全 文 ：中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1327·
2．7．2 洗脱流速对解吸性能的影响：分别采用
0．5、1、2BV／h的洗脱流速对已吸附达饱和的树脂
进行洗脱，定量取样，测定流出液中阿魏酸的质量浓
度，见图7。结果表明，流速越慢洗脱效果越好，这主
要是因为流速越慢越有利于阿魏酸在树脂和洗脱液
间进行相扩散和膜扩散，从而达到溶解平衡。在0．5
BV／h的流速下，洗脱峰比较集中，4．5BV的洗脱
液就可达到洗脱完全，而1、2BV／h流速的则分别
为5BV和8BV，因而选择0．5BV／h作为最佳洗
脱流速。
l 200
毛800
i
链
藿400
0
U j O 9
床体积／By
a．0．5BV／hb一1BV／hc一2BV／h
图7洗脱液中阿魏酸质量浓度随床体积的变化
Fig．7Changeofferulicacidoncontentsineluent
withdifferentb dvolumes
2．8产品的制备：在最佳的吸附和解吸条件下(含
阿魏酸质量浓度为293．2mg／L，pH4．0，吸附流速
2BV／h下，可处理样品溶液16BV。在洗脱剂乙醇
体积分数35％，洗脱流速0．5BV／h的流速下，4．5
BV就可将阿魏酸充分洗脱下，过柱得率达到
89．2％)对阿魏酸进行吸附和解吸，解吸液浓缩，真
空低温干燥后取样测定阿魏酸的量。平行进行3次
试验，结果产品中阿魏酸的平均质量分数为
25．1％，而原料中仅为0．156％，见图8。可见所得产
品与当归药材相比杂质峰明显减少，说明采用大孔
树脂吸附法显著富集，纯化产品的效果良好。
一
nJl¨II．I L
O 5 lO 15
t／rain
图8纯化后产品的HPLC色谱图
Fig．8HPLCChromatogramofpu ifiedproduct
3讨论
虽然大孔树脂吸附作用的根本因素是吸附剂与
树脂间的范德华力作用，但是具有酚羟基结构的阿
魏酸易形成氢键，更有利于与极性树脂吸附[4]。此外
大孑L树脂在实际应用中还有许多的问题需要解决，
如大孔吸附树脂中残留物的去除、实际应用中树脂
吸附能力下降或降解的问题、废弃树脂的处理等均
需要更多的改进与研究。
实验中发现阿魏酸溶液在加入少量醋酸后能够
抑制其分解，在乙醇或水溶液中不稳定，此外低温可
使其稳定性增加，因此其提取液及纯化后产品要低
温保存。
当归化学成分复杂，吸附阿魏酸后的流出液中
还有许多药效成分，选择其他适宜型号的树脂对其
他药效成分进行吸附纯化，以充分利用药材资源应
该作为今后研究工作的重点。
参考文献：
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大孔吸附树脂富集刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的研究
杨书良，杨 渡，田 凤，孙婷
(哈尔滨商业大学药学院，黑龙江哈尔滨 150076)
摘要：目的富集刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷。方法 以紫丁香苷和刺五加总苷为指标，考察D一101大孔吸
附树脂分离纯化紫丁香苷和刺五加总苷的最佳吸附及洗脱条件。结果 富集紫丁香苷和刺五加总苷的工艺为样品
溶液(o．2g药材／mL)以1mL／min的上柱速度上柱，最大上样量为1g药材／g树脂，弃去水洗脱液，收集5BV
75％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得。经D一101大孔吸附树脂处理后紫丁香苷和刺五加总苷提取率可达
收稿日期：2007—12-10
万方数据
·1328· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
89％以上，终产品中刺五加总苷质量分数可达14％以上。结论本方法适合于刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的
富集。
关键词：刺五加；紫丁香苷；刺五加总苷，大孔吸附树脂
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1327—04
刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanax
