全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1413·
3讨论
3．1 提取条件的优化：通过正交设计实验考察了乙
醇浓度、温度、时间和料液比4个因素对有效成分转
移率的影响，结果发现当乙醇为90％，提取温度为90
℃，料液比为1 z 10时，提取3h为最优。在此条件下
提取3次后4种三萜酸有效成分转移率均在96．2％
以上，能够满足测定要求。
3．2水洗涤对测定效果的影响：在供试液制备中曾
将提取液直接进行HPLC分析测定，结果发现，由于
大量水溶性杂质的存在严重干扰了2a一羟基齐墩果
酸和2a一羟基熊果酸色谱峰的分离，增加测定结果不
确定性。通过洗涤可以去除水溶性杂质的干扰，使得
基线飘逸得到改善，测定效果准确性增强。对洗涤前
后样品中4种三萜酸定量测定结果表明，洗涤过程
不会造成成分损失。
3．3本实验建立的枇杷叶中4种三萜酸RP—HPLC
测定方法，具有操作简单、快速、准确的优点，为枇杷
叶质量控制提供了一个可靠的测定方法，同时也为
枇杷叶在治疗糖尿病和抗癌方面的研究提供了一个
定量分析方法。
参考文献：
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附子中3种双酯型生物碱的定量分析
简 晖h2，董宁霞1，郑晗1，冯育林1’2，龚千锋1’¨，杨世林1’2
(1．江西中医学院，江西南昌 330006}2．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌330004)
摘 要：目的 建立附子中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的定量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，选择
HypersilODS2色谱柱(250mm×4．6mm，5弘m)，以40rnmol／L乙酸铵溶液一乙腈为流动相梯度洗脱。检测波长
235nm。结果乌头碱、次乌头碱、新乌头碱均得到较好分离，分别在0．170～85、0．319～159．5、0．218～109腿呈
良好的线性关系，平均回收率为102．1％(RsD=1．84％)、97．7％(RSD一1．92％)、96．4％(RSD=2．51％)。结论
该方法简便、灵敏、准确，可用于附子的质量控制。
关键词：附子I乌头碱；次乌头碱；新乌头碱；高效液相色谱
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1413一02
附子为毛茛科植物乌头Aconitumcar ichaeli
Debx．根的加工品，具有回阳救逆、补火助阳等功
效[1]，是lf6i床常用的重要中药。附子生品有大毒，其
中所含的二萜双酯型生物碱既是有效成分，又是毒
性成分[2]，为保证I临床用药的安全有效，须严格控制
附子中此类生物碱的量。附子所含的二萜双酯型生
物碱中，较重要和量较高的有乌头碱、次乌头碱、新
乌头碱[3]，本实验采用高效液相色谱法同时测定这3
种双酯型生物碱的量，操作简便，准确度高，对附子
的质量控制和药效评价具有重要意义。
1仪器与材料
DionexU3000(T一3XOO柱温箱、PDA一3000
检测器、P一3400A分析泵、WPS自动进样器)，
KQ一100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)。
乙腈、甲醇为色谱纯，乙酸铵、乙醚、氯仿等试剂
均为分析纯。盐附子购于四川江油恒源药业集团有限
公司，经本院生药教研室赖学文教授鉴定为正品附
子。乌头碱对照品(批号110720—200410)、新乌头碱对
照品(批号110799—200404)、次乌头碱对照品(批号
110798—200404)购于中国药品生物制品检定所。
2方法与结果
2．1色谱条件：HypersilODS2色谱柱(250mm×
4．6mm，5pm)I流动相：40mmol／L乙酸铵溶液一
收稿日期：2007—12—06
*通讯作者龚千锋Tell(0791)7118852E—mail,gongqf2002@163．corn
万方数据
·1414· 中草菊 ChineseTraditionalandHerh!Drugs第39卷第9期2008年9月
乙腈(B)，梯度洗脱：0～16rain63％A，15～45min
63％～57％A；体积流量1．0mL／min；检测波长235
nm；柱温25℃。
2．2对照品溶液的制备：精密称取乌头碱1．70mg、
次乌头碱3．19mg和新乌头碱2．18mg，置于同一10
mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2．3供试品溶液的制备：取盐附子细粉约2g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚20mL与氨试液2
mL，密塞，摇匀，放置过夜，超声提取10min，滤过，
药渣再用乙醚洗涤3次，每次10mL，滤过，洗液与滤
液合并，低温蒸干。残渣用甲醇溶解，并定容至2
mL，摇匀。临用前用0．45pm微孔滤膜滤过。
2．4线性关系考察：精密量取对照品溶液1、10、50、
100、200、500弘L分别置于6个1mL量瓶中，用甲醇
稀释至刻度，摇匀，分别进样20肛L，按上述色谱条件进
行测定。以峰面积(y)对进样浓度(X)进行回归处理，
得到乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的回归方程分别为：
y=0．3439X+4．571×103(，．=0．9994)，Y=
0．4873X一2．025X10-3(，．=0．9998)，Y=0．3941
X+5．862×10-3(，．=0．9995)；3者的线性范围分别
为：0．170～85、0．319～159．5、0。218～109pg／mL。
2．5精密度试验：精密吸取对照品溶液，连续进样6
次，每次进样20pL。乌头碱、新乌头碱、次乌头碱峰
面积的RSD分别为0．73％、0．68％、0．81％，表明仪
器精密度良好。
2．6 稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0、4、
8、16、24h进样测定。结果乌头碱、新乌头碱、次乌
头碱质量分数的RSD分别为1．27％、1．24％、
1．19％，表明溶液在24h内基本稳定。
2．7重现性试验：取同一批附子药材6份，按“2．3”
项下方法制备供试品溶液，并按“2．1”项下色谱条件
进样测定。结果样品中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱
质量分数的RSD分别为1．85％、1．90％、1．79％。
2．8加样回收试验：精密称取已知乌头碱、新乌头
碱、次乌头碱质量分数的盐附子细粉6份，每份约
0．5g，精密称定。分别精密加入“2．2”项下对照品溶
液0．5mL，按‘‘2．3”项下方法进行制备，测定回收
率。结果乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的平均回收率
分别为102．1％(RSD=1．84％)、97．7％(RSD—
1．92％)、96．4％(RSD=2．51％)。
2．9样品测定：将“2．3”项下供试品溶液及稀释10
倍的对照品溶液分别进样20pL测定，记录色谱图
(图1)，计算供试品溶液中乌头碱、次乌头碱、新乌头
碱的量，结果见表1。
r丁面匹可1五矿；乃石■5矿r胃百丽巧气——羽5
，／min
1一新乌头碱2一乌头碱3一次乌头碱
1一mesaconitine2-aconitine3．hypoaconitine
图1对照品(A)及样品(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsofreference
substance(A)andsamples(B)
表I样品中3种双酯型生物碱的测定结果恤一4)
Table1 Determinationofthreediesterditerpenoid
alkaloidsinsamples妇=4)
3讨论
3．1提取条件的考察：以乌头碱、次乌头碱、新乌头
碱3种双酯型生物碱的总量为指标，采用正交试验
考察了药材粒度、提取溶剂、溶剂用量、超声时间等
因素对试验结果的影响，结果表明提取溶剂、冷浸时
间对结果有显著影响，其余因素影响甚微。优选出的
最佳提取条件为药材粉碎成细粉，加10倍量乙醚和
1倍量氨试液，放置过夜后，超声提取10rain。
3．2检测波长的选择：将混合对照品溶液进样分离
后，利用PDA检测器扫描其全波长吸收光谱，发现乌
头碱、次乌头碱、新乌头碱最大吸收波长均在230---,
240nm。对此波长范围进行重点考察，选择230、232、
235、238、240rim5个检测波长，比较其光谱图。结果
表明，235nm波长下的峰高最高，且噪声小，具有较
高的灵敏度，故选择235nm作为检测波长。
3．3流动相的选择：目前附子中双酯型生物碱的测
定多采用反相离子对色谱法，以表面活性剂SDS作
为离子对试剂，但SDS的价格较贵，且会吸附在硅
胶键合相上较难除去，严重污染色谱柱。本实验以乙
酸铵溶液一乙睛作为流动相系统，梯度洗脱，乌头碱、
次乌头碱、新乌头碱均能得到较好分离，并且减轻了
对色谱柱的损害。
参考文献：
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万方数据
附子中3种双酯型生物碱的定量分析
作者： 简晖， 董宁霞， 郑晗， 冯育林， 龚千锋， 杨世林
作者单位： 简晖,冯育林,龚千锋,杨世林(江西中医学院,江西,南昌,330006;中药固体制剂制造技术国家
工程研究中心,江西,南昌,330004)， 董宁霞,郑晗(江西中医学院,江西,南昌,330006)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(9)
被引用次数： 7次

