全 文 ：别为 94. 96%、100. 72% , R SD 分别为 0. 44%、
0. 81% (n= 6)。
2110　样品测定: 每组细胞培养物按 21311 项方法
制备供试品溶液, 依法进样测定, 每个样品进样 2
次, 取平均值, 并计算102DAB Ë 的量, 结果见表1。
表 1　OGA 诱导红豆杉细胞培养中 10-DAB Ë 的
测定结果 (n= 4, Α= 0. 05)
Table 1　D eterm ination of 10-DAB Ë in T1 yunnanens is
cell suspen sion induced by OGA
O GA 诱导子浓度ö
(Λg·mL - 1) 102DAB Ë 质量分数细胞内ö(m g·g- 1) 培养液中ö(m g·L - 1)
0 0. 052±0. 001 0. 092±0. 039
20 0. 143±0. 011 0. 151±0. 055
40 0. 178±0. 026 0. 275±0. 059
60 0. 139±0. 022 0. 179±0. 027
80 0. 154±0. 015 0. 219±0. 048
3　讨论
311　本实验建立了H PL C 测定云南红豆杉细胞悬
浮培养物 (细胞及胞外液) 中 102DAB Ë 量的方法。
将102DAB Ë 对照品的甲醇溶液在200～ 400 nm 内
扫描, 结果在232 nm 处有最大吸收, 故选232 nm 为
检测波长。同时, 分别采用不同流动相组成: 甲醇2
水、乙腈2水、甲醇2乙腈2水, 以及各流动相不同配比
等多种条件下进行洗脱, 考察各种流动相对细胞培
养物供试品中 102DAB Ë 分离度的影响, 结果发现
以甲醇2乙腈2水 (2∶3∶8) 为流动相等度洗脱下,
102DAB Ë 得到良好的分离, 见图1。本操作简便可
靠、重现性好、灵敏度高, 对红豆杉细胞大规模生产
具有实用价值, 此方法的建立将为云南红豆杉细胞
生产102DAB Ë 开发研究提供依据。
312　诱导作用: O GA 为果胶的不完全酶解产物, 其
单体半乳糖醛酸是组成植物细胞壁中果胶质的主要
成分, 参与细胞壁复杂网架的形成。以O GA 为诱导
物, 可促进人参细胞中人参皂苷的合成[8 ] , 但未见其
对红豆杉属植物和紫杉烷类合成诱导作用的报道。本
实验测定结果可见, O GA 可显著提高云南红豆杉细
胞中102DAB Ë 的量, 其中O GA 为40 ΛgömL 时诱导
效果较优, 关于O GA 对102DAB Ë 等紫杉烷类化合
物生物合成的诱导作用机制有待进一步探讨。
参考文献:
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草叶总黄酮的测定及最佳采收期研究
陈伟光, 盛　静Ξ
(嘉兴学院医学院, 浙江 嘉兴　314001)
摘　要: 目的　建立　草叶总黄酮的测定方法, 并考察总黄酮的量随　草不同采摘时间的动态变化。方法　通过单
因素试验、正交试验, 考察乙醇体积分数、料液比、提取时间对提取液中总黄酮量的影响, 确定最佳提取条件, 然后
在该条件下对不同时间采收的　草叶进行总黄酮提取并进行定量测定。结果　所考察的因素中, 草总黄酮的超
声提取工艺各因素影响程度为: 乙醇体积分数> 提取时间> 料液比; 最佳水平搭配为: A 2B 3C3。不同时间采收的　
草中总黄酮的量有明显变化。结论　　草中黄酮类成分提取的最佳工艺为 75% 乙醇, 料液比 1∶60, 超声提取 50
m in。　草总黄酮的量与采摘时间密切相关, 以 8 月采收量最高。
关键词: 草; 总黄酮; 正交设计
中图分类号: R 28216　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2008) 01 0120 03
·021· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
收稿日期: 2007203215
基金项目: 嘉兴市科技局科研基金资助项目 (2005A Y3042)
作者简介: 陈伟光 (1952—) , 男, 副教授, 研究方向为天然药物化学成分的提取分离和定量分析。　T el: (0573) 82259796
E2m ail: jxw eiguang@ 126. com
　　　草为桑科植物H um u lus scand ens (L ou r1)
M err1 的全草。具清热解毒、利尿消肿等功效, 用于