senticosusHarms的干燥根及根茎，具有显著的扩张
血管、降压和抗心肌缺血、脑缺血作用[1’2]。刺五加主
要含有刺五加总苷，包括紫丁香苷、刺五加苷D、异
秦皮啶等成分。因此本实验以紫丁香苷和刺五加总
苷的量为指标，采用大孔吸附树脂法进行富集，从而
确定刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的最佳富集
工艺。
1仪器与试药
UV一756型分光光度计(上海光谱仪器有限公
司)；美国戴安高效液相色谱仪，包括UVD340U二
极管阵列检测器，ASI一100自动进样器，AL系列溶
剂过滤器，PeakNet色谱工作站；超声波振荡提取器
(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；CP224S型分析
天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
刺五加购自哈尔滨中药二厂，由哈尔滨商业大
学张德连副教授鉴定为五加科植物刺五加A．senti—
cOSUSHarms的干燥根及根茎或茎；紫丁香苷对照品
(批号：111574—200201，供定量测定用)，购自中国药
品生物制品检定所；大孔树脂由南开大学提供；除高
效液相用甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1 大孔吸附树脂的预处理和再生：取大孔树脂湿
法装柱保持液面高于大孔树脂，95％乙醇浸泡24h。
用2BV乙醇，以2BV／h的速度通过树脂层，并浸泡
4～5h。用乙醇以2BV／h的流速通过树脂层，洗至
流出液加水不呈白色浑浊为止，并用水以同样流速
洗净乙醇。用2BV的5％盐酸溶液，以4～6BV／h
的流速通过树脂层，并浸泡2～4h，而后用水以同
样流速洗至出水pH值中性。用2BV的2％氢氧化
钠溶液，以4～6BV／h的流速通过树脂层，并浸泡
2～4h，而后用水以同样流速洗至出水pH值中性，
即得。
2．2上柱样品液的制备：取刺五加粗粉适量，加20
倍量蒸馏水，煎煮2次，每次3h，合并煎液，滤过，滤
液浓缩成原药材1／10的浸膏。临用时现溶解配制成
0．2g生药／mL的上柱样品溶液。
2．3紫丁香苷HPLC测定方法的建立‘3]
2．3．1色谱条件：美国迪马公司ODSC】8(200mm×
4．6mm，5弘m)；以甲醇一乙腈一水(10：lO：80)为流动
相；检测波长265nm。理论板数按紫丁香苷峰计算
应不低于2000。
2．3．2对照品溶液的制备：取紫丁香苷对照品1．2
mg，精密称定，置10mL量瓶中，以甲醇超声溶解并
稀释至刻度，摇匀，滤过，即得(含紫丁香苷0．12
mg／mL)。
2．3．3供试品溶液的制备：取刺五加浸膏约0．2g，
精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2．3．4标准曲线的绘制：精密吸取0．12mg／mL紫
丁香苷对照品溶液0．2、0．4、0．6、0．8、1、2、4、6、8、
10、12、14、16、18、20pL，分别进样，测定。以紫丁香
苷进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，其回归方程为
Y=33．083X--0．1275，r=O．999。结果表明紫丁
香苷在0．024～2．400ttg与峰面积呈良好的线性
关系。
2．3．5样品测定：分别精密吸取供试品溶液和对照
品溶液各10肛L，注入液相色谱仪，测定峰面积积分
值，按外标法计算紫丁香苷的质量浓度。
2．4刺五加总苷测定方法的建立[‘]
2．4．1标准曲线的绘制：精密吸取0．2mg／mL紫
丁香苷对照品溶液0．2、0．4、0．6、0．8、1mL，加水稀
释定容于10mL量瓶中，得系列紫丁香苷对照品溶
液。以水为空白，在265nm波长下测定吸光度。以
质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程为
Y一0．0279X4-0．0457，r=0．9993，结果表明紫丁
香苷在4--20ttg／mL与吸光度具有较好的线性关系。
2．4．2样品测定：取刺五加药液加入等体积的石油
醚萃取3次，弃去石油醚层，取水层加等体积的水饱
和正丁醇萃取3次，取水饱和正丁醇层，减压浓缩至
干，加水稀释适当倍数，以水为空白在265nm波长
下测定吸光度。将吸光度带入回归方程，计算刺五加
