全 文 ：·1178· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
试品。溶液，进样测定，计算，结果平均回收率为
99．8％，RSD为1．62％。
3．12样品测定：取3个不同批号的结肠炎散I号
粉末25mg，各3份，精密称定，制备供试品溶液，在
上述色谱条件下进样，测定，采用外标法计算，结果
见表1。
裹l 结肠炎散I号中靛玉红的测定结果(n一3)
Table1 IndirudininJ echangyanPowderNo．1(一----3)
4讨论
五倍子的鉴别试验中，如完全按照《中国药典》
2005年版一部五倍子项下方法操作，样品的图谱有
的斑点较浅，因此提取后放置过夜，而且采用5％三
氯化铁试液显色的方法[2]，才能使结肠炎散I号色
谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显
相同的蓝黑色斑点。
青黛为本制剂处方中的君药，但靛蓝稳定性差，
所以选择靛玉红作为测定的指标。因本法是反相色
谱法，且靛玉红易溶解于氯仿、丙酮中，而在甲醇中
溶解稍差，若单选择氯仿作溶剂，峰形会受影响，故
综合靛玉红的提取及色谱分离两个因素，经比较试
验，用甲醇一氯仿(8：2)作溶剂，不仅提取效果较好，
色谱峰形也较好。
供试品提取方法的选择中进行了超声提取、回
流提取两种提取方法比较[3]，结果在不同提取方法
制备样品中靛玉红的质量分数基本不变，但超声提
取杂质峰干扰小，提取时间短，操作简便故采用超
声提取的方法。
参考文献：
[1]中国药典[s]．一部．2005．
[2]张贵君．现代中药材商品通鉴[M]．北京：中国中医出版社，
2001．
[3]罗晓健，张任，何雁．八味锡类教质量标准的研究[J]．中
草药，2006，37(4)：537—539．
高效液相色谱分离纯化九节龙皂苷I
李 斐1’2，王晓娟1．，孙晓莉2，黄永刚3，王荣1，常晓亮4
(1．第四军医大学第三附属医院，陕西西安 710032；2．第四军医大学化学教研室，陕西西安710032；
3．陕西盘龙制药有限公司，陕西西安710032；4．陕西中医学院药学系，陕西咸阳712046)
摘要：目的采用制备色谱系统从九节龙皂苷粗品中分离纯化九节龙皂苷I，建立其纯化工艺。方法九节龙皂
苷粗品采用柱色谱分离，然后采用制备色谱系统，收集对应峰的回收液，即得九节龙皂苷I，并对产品进行了TLC
定性和质量分数定量分析。结果产品经HPLC检测，为九节龙皂苷I，质量分数达99％以上。结论用制备色谱
系统进行九节龙皂苷I的分离和纯化，具有简便、快捷、周期短、自动化程度高、收集全面等优点。
关键词：九节龙；九节龙皂苷I；制备高效液相色谱；分离；纯化
中图分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1178一03
九节龙系紫金牛科紫金牛属植物川I产九节龙
ArdisiapusillaA．DC．的全草，有清热解毒、消肿止
痛的功用，民间用于跌打损伤，活血通络，亦可用于
蛇咬伤。九节龙全草中的九节龙皂苷I有抗肿瘤活
性[1]。药理实验表明九节龙皂苷I有明显增强巨噬
细胞的吞噬活性和增加SREC数目，即有提高免疫
功能的作用。对S，叭ESC、B。。黑色素瘤有不同程度
的抑制作用[2一]。由于九节龙总皂苷中含有性质相近
的五环三萜类成分，相对分子质量相差不大，因此对
于单体的分离具有很大的难度。采用传统的分离纯
化方法，难以获得高质量分数的单体，本研究采用制
备色谱系统，根据目标产物九节龙皂苷I的性质特
点，优化色谱条件进行分离纯化，并采用HPLC法
进行质量分数测定，证实可获得高质量分数的九节
龙皂苷I，比其他的方法更先进、可靠，适用于工业
化生产。
1材料和与仪器
九节龙皂苷粗品由第四军医大学口腔医院药剂
收稿日期：2007—12-29
基金项目：陕西省科技公关项目[2004K18--G3(1)]
作者简介：李斐(1983一)，女，四川达州人，硕士，研究方向为药物化学。TeL：(029)84776189E—mail：lifeil9831226@163．corn
*通讯作者王晓娟Tel：(029)84776189E-mail：wxjyh231@fmmu．edu．an
万方数据
中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1179·
科王晓娟主任提供，九节龙皂苷I对照品由第四军
医大学口腔医院药剂科自制(已经过结构鉴定，质量
分数为99．8％)，薄层色谱硅胶H(青岛海洋化工有
限公司制造)，甲醇(色谱纯)，高纯水，其他试剂均为
分析纯，流动相及样品溶剂均经0．45弘m滤膜滤
