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RP-HPLC法测定槲寄生中槲寄生苷甲



全 文 :表 1 三叉苦中吴茱萸春的测定结果 ( n= 3)
Table 1  Determination of evolitrine inE . lepta (n= 3)
批号 吴茱萸春 / ( mg· g- 1 ) 批号 吴茱萸春 /( mg· g- 1 )
20050701 0. 138 20060714 0. 129
20050901 0. 125 20060801 0. 138
20051001 0. 141 20060913 0. 126
20060305 0. 133 20060923 0. 156
20060509 0. 151 20061012 0. 113
20060604 0. 126
  采用 UV— 2000紫外分光光度计对吴茱萸春在
200~ 400 nm波长进行扫描 ,结果在 249 nm波长处
有最大吸收 ,故选择 249 nm作为检测波长。
三叉苦化学成分复杂 ,用 HPLC法测定吴茱萸
春时 ,干扰组分较多。经过反复调整流动相比例 ,最
后采用流动相比例为乙腈-水 ( 45∶ 55) ,使吴茱萸春
与其他成分达到基线分离 ,重现性好。
参考文献:
[1 ] 江苏新医学院 . 中药大辞典 [M ] . 上海:上海科技出版社 ,
1992.
[2 ] 刁远明 , 高动衡 , 彭新生 . 三叉苦化学成分研究 [ J ]. 中草
药 , 2004, 35( 10): 1098-1099.
RP-HPLC法测定槲寄生中槲寄生苷甲
韩 冬 ,徐雅娟* ,解生旭 ,赵宏峰 ,司云珊 ,徐东铭
(吉林省中医中药研究院 ,吉林 长春  130021)
  槲寄生为桑寄生科植物槲寄生 Viscum col-
oratum ( Koma r. ) Nakai的干燥带叶茎枝 ,具有祛
风湿 ,补肝肾 ,强筋骨 ,安胎功能 ,主要用于风湿痹
痛 ,腰膝酸软 ,胎动不安 [1 ]。 槲寄生主要有效成分为
黄酮类化合物和一些高分子化合物 [2 ] ,其水提取部
分对冠心病引起的心绞痛有较好疗效 ,主要成分为
槲寄生苷甲 [3 ]。《中国药典》 2005年版收载槲寄生以
齐墩果酸为对照品进行薄层色谱扫描测定。笔者从
槲寄生中分离纯化了槲寄生苷甲 ,并作为对照品进
行了纯化 ,质量分数达 98%以上。 因此本实验采用
HPLC法测定槲寄生中槲寄生苷甲的量 ,方法简便 ,
灵敏度高 ,重现性好。
1 仪器与试药
1. 1 仪器: 高效液相色谱仪:美国 Waters 600泵 ,
美国 486紫外检测器 , 7725手动进样器。
1. 2 试剂与样品: 槲寄生苷甲实验室自制 ,质量分
数 99. 52%以上 ,甲醇为色谱纯 ,水为纯净水。槲寄生
采自主产区吉林省各地区 ,经长春中医药大学邓明
鲁教授鉴定为桑寄生科植物槲寄生 V. coloratum
( Komar. ) Nakai。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件: 色谱柱为美国 Novapak C18 ( 100
mm× 8 mm, 5μm) ,流动相:甲醇 -1%冰醋酸 ( 35∶
65) ,体积流量: 1 mL /min,检测波长为 283 nm,进样
量均为 10μL。理论塔板数按槲寄生苷甲计不得少于
1 500。
2. 2 对照品溶液制备:精密称取槲寄生苷甲对照品
适量 ,加甲醇制成 0. 09 mg /m L对照品溶液。
t /min
* -槲寄生苷甲
* -viscumside A
图 1 槲寄生苷甲对照品 (A)和槲寄生 (B)的
HPLC色谱图
Fig. 1 HPLCChromatograms of viscumside A refer-
ence substance ( A) and V. coloratum ( B)
2. 3 供试品溶液的制备:精密称取本品 5 g ,加甲醇
50 mL,超声 30 min, 3次 ,合并提取液 ,蒸干 ,加水 30
mL溶解 ,调 pH值为 5. 0~ 5. 5,用醋酸乙酯提取 6
次 ,每次 20 mL,合并提取液 ,并回收醋酸乙酯 ,甲醇
定容 5 mL量瓶中 ,摇匀 ,即得。
2. 4 标准曲线的绘制:精密吸取槲寄生苷甲对照品