肺结核、潮热、胃肠炎、痢疾、淋症、痔疮等证。据报道
草叶含木犀草素葡萄糖苷、大波斯菊苷、牡荆素等
黄酮类成分[1 ]。在研究　草提取物的抗菌作用时发
现, 其水提取液对革兰阳性菌具有较强的抗菌活性,
并证实抗菌作用与　草中所含的黄酮类成分有关。
本研究通过单因素试验, 正交试验考察了乙醇体积
分数、溶剂用量、提取时间3 因素对　草叶中总黄酮
提取率的影响, 建立紫外分光光度法测定　草总黄
酮量的方法, 继而观察不同采收期　草总黄酮量的
动态变化, 从而为合理开发利用　草资源提供科学
依据。
1　仪器与材料
岛津UV —2401PC 紫外分光光度计, SW B 5200
型超声清洗机 (上海必能信超声有限公司) , 电子天
平 (北京赛多利斯)。芦丁对照品 (中国药品生物制品
检定所) , 其他试剂均为分析纯。　草采自嘉兴郊区,
由本学院生药、天然药物化学教研室陈伟光副教授
鉴定。采集　草叶置通风处晾干, 密闭保存, 临用前
在60 ℃下烘烤至恒重后备用。
2　方法与结果
211　　草叶中黄酮的紫外测定
21111　标准曲线制备: 精密称取干燥至恒重的无水
芦丁10. 000 m g, 置50 mL 量瓶中, 加60% 乙醇至刻
度, 摇匀, 即得0. 20 m gömL 对照品溶液。精密吸取
该对照品溶液 2、4、6、8、10 mL , 分别置 25 mL 量瓶
中, 用亚硝酸钠2硝酸铝法[2 ]于512 nm 处测吸光度。
以质量浓度为纵坐标, 吸光度值为横坐标进行线性
回归, 得回归方程为: A = 0. 014 1 C - 0. 003 7, R 2=
0. 999 9。线性范围为16～ 80 ΛgömL。
21112　供试品溶液制备: 分别精密称取　草叶粉末
1. 000 g, 置 100 mL 锥形瓶中, 加入适量溶剂, 超声
提取一定时间, 滤过, 用少量溶剂淋洗药渣, 水浴蒸
干得浸膏, 浸膏加适量溶剂, 超声助溶, 定容于 25
mL 量瓶中, 3 000 röm in 离心15 m in, 精密吸取上清
液 1. 00 mL , 按标准曲线制备项下处理, 测定吸光
度, 计算黄酮的量。
21113 　精密度试验: 取同一质量浓度对照品溶液 4
份, 按上述实验方法操作, 测定其吸光度。结果表明,
吸光度R SD 为1. 42%。
21114　稳定性试验: 测定同一供试品溶液在不同时
间吸光度, 结果表明, 吸光度值在 10～ 40 m in 内基
本不变, R SD 为 2. 12% , 因此测定应控制在 40 m in
内完成。
21115　重现性试验: 称取同一批样品粉末 4 份, 按
上述方法制备样品, 测定吸光度计算黄酮质量分数
的R SD 为1. 63%。
21116　回收率试验: 取已知总黄酮量的样品1 g, 再
加入0. 2 m gömL 的芦丁对照品溶液1 mL , 按21112
项制备供试品溶液, 测定黄酮的量, 结果平均回收率
为99. 3% , R SD = 1. 87% (n= 3)。
212　影响　草黄酮提取效果的单因素分析
21211　乙醇体积分数对　草黄酮提取效果的影响:
考察了不同体积分数乙醇对　草叶总黄酮提取的影
响, 选择50%、60%、75%、85%、95% 乙醇进行试验,
料液比为 1∶60, 超声提取 40 m in, 按上述方法测定
黄酮的量。结果见图12A。在乙醇为75% 时, 黄酮的
提取量最大。在此基础上随着乙醇量的增大, 黄酮的
提取量显著减少。
21212　提取时间对　草黄酮提取效果的影响: 分别
以料液比为1∶60, 乙醇为75% , 超声提取30、40、50、
60、70 m in 后, 按上述方法测定总黄酮的量, 结果见
图12B。在提取时间为50 m in 左右时, 黄酮的提取量
最大。从30～ 50 m in, 随着提取时间的增加, 黄酮的
提取量亦持续增加。但是超过50 m in 后, 黄酮的提
取量反而有所下降。
21213　料液比对　草酮提取效果的影响: 分别以
1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70、1∶80 的料液
比, 各自在乙醇为75% , 超声提取50 m in 后, 按上述
方法测定总黄酮的量, 结果见图12C。在料液比为1∶
60 时, 黄酮的提取量最大。低于1∶60 时随料液比的
增加, 黄酮的提取量增加。超过1∶60 随着乙醇量的
增大, 黄酮的提取量趋于平稳, 说明在料液比为
1∶60时, 黄酮已基本提取完全。
