全 文 ：1蒙花苷
1buddleos ide
图 1 对照品( A)、样品( B)和阴性溶液( C)的 HPLC图谱
Fig 1 HPLCChromatograms of reference substance ( A) , sample ( B) , and negative sample solution ( C)
份,制备供试品溶液, 进样测定, 计算蒙花苷的平均
质量分数为 8 1 mg / g, RSD为 0 94%。
2 8 回收率试验: 取样品 (批号 070702)约 0 075
g,共 6份,精密称定, 置具塞锥形瓶中, 每份精密加
入 100 035 g/ mL 蒙花苷对照品溶液 5 mL, 制备
供试品溶液,进样测定,计算得蒙花苷平均回收率为
104% , RSD为 1 4%。
2 9 样品测定:取 4 批样品制备供试品溶液, 每批
2份。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10
L, 注入液相色谱仪, 采用外标法计算蒙花苷的质
量分数,结果见表 1。
3 讨论
本品供试品溶液曾采用加热回流提取和超声提
取两种提取方法进行试验,加热回流提取和超声提
表 1 菊明降压丸中蒙花苷的测定结果
Table 1 Determination of buddleoside in Juming Jiangya Pills
批号 蒙花苷/ ( mg g- 1)
051101 15 4
070601 12 2
070701 12 0
070702 8 1
取的结果基本一致, 因此采用超声提取的方法来制
备供试品溶液。
由于原标准中没有对野菊花进行控制, 所以导
致所测样品的结果差异较大。因此在标准中增加测
定项,更好控制药品质量是非常必要的。
参考文献:
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高效液相色谱法测定灵芝饮片中腺苷
徐 颖,王 斌
收稿日期: 20100509
作者简介:徐 颖( 1964 ) ,女,山东人,副主任中药师,主要从事中药炮制的研究。
T el : ( 0571) 56109873 Email: xuyin g ot@ sina. com
(杭州市红十字会医院 ,浙江 杭州 310003)
摘 要:目的 建立灵芝饮片中腺苷的 H PLC 测定方法,用以控制该饮片的质量。方法 C18色谱柱( 250 mm ! 4 6
mm, 5 m) ;流动相: 乙腈0 04 mol/ L 磷酸二氢钾溶液( 5∀ 95,调节 pH 6 5) ;体积流量 : 1 0 mL / min;柱温: 30 # ;
检测波长: 260 nm。结果 腺苷在 0 634~ 3 170 g 线性关系良好;平均加样回收率为 101 45%。结论 该方法
可用于灵芝饮片的质量控制。
关键词:灵芝饮片; 腺苷;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2003 02
灵芝俗称灵芝草, 属于担子菌纲多孔菌科灵芝
属真菌。该属约有 100 种[ 1] , 常用中药灵芝为赤芝
Ganod erma lucidum ( Leyss ex Fr ) Karst 或紫
芝 G sinense Zhao Xu et Zhang 的干燥子实体。
灵芝作为中药使用始载于∃神农本草经%, 被认为能
益心气、安精魂、补肝益气、坚筋骨, 列为上品。∃本
草纲目%认为灵芝有滋补强壮、延年益寿、利关节、治
耳聋等功效。灵芝化学成分复杂, 具有多种药理作
用[ 25] 。目前认为灵芝中具有生物活性的物质主要
有多糖类、三萜类和核苷类以及生物碱、微量元素
等。灵芝饮片的质量控制标准缺失, 市场上灵芝的
质量参差不齐,因此对灵芝饮片中的活性物质定量
2003中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
分析, 可为灵芝的质量控制提供参考。由于腺苷是
灵芝中重要的活性物质, 因此本实验采用 HPLC 法
测定其中的腺苷,为灵芝饮片的质量控制提供快速、
准确的定量测定方法。
1 仪器与试药
HP1100系列高效液相色谱仪, 包括 1311A 四
元泵, 1313自动进样器, 1316A 柱温箱, 1314紫外可
见检测器, 1315BDAD; A gilent 化学工作站。乙腈
为色谱纯, 甲醇、磷酸二氢钾为分析纯, 重蒸馏水。
腺苷对照品(批号 879200001) 由中国药品生物制
品检定所提供, 尿嘧啶、腺嘌呤均为 Sigma 公司产
品。灵芝饮片样品由浙江中医药大学中药饮片厂提
供,经鉴定均为赤芝 Ganoderma lucid um ( Leyss
ex Fr ) Karst。
2 方法与结果
2 1 色谱条件[ 6] : C18色谱柱( 250 mm ! 4 6 mm,
5 m) ;流动相: 乙腈0 04 mol/ L 磷酸二氢钾溶液
( 5∀ 95,调节 pH 6 5) ; 体积流量: 1 0 mL/ min; 柱
温: 30 # ;检测波长: 260 nm。理论板数按腺苷峰计
算大于 10 000, 腺苷与杂质峰的分离度大于 2 0, 腺
苷对称因子为 0 96~ 1 1。
2 2 溶液的制备
2 2 1 对照品溶液的配制:精密称取用五氧化二磷
为干燥剂减压干燥 24 h的腺苷对照品适量, 加15%
甲醇制成 1 158 5 mg/ mL 对照品储备溶液,将此溶
液稀释 10倍,作为对照品溶液。