溶液 8、 10、 12、 14、 16μL,注入高效液相色谱仪 ,测
·127·中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 39卷第 1期 2008年 1月
收稿日期: 2007-03-10基金项目:国家科技部“十五”攻关项目 ( 99-929-01-30)作者简介:韩 冬 ( 1975- ) ,女 ,吉林省长春市人 , 1994年毕业于长春中医学院中药学专业 ,获理学学士学位 ,现任职于吉林省中医中药研究院重点实验室 ,长春中医药大学在读研究生 ,主要从事中药化学的基础研究和新药研发。   Tel: ( 0431) 86816848
E-mai l: handong1975@ yahoo. com. cn
* 通讯作者 徐雅娟  Tel: ( 0431) 86816849  E-mai l: xyj6492@ sh ou. com
定。槲寄生苷甲色谱峰峰面积积分值 (Y )与质量浓
度 ( X )之间呈良好线性关系 ,回归方程 Y =
1 010 456. 2+ 3 086 233. 33 X , r= 0. 999 5,表明槲
寄生苷甲质量浓度在 0. 72~ 1. 44μg与峰面积积分
值呈良好的线性关系。
2. 5 精密度试验:精密吸取槲寄生苷甲对照品溶
液 ,连续进样 5次 ,测定峰面积 ,计算得 RSD为
3. 24% 。
2. 6 重现性试验:精密称取槲寄生药材粉末 5 g,共
5份 ,平行制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算质量分
数 ,结果 RSD为 1. 97% 。
2. 7 稳定性试验:精密称取药材粉末 5 g ,制备供试
品溶液 ,分别测定 0、 2、 4、 8、 24 h的槲寄生苷甲峰面
积积分值 ,结果 RSD为 2. 39% ,表明供试品溶液在
24 h内稳定。
2. 8 回收率试验:精密称取样品粉末 5份 ,每份 0. 5
g ,分别精密加入一定量对照品溶液 ,依法测定 ,结果
平均回收率为 98. 89% , RSD为 2. 59% (n= 5)。
2. 9 样品的测定:取不同产地槲寄生药材制备供试
品溶液 ,进样测定 ,采用外标法计算槲寄生苷甲的
量 ,每批样品测定 2份 ,测定结果见表 1。
表 1 槲寄生中槲寄生苷甲的测定结果 (n= 2)
Table 1  Determination of viscumside A in
V. coloratum ( n= 2)
产 地 采集方式 采集时间 槲寄生苷甲 /%
通化   市售品 2002-07 0. 054
白城   市售品 2002-05 0. 096
九台   市售品 2002-06 0. 190
公主岭  市售品 2002-06 0. 210
吉林   市售品 2002-06 0. 115四平   市售品 2002-07 0. 189
长春Ⅰ 批 市售品 2002-06 0. 230
长春Ⅱ批 市售品 2002-05 0. 216
和龙   市售品 2002-08 0. 231
抚松   市售品 2002-08 0. 223
3 讨论
3. 1 检测波长的选择:对槲寄生苷甲进行紫外全波
长扫描 ,结果最大吸收波长为 283 nm ,故选择 283
nm作为槲寄生苷甲的检测波长。
3. 2 提取方法的选择:对方法、溶剂、时间经多次试
验摸索 ,以甲醇超声 30 min提取 3次后 ,可将槲寄生
中槲寄生苷甲提取较完全。
参考文献:
[1 ] 中国药典 [S ] . 一部 . 2005.
[2 ] 孙艳秋 , 刘 珂 ,王守愚 , 等 . 槲寄生的研究进展 [ J] . 中草
药 , 2000, 31( 6): 471-474.
[3 ] 何晓树 , 雷兴翰 , 杨福秋 . 槲寄生苷甲化学结构修饰及心血
管活性研究 [ J ]. 中国医药工业杂志 , 1989, 20( 3): 173.
珀金埃尔默宣布在全球范围内启动 ECOANALYTIX项目
改善食品安全、水质与生物燃料开发
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·128· 中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 39卷第 1期 2008年 1月