过，并用超声波脱气。
硅胶柱为带阀门玻璃柱，近阀门处内置沙板；
DionexHPLC色谱仪，P680HPLC泵，UVD170U
检测器，Chromeleon工作站；聚偏氟乙烯微孔滤膜
(F型)；BTl25D电子分析天平(Sartorius公司)；
LD5—10离心机；DL一720超声波仪器。
2方法与结果
2．1总皂苷粗品的质量评价
2．1．1 性状：本品为黑褐色块状固体，形状大小不
一，光滑而稍有光泽，质硬，易碎，断面不整齐，具光
、泽，不易吸潮，气微，味涩。
2．1．2质量控制：色谱条件：色谱柱为Sinochrom
ODS—BP(200mm×4．6mm，5肛m)；流动相为甲
醇一水(80；20)；体积流量：1-0mL／min，紫外检测
波长：205nm。
，
对照品溶液的制备：九节龙皂苷I对照品1
mg，加甲醇制成含九节龙总皂苷I1mg／mL的溶
液，即得。
供试品溶液的制备：取本品适量，研成粉末，精
密称取1mg，加甲醇溶解，制成1mg／mL的溶液，
即得。
测定法：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各
10弘L注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法和归
一化法计算九节龙皂苷I的质量分数，结果质量分
数均大于38％。
2．2九节龙皂苷I粗品的制备：称取15g九节龙
总皂苷固体，研成粉末，用甲醇完全溶解，倒入50g
硅胶H中，搅拌均匀，于70℃温度下蒸干，研细，备
用。差量法称取硅胶H500g左右装柱，压实；将准
备好的九节龙皂苷I备用品铺于上方，压实；另外称
取50g硅胶于最上层，再次压实。以氯仿一甲醇一水
(65t 35：10)为展开剂，取下层溶液做洗脱剂，洗脱
硅胶柱，得到的洗脱液用TLC跟踪，合并溶剂，旋转
蒸发回收溶剂，得淡黄色九节龙皂苷I粗品粉末
9．05g。称九节龙皂苷I粗品约9g，用流动相溶解
并定容至100mL，超声处理20min，将滤液以3000
r／min离心20min，取上清液，用0．45pm微孔滤膜
滤过，所得的粗品溶液用于分离纯化使用。
2．3 九节龙皂苷I的分离和纯化：色谱条件为色谱
柱(250mm×10．0mm，SinoehromODS—BP为柱
填充料)；流动相：甲醇一水(80：20)；体积流量：1．5
mL／min；检测波长：205Ilm；200弘L定量进样环。手
动进样，手动收集，制备色谱见图1。把样品洗脱下来
并进行收集，经旋转蒸发仪浓缩，蒸干，可得到白色粉
末4．97g，九节龙皂苷I粗品回收率大于55％。
l
^
4、八．I．．1 《 ～认．
0 5 10 15
t／rain
1一九节龙皂苷I
1-ardipusillosideJ
图1九节龙皂苷I的制备HPLC谱图
Fig．1PreparativeHPLCchromatogram
OfardipusiUOsideI
2．4九节龙皂苷I的薄层色谱定性鉴别：精密称取
九节龙皂苷I对照品适量，加甲醇制成1mg／mL的
溶液，作为对照品溶液。精密称取分离后产物适量，
加甲醇制成1mg／mL的溶液，作为供试品溶液。照
《中国药典>>2005年版薄层色谱法试验，吸取上述供
试品溶液和对照品溶液各2弘L，分别点于同一硅胶
H薄层板上，以氯仿一甲醇一水(65t 35：lO)为展开
剂，。展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇显色，在
lOO℃加热至斑点显色清晰，见图2。可以看出在这
个收集峰样品和对照品相应位置上显相同颜色斑
点，说明所收集峰的样品里面含有九节龙皂苷I，初
步判断此收集峰为目标峰。
图2九节龙皂苷I的薄层色谱图
Fig．2TLChromatogramofardipusillosideI
2．5样品的质量分数测定
2．5．1 色谱条件：色谱柱为SinochromODS—BP
(200ram×4．6mm，5pm)；流动相为甲醇一水(80：
万方数据
·1180· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
20)；体积流量：1．0mL／min；紫外检测波长：
205rim；进样量为20pL。
2．5．2待测液的制备：把制备所得样品用流动相定
容于100mL量瓶中，超声处理20min，用0．45弘m
微孔滤膜滤过，即得。
2．5．3测定法：精密吸取待测液20弘L注入高效液
相色谱仪，平行测定5次并取平均值，结果九节龙皂
苷I的保留时间为11．968min，面积归一化定量确
定产品质量分数大于99％，外标法定量确定产品质