2 2 2 阴性试液配制: 取尿嘧啶和腺嘌呤样品适
量,加 15%甲醇制成含 1 2312 mg/ mL 尿嘧啶和
0 986 3 mg / mL 腺嘌呤的溶液, 将此溶液稀释 10
倍,作为阴性溶液。
2 2 3 供试品溶液的制备:取灵芝饮片 150 g,加水
煎煮 2次,每次 3 h,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠
膏, ( 60 & 5 ) # 烘干, 得药粉约 5 g。取 2 g药粉, 研
磨成细粉, 精密称取细粉 0 124 g 于三角瓶, 加入
15%甲醇 25 mL,称定质量,超声处理 30 min, 冷却
后再称定质量, 用 15%甲醇补足超声前质量, 用微
孔滤膜 0 45 m 滤过,取续滤液,即得。
2 3 系统适应性试验: 取腺苷对照品溶液、阴性溶
液和供试品溶液, 在上述色谱条件下进样 20 L。
结果阴性样品在腺苷出峰时间区域没有干扰峰出
现,对腺苷的测定无干扰作用, 可以排除在 260 nm
波长下吸收较强的其他核苷类组分的影响。
2 4 线性关系研究:精密吸取158 5 g/ mL 腺苷对照
品溶液 4、8、10、12、16、20 L,注入液相色谱仪,按上述
条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,进样量为
横坐标作回归方程, 得 Y= 3 247 5 X- 3 720 9, r=
1 000 0。表明腺苷进样量在 0 634~ 3 170 g 呈
良好的线性关系。
2 5 精密度试验: 精密吸取 158 5 g/ mL 腺苷对
照品溶液,重复进样 5次,测定峰面积,结果 RSD为
0 22%。
2 6 稳定性试验:取供试品溶液,按以上色谱条件,
分别在 0、0 5、1、2、4、8、16 h 进样 1次,测定腺苷峰
面积,结果 RSD为 0 62% ,表明供试品溶液在 16 h
内稳定。
2 7 重现性试验: 取同一批样品 (批号 060401) 6
份,分别精密称定,制备供试品溶液, 并测定峰面积,
计算腺苷质量分数, 结果样品中腺苷平均质量分数
为 113 3 g/ g, RSD为 0 59%。
2 8 回收率试验: 采用加样回收法。取样品(批号
060401) 6 份, 每份约 1 8 g, 精密加入腺苷对照品
0 21 mg, 制备供试品溶液, 测定腺苷峰面积, 计算
回收率, 结果平均回收率为 101 91% , RSD 为
1 45%。
2 9 样品测定: 取 10 批灵芝饮片, 制备供试品溶
液,进样测定,结果见表 1。根据 10批测定数据,可
将样品中腺苷量限度暂定为∋本品含腺苷不得少于
50 0 g/ g(。
表 1 灵芝饮片中腺苷的测定结果
Table 1 Determination of adenosine in Ganoderma
批 号 产地 腺苷/
(g g- 1 ) 批号 产 地
腺苷/
(g g- 1)
060201 安徽亳州 66 8 060401 贵州盘县 113 3
060202 安徽亳州 60 1 060402 贵州盘县 120 0
060301 安徽亳州 73 3 060403 贵州盘县 100 0
060302 安徽亳州 73 3 060404 贵州盘县 93 3
060303 吉林通化 12 6 060405 贵州盘县 93 3
3 讨论
腺苷是以核苷和嘌呤为基本构造的活性物质,
灵芝含有多种腺苷衍生物, 都有较强的药理活性,能
降低血液黏度,抑制体内血小板聚集,能提高血红蛋
白、2, 3二磷酸甘油的水平,能提高血液供氧能力和
加快血液微循环, 提高血液对心、脑的供氧能力。腺
苷是一种活性很强的物质,是灵芝的主要有效成分
之一 [ 7]。本实验采用高效液相色谱法测定灵芝饮片
中腺苷,获得了较好的结果。
结合文献报道, 实验对提取溶媒和超声时间做
了对比研究。选取了水、15%甲醇、50%甲醇作为提
(下转第 2098页)
2004 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
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(上接第 2004页)
取溶媒, 结果所得样品中腺苷的质量分数分别为
94 8、111 2、108 9 g / g, 因此实验采用了 15% 甲
醇作为提取溶媒; 超声处理 10、20、30、45、60 m in
时, 所得样品中腺苷的质量分数分别为 95 35、
96 47、111 80、112 3、111 9 g/ g, 经比较 30、45、
60 min 处理后的样品无统计学差异, 因此选择
30 min为超声提取时间。
由于腺苷亲水性较强,在甲醇中溶解度小,在纯
甲醇溶液的色谱图中,无腺苷峰出现,故以水为溶剂
提取, 腺苷的提取量高。由于灵芝中含有大量多糖
成分,在实验中发现其影响腺苷与杂质峰的分离度,
在使用甲醇处理时多糖和其他大分子物质沉淀后,
情况得到改善。
不同产地的灵芝中的腺苷有很大区别, 最大相
差 8 5倍,提示不同产地的灵芝可能在腺苷量上存
在明显差异。目前人工接种灵芝和天然灵芝在饮片
鉴别上有困难,形态和薄层色谱基本一致,可见建立
可行的灵芝中活性物质的质量标准, 进行活性物质
定量测定可以成为鉴别饮片一个重要手段。
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