总苷的质量浓度。
2．5大孔吸附树脂型号的选择：分别精密称取2g
不同型号的大孔吸附树脂，加无水乙醇充分溶胀，用
蒸馏水洗净，置三角瓶中，加0．2g药材／mL的刺五
加样品溶液25mL，20℃恒温振摇24h，分别取吸
附前后的药液，测定紫丁香苷和刺五加总苷，计算，
即可得不同型号树脂对紫丁香苷和刺五加总苷的比
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1329·
吸附量[比吸附量=(吸附前药液中的质量一吸附后
药液中的质量)／大孔树脂的质量]。吸附后的树脂用
水洗至糖的反应呈现阴性，再加入95％乙醇10
树脂的洗脱率[洗脱率=洗脱液中有效成分的质量
浓度／(吸附前药液中有效成分的质量浓度一吸附后
药液中有效成分的质量浓度)]，结果见表1和2。可
mL，20℃恒温振摇4h，取解吸前后药液，测定醇洗 见以D一101型大孔吸附树脂为优，最后选用近年使
脱液中紫丁香苷和刺五加总苷的量，计算不同型号 用较多的D一101大孔吸附树脂‘5。。
裹1 不同型号大孔吸附树脂对紫丁香苷的吸附和洗脱的影响(万=3)
Table1 Effectofdifferentki dsofmacroporousadsorptionresi sonabsorptionandelutingofspringin(甩=3)
表2不同型号大孔吸附树脂对刺五加总苷的吸附和洗脱的影响(露一3)
Table2 Effectofdifferentki dsofresinsonabsorptionandelutingoftotale eutherosideQ=3)
2．6动态吸附曲线的考察：取已处理D一101型大
孔树脂10g，湿法装入色谱柱(30am×2cm)中，样
品溶液(0．2g药材／mL)以1mL／min的上柱速度
上柱[6]，用试管收集过柱流出液，每lOmL一管，收
集20管，测定其中紫丁香苷和刺五加总苷，结果见
图1。结果表明，从第5管以后，紫丁香苷泄漏量开
始显著增大，说明树脂柱此时不能完全吸附药液中
的紫丁香苷和刺五加总苷。为了紫丁香苷和刺五加
总苷保留完全，设定紫丁香苷未吸附率10％、刺五
加总苷未吸附率20％为泄露点，据此确定50mL作
为最大上样量，相当于最大上样量以紫丁香苷计为
0．76mg／g树脂，以刺五加总苷计为7．84mg／g树
脂，以刺五加药材计1g药材／g树脂。
：、
●
昌
k
￡
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I|缸
k
粕
0．16
0．12
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0．04
0 4 8 121620
管号
罩1．2【
姜n8}
{扭0．4}
器 5
搔
4 8 12 1620
管号
图1紫丁香苷(A)和剌五加总苷(B)在树脂上的泄漏曲线
Fig．1Leakingcurveofspringin(A)andtotal
eleutheroside(B)onresins
2．7洗脱溶媒种类的考察：将最大上样量刺五加药
材提取液通过已处理的树脂柱，水洗至糖的反应为
阴性后，依次以5倍柱体积35％、55％、75％、95％
乙醇分次洗脱，收集各段洗脱液，每柱体积收集1
份，经适当稀释后，测定其中紫丁香苷和刺五加总
苷。以洗脱率为横坐标，以依次收集各段洗脱液的次
序为横坐标作图，结果表明，75％乙醇可将99％以
上的紫丁香苷和刺五加总苷洗脱下来，因此确定以
75％乙醇为洗脱溶媒。
2．8洗脱溶媒用量的考察：以最大上样量刺五加药
材提取液过已预处理的树脂柱，水洗至糖的反应为
阴性后，以10倍柱体积75％乙醇洗脱树脂柱，收集
洗脱液，每柱体积收集1份，经适当稀释后，测定其
中紫丁香苷和刺五加总苷，见表3。结果表明，5倍柱
体积75％乙醇可洗脱吸附的99％以上的紫丁香苷
和刺五加总苷，因此确定以5倍柱体积75％乙醇为
洗脱溶媒。
2．9大孔树脂再生周期的考察：对同一树脂柱进行
10次吸附、洗脱试验，测定树脂对紫丁香苷和刺五
加总苷的重复吸附能力，筛选最佳的大孔吸附树脂
再生周期[7]。以吸附率为纵坐标，吸附洗脱次序为横
坐标，结果见图2。可见树脂在多次使用后吸附分离
效能降低，结合实际生产成本考虑，筛选D一101大
孔吸附树脂的最佳再生周期为5次。然后，进行树脂
的再生操作，使其可以循环使用。
万方数据