213　正交试验及结果: 对影响　草黄酮提取效果的
3 个主要影响因素乙醇体积分数 (A )、料液比 (B )、
提取时间 (C)进行研究。按表1 所示的因素水平进行
正交试验, 测定黄酮的量, 结果见表2。
　　由表 2 可知, 对　草黄酮的提取, 各因素的影响
效果依次是A > C > B , 通过正交试验得出的最佳组
合是A 2B 3C 3。即乙醇体积分数为75%、料液比为1∶
60、提取时间为50 m in, 这与单因素试验结果吻合。
214　方差结果分析: 方差分析结果见表3。可见乙醇
体积分数对总黄酮提取有极显著影响, 而溶剂用量、
提取时间也有影响, 但无显著差异。
215　不同时间采集的　草叶总黄酮测定: 将不同时
间采收的　草粉碎成粗粉, 称取1. 000 g, 以上述优
·121·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
图 1　黄酮化合物单因素水平实验结果
F ig. 1　Single-factor exper imen t of f lavono ids
表 1　因素水平表
Table 1　Factors and levels
水平 因　素
A ö% Bö倍 Cöm in
1 60 30 30
2 75 45 40
3 95 60 50
表 2　正交试验结果 (n= 3)
Table 2　Results of orthogonal test (n= 3)
实验号 A B C D 黄酮ö%
1 　1 　1 　1 　1 1. 810
2 1 2 2 2 1. 921
3 1 3 3 3 2. 081
4 2 1 2 3 2. 077
5 2 2 3 1 2. 138
6 2 3 1 2 2. 072
7 3 1 3 2 1. 244
8 3 2 1 3 1. 223
9 3 3 2 1 1. 301
K 1 5. 81 5. 13 5. 10 5. 25
K 2 6. 29 5. 28 5. 30 5. 24
K 3 3. 77 5. 45 5. 46 5. 38
R 2. 52 0. 32 0. 36 0. 14
表 3　方差分析结果
Table 3　Analysis of var iance
方差来源 离均差平方和 自由度 均　方 F 值 P 值
A 1. 194 8 2 0. 597 4 279. 862 1 P < 0. 01
B 0. 017 4 2 0. 008 7 　4. 071 2
C 0. 021 4 2 0. 010 7 　5. 021 1
D (误差) 0. 004 3 2 0. 002 1
　　F 0. 01 (2, 2) = 99. 0
选的条件提取, 按 21112 法测定其吸光度, 计算黄酮
的质量分数, 结果见表4。同一区域、不同时间采摘的
草叶黄酮的量变化较大, 以8 月最高, 9 月次之, 10
月采集的最低。
表 4　不同采集期　草叶总黄酮的量 (n= 3)
Table 4　Flavono ids in leaves of H 1 scandens
collected at d ifferen t times (n= 3)
采集日期 黄酮ö% RSD ö%
06220 2. 973 2. 23
07220 2. 906 1. 94
08219 3. 758 2. 16
09220 3. 500 2. 05
10220 2. 171 1. 76
3　讨论与结论
311　　草黄酮是　草中抗菌的主要活性成分之一,
叶中黄酮量是全草的 3 倍, 本实验建立了紫外分光
光度法测定　草中总黄酮的方法。实验表明, 本法具
有操作简单、灵敏度高、重现性好等优点, 用于　草
中总黄酮的测定, 结果满意。
312　　草总黄酮量与采摘时间密切相关, 以8、9 月
采摘量最高, 故以此时采收为宜。
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　　 (上接第98 页)
从而使线粒体能量合成障碍, 导致线粒体功能下降,
出现肌膜破损, 细胞核消失; 肌丝排列紊乱, 肌丝溶
解、断裂、紊乱; 线粒体肿胀, 嵴断裂现象。本实验研
究证实, 蒲黄总黄酮能明显降低 Cu 的水平, 提高
Zn 和 Ca 的水平。减轻自由基的损害, 促进能量代
谢恢复, 减轻心肌梗死时的心肌损害。抑制线粒体内
自由基的增加, 减轻心肌细胞超微结构的损伤。
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