参考文献(3条)
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2.刘芳;于向红;李飞 HPLC测定附子及其炮制品中3种双酯型生物碱的含量[期刊论文]-中国中药杂志 2006(14)
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本文读者也读过(10条)
1. 董宁霞.郑晗.龚千锋 附子中三种双酯型生物碱的定量分析[会议论文]-2008
2. 侯大斌.赵祥升.王惠.许源.HOU Da-bin.ZHAO Xiang-sheng.WANG Hui.XU Yuan 附子不同组织中生物碱含量的测
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3. 张丽.李锦.王玉明.刘昆 HPLC法测定附子配伍前后乌头类生物碱含量[期刊论文]-天津中医药大学学报
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8. 岳玲 附子中乌头碱限量检查方法改进[期刊论文]-中成药2002,24(10)
9. 余葱葱.郭力.彭成 不同煎煮时间的附子毒效组分与毒性成分质量控制研究[会议论文]-2008
10. 王瑞.孙毅坤.王耘.乔延江.WANG Rui.SUN Yi-kun.WANG Yun.QIAO Yan-jiang 高效液相色谱法测定附子及其炮
制品中三种双酯型生物碱[期刊论文]-现代生物医学进展2007,7(7)

引证文献(7条)
1.刘少静.杨黎彬.赵宁.王小库.韩禄 RP-HPLC-ELSD同时测定附子地上部分中新乌头碱和次乌头碱的含量[期刊论文
]-应用化工 2011(6)
2.刘少静.王小库.朱改改.杨黎彬 RP-HPLC同时测定附子地上部分中新乌头碱和次乌头碱的含量[期刊论文]-安徽医
药 2011(9)
3.黄志芳.唐小龙.刘云华.陈燕.刘玉红.易进海 附子提取液的稳定性研究[期刊论文]-华西药学杂志 2012(2)
4.黄志芳.易进海.陈燕.刘云华.刘玉红 附子配伍和汤剂pH对6种酯型生物碱含量的影响[期刊论文]-中国实验方剂
学杂志 2012(8)
5.唐忠 附子化学成分分析方法及药理作用探讨[期刊论文]-中国中医药咨讯 2011(16)
6.王晓芬.朱英 附子化学成分分析方法及药理作用的研究进展[期刊论文]-海峡药学 2010(11)
7.赵翡翠.李杰 我国乌头属药用植物中生物碱分析方法的研究进展[期刊论文]-中药材 2010(8)

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