·1330· 中年喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9,el
裹3洗脱溶媒用量对紫丁香苷和刺五加总苷洗脱率的影响
Table3 Effectofeluentvolumeonelutingrate
ofspringin
芒100
需90
鞫
龋
l 2 3 4 5 6 7 8 9 10
树脂使用次数
鞫、～
景50打了知了再莉
图2 以紫丁香苷(A)和刺五加总苷(B)为指标D·101
树脂再生周期的考察
Fig．2EvaluationofregenerationperiodofD一101
resintakingabsorptiverateofspringin(A)
andtotale eutheroside(B)勰indexes
2．10验证试验：取刺五加200g粉碎成粗粉，加水
4L煎煮两次，每次3h，合并煎液，滤过，滤液浓缩
成浸膏20g，加水溶解，离心。沉淀再以适量水加热
溶解，离心；合并两次上清液，加水至1000mL，上
D一101型大孔吸附树脂柱，水洗至糖的反应为基本
阴性后，以5倍柱体积75％乙醇洗脱大孔树脂柱，
合并洗脱液回收乙醇，干燥，测定浸膏中紫丁香苷和
刺五加总苷，计算保留率，结果见表4，可见药材中
表4工艺重复试验白=3)
Table4 Resultsofrepetitiveest(厅=3)
有效成分的量与纯化产物的对比，富集比约为3：1。
3讨论
大孔树脂吸附容量考察时，初采用预吸附1h，
过柱重吸附1次，收集洗脱液，计算上样液与流出液
中紫丁香苷或者刺五加总苷之差，确定大孔树脂的
吸附容量，后因与工业生产中动态洗脱相脱离，故采
用动态吸附曲线的考察确定吸附容量。
树脂的再生或被吸附溶质的解吸通常可以用溶
剂来实现。乙醇是常用的再生剂。采用80％左右的
含水醇、酮或含有酸、碱的含水醇、酮进行洗涤，再生
效果也很好，某些低极性的有机杂质吸附过牢不能
洗除时，可采用低极性溶剂进行再生。
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正交试验优选九节龙皂苷I的提取工艺研究
孙立炜1．-，王晓娟1-，孙文基2，顾宜1，宋娟娜2，王 荣1
(1．第四军医大学口腔医院药剂科，陕西西安710032；2．西北大学陕西省生物医药重点实验室，陕西西安710069)
摘 要：目的 筛选九节龙中九节龙皂苷I的最佳提取工艺，并建立HPLC—ELSD法对九节龙皂苷l的测定方法。
方法采用L。(3‘)正交试验，以九节龙皂苷I提取率和干浸膏得率为检测指标。HPLC—ELSD色谱条件：Phe—
nomenexC18(250mm×4．6mm，5肛m)l流动相为甲醇一水(75：25)I体积流量：1．0mL／min；检测器漂移管温度：
73．8℃；载气体积流量：2．0L／rain。结果最佳提取工艺为75％乙醇，第1次8倍量提取4h，第2次6倍量提取
3h。九节龙皂苷I在0．88～4．42pg范围内线性关系良好(r=0．9999)；样品平均回收率为100．37％，RSD为
1．88％(n一6)。结论建立的正交试验优选九节龙的提取方法可行，采用的HPLC—ELSD法测定九节龙皂苷I的方
收稿日期：2007—12-16
作者简介：孙立炜(1983～)，男，北京人，西北大学2005级中药学在读研究生，研究方向为药用植物结构鉴定与提取分离。
E—mail：nodoubtkaraian@126．corn
-通讯作者王晓娟Tel(029)84776189E—mail：WXJYH231@fmmu．edu．cn
万方数据
大孔吸附树脂富集刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的研究
作者： 杨书良， 杨波， 田凤， 孙婷
作者单位： 哈尔滨商业大学药学院,黑龙江哈尔滨,150076
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(9)
被引用次数： 5次

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本文读者也读过(10条)
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中药材2004,27(3)
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