量分数为99．3％，色谱图见图3。通过对制备色谱系
统的色谱条件优化，从九节龙皂苷I粗品中可分离
出九节龙皂苷I，其质量分数达到了99％以上。从
色谱图可以看出其分离度较好，无杂质峰的干扰，该
方法适用于分离纯化九节龙皂苷I单体，为工业化
生产提供了依据。
O 5 lO o 5 lo 15 o 5 10
t／min
*一九节龙皂苷I
*一ardipusillosideI
图3九节龙皂苷I对照品(A)、粗品(B)和分离后产品
(C)的HPLC圈
Fig．3HPLCChromatogramsofa dipusIIIoside
referencesubstance(A)，crudeproduct(B)，
andIsolatedproduct(C)
3讨论
本实验所用的技术是依托于制备色谱系统，采
用的是SinochromODS—BP为填充剂，即反向技术。
分离皂苷一般均使用阳离子柱色谱以及重结晶技
术，但是运用柱色谱以及重结晶技术进行分离的时
候，因为九节龙总皂苷中有性质相近的九节龙皂苷
I，较难分离出来，而且柱色谱和重结晶需反复操
作，相当麻烦，且耗时长，不利于工业化生产。而本法
具有简便、快捷、科学、周期短、改良后自动化程度
高、收集全面等优点，而且样品质量分数高，为工业
化的生产奠定了基础。
在实验条件的摸索中发现当增大体积流量时，
九节龙皂苷I的保留时间会提前，但是分离度也随
之降低，而且检测系统的压力也随之增大，而减小体
积流量后虽然分离较好，但峰变宽且保留时间变长；
因此选择了1．5mL／min的体积流量既使保留时间
缩短又能达到良好的分离度。
在流动相选择方面，在考察了多种溶剂以及化
合物本身的性质后，最终选择了甲醇和水的混合体
系作为流动相，然而在选择水一甲醇比例时发现，当
水一甲醇比例大于20t 80时对色谱柱造成的压力相
当大，很容易堵塞柱子，当水一甲醇溶液的比例小于
20z 80时，样品的分离度又不好，因此最终确定
20：80的比例。
参考文献：
FI]王晓娟，张清华．毛茎紫金牛(九节龙)化学成分的研究口]．中
国中药杂志．1990，15(3)：38—39．
[2]陶小军，龙静雯，贺建字，等．九节龙皂苷I的抗肿瘤作用和免
疫调节作用[J]．中国药理学通报，2005，21(9)：1070—1073．
[33张清华，王晓娟，缪振春，等．川产九节龙皂甙的化学研究[J]．
药学学报，1993，28(9)：673—678．
牛膝不同炮制品中多糖的测定
林肖惠1’2，刘 鹏1，徐为人1，汤立迭3
(1．天津药物研究院天津市新药设计与发现重点实验室，天津300193；2．天津大学药物科学与技术学院，天津300072；
3．天津药物研究院天津药代动力学与药效动力学省部共建国家重点实验室，天津300193)
摘要：目的探讨不同炮制方法对牛膝中多糖的影响。方法采用苯酚一硫酸法测定牛膝不同炮制品中多糖，比
较各炮制品中多糖的差异。结果 牛膝酒制品、盐制品、牛膝炭和生品中多糖分别为9．06％、8．20％、4．88％、
6．05％。以酒制品中的多糖最多，牛膝炭中最少。结论不同炮制方法能够影响牛膝中多糖。
关键词：牛膝；炮制品；多糖；苯酚一硫酸法
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2008)08—1180一03
收稿日期：2008一Ol一30
基金项目：天津市应用基础研究计划项目(06YFJZJC02800)
作者简介：林肖惠(1984～)，女，硕士研究生．Tel：13821613202E—mail：8 14143@163．corn
万方数据
高效液相色谱分离纯化九节龙皂苷I
作者： 李斐， 王晓娟， 孙晓莉， 黄永刚， 王荣， 常晓亮
作者单位： 李斐(第四军医大学第三附属医院,陕西西安,710032;第四军医大学化学教研室,陕西西安
,710032)， 王晓娟,王荣(第四军医大学第三附属医院,陕西西安,710032)， 孙晓莉(第四军
医大学化学教研室,陕西西安,710032)， 黄永刚(陕西盘龙制药有限公司,陕西西安,710032)
， 常晓亮(陕西中医学院药学系,陕西咸阳,712046)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(8)

参考文献(3条)
1.王晓娟;张清华 毛茎紫金牛(九节龙)化学成分的研究 1990(03)
2.陶小军;龙静雯;贺建字 九节龙皂苷I的抗肿瘤作用和免疫调节作用[期刊论文]-中国药理学通报 2005(09)
3.张清华;王晓娟;缪振春 川产九节龙皂甙的化学研究 1993(09)

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