮喘模型组下降 ,以高剂量干预组差异尤
为显著。小鼠肺组织切片病理学检查也发现哮喘小
鼠支气管、血管周围有大量炎症细胞、EOS 浸润 ,而
经高剂量佛手挥发油干预后炎症细胞和 EOS 浸润
均较模型组减少。提示佛手挥发油可抑制哮喘小鼠
外周血、BAL F 中 EOS 水平 ,减少支气管周围 EOS
浸润 ,通过拮抗气道变应性炎症而发挥平喘作用 ,作
用强度与剂量有关。
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·101·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月