全 文 ：三拗汤不同配伍中麻黄碱、甘草酸和苦杏仁苷的变化
杨　 1, 2 ,梁光义1, 3X ,曹佩雪1,贺祝英3
( 1. 贵州省中国科学院 天然产物化学重点实验室,贵州 贵阳　550002; 2. 贵阳医学院,贵州 贵阳　550004;
3. 贵阳中医学院,贵州 贵阳　550002)
摘　要: 目的　比较三拗汤不同配伍和不同煎煮条件下麻黄碱、甘草酸和苦杏仁苷量的变化。方法　采用高效液相
色谱外标法。选用Ag ilent Zorbax SB-C18色谱柱( 250 mm×4. 6 mm , 5 Lm) , 分别以甲醇-0. 1%磷酸( 8∶92)为流动
相, 体积流量为 1 mL / min, 在207 nm 波长测定盐酸麻黄碱; 以乙腈-0. 2%乙酸( 35∶65)为流动相, 体积流量为 1
mL / min,在254 nm 波长测定甘草酸; 选用大连依利特Hypersil-C8色谱柱( 250 mm×4. 6 mm , 5 Lm) , 以甲醇-乙腈
-水( 16∶4∶80)为流动相, 体积流量为0. 6 mL / min,柱温30 ℃,在208 nm 波长测定苦杏仁苷。结果　盐酸麻黄碱
的量合煎液均大于分煎液; 甘草酸的量三药合煎时合煎液大于分煎液, 两药合煎时合煎液小于分煎液; 苦杏仁苷的
量合煎液均小于分煎液。结论　中药复方煎煮过程中存在动态变化, 应根据不同的目的对样品进行适宜的处理。
关键词: 三拗汤;配伍; 麻黄碱;甘草酸; 苦杏仁苷
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253- 2670( 2008) 03- 0372- 04
　　三拗汤是我国传统中医方剂学中记录的临床常
用方,原名还魂汤,出自张仲景《金匮要略》,由麻黄、
杏仁和甘草3 味药组成, 宣肺解表, 主治感冒风邪,
鼻塞声重,语音不出, 咳嗽胸闷 [ 1]。中药复方汤剂在
煎煮过程中, 各药味的成分相互影响, 产生助溶或
沉淀等现象, 使中药复方汤剂中有效成分的提取率
产生变化, 直接影响中药复方汤剂在临床上的疗
效。因此本实验将三拗汤中3味药进行不同组合后,
采用分煎与合煎的方法考察麻黄碱、甘草酸和苦杏
仁苷的变化。
1　仪器、药材与试剂
　　美国惠普HP1100 型高效液相色谱仪, DAD 检
测器, HP1100/ WIND3D 化学工作站, Eyela Fdu—
1100 冷冻干燥机。
　　草麻黄 Ephedra sinica Stapf (产于河北) ,杏仁
Pr unus armeniaca L. (产于贵州) ,甘草Glycy rrhiz a
ur alensis Fisch. (产于内蒙古)药材饮片经贵阳中医
学院何顺志教授鉴定。
　　盐酸麻黄碱 (批号171241-200303)、甘草酸单铵
盐 (批号0731-9704)和苦杏仁苷(批号820-200002)
对照品由中国药品生物制品检定所提供;甲醇、乙腈
为色谱纯,水为重蒸水,磷酸、乙酸为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 盐酸麻黄碱[ 2～4] :色谱柱为Agilent
Zorbax SB-C18柱 ( 250 mm×4. 6 mm, 5 Lm) ; 流动
相:甲醇-0. 1%磷酸( 8∶92) ;体积流量: 1 mL/ min;
柱温: 25 ℃; 检测波长: 207 nm。甘草酸 [ 5, 6] : 色谱柱
为 A gilent Zorbax SB-C1 8柱 ( 250 mm×4. 6 mm ,
5 Lm) ; 流动相: 乙腈-0. 2%乙酸( 35∶65) ; 体积流
量: 1 mL/ min;柱温: 25℃;检测波长: 254 nm。苦杏
仁苷[ 7] : 色谱柱为 Hypersil-C8 色谱柱 ( 250 mm×
4. 6 mm , 5 Lm) (大连依利特科学仪器有限公司) ,
流动相: 甲醇-乙腈-水 ( 16∶4∶80) ; 体积流量:
0. 6 mL/ min;柱温: 30 ℃; 检测波长: 208 nm。溶液
的色谱图见图1～3。
2. 2　药材样品供试品溶液的制备
2. 2. 1　合煎液供试品溶液的制备(传统煎煮法) : 称
取药材饮片麻黄9. 0 g、杏仁9. 0 g、甘草3. 0 g ,加8
倍量的水浸泡1 h,煎煮保持微沸1 h,倒出煎液; 药
渣再加6倍量的水煎煮 1 h, 合并两次煎液, 冷冻干
燥成干粉。分别精密称取0. 2 g 干粉3份, 置25 mL
量瓶中,按照以下方法制备样品供试品溶液。
　　加甲醇适量,超声提取45 min,超声后加一滴磷
酸,并加甲醇至刻度,摇匀, 4 000 r/ m in 离心5 min,
过0. 45 Lm 滤膜, 滤液即为合煎液测定盐酸麻黄碱
样品供试品溶液。
　　加甲醇适量,超声提取 30 min,超声后加甲醇
至刻度 , 摇匀 , 4 000r / min离心5min , 过0. 45Lm
·372· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
X 收稿日期: 2007-05-20基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30460154)作者简介:杨　 ( 1976—) ,男,四川人,讲师,硕士,主要从事中药及复方化学成分研究及新药研制。
E-mail: chon gyang 72000@ yahoo. com. cn
* 通讯作者　梁光义　T el : ( 0851) 5652109　E-mail: guangyi liang@ 21cn . com
t/ min
1-盐酸麻黄碱
1-ephedr ine hydrochloride
图 1　盐酸麻黄碱对照品( A)、合煎液样品(B)、合煎液阴性对照液( C)、分煎液样品(D)
和分煎液阴性对照液( E)的HPLC 图谱
Fig. 1　HPLCChromatograms of ephedrine hydrochloride reference substance (A) , mixed decoction (B) ,
blank of mixed decoction (C) , separated decoction (D) , and blank of separated decoction (E)
t/ min
* -甘草酸
* -glycyrrhiz ic acid
图2　甘草酸单铵盐对照品(A)、合煎液样品(B)、合煎液阴性对照液(C)、分煎液样品(D)
和分煎液阴性对照液(E)的HPLC图谱
Fig. 2　HPLC Chromatograms of glycyrrhizic acid reference substance (A) , mixed decoction (B) , blank
of mixed decoction (C) , separated decoction ( D) , and blank of separated decoction ( E)
t/ min
1-苦杏仁苷
1-amygdaioside
图3　苦杏仁苷对照品(A)、合煎液样品(B)、合煎液阴性对照液(C)、分煎液样品(D)
和分煎液阴性对照液(E)的HPLC图谱
Fig. 3　HPLC Chromatograms of amygdaioside ref erence substance (A) , mixed decoction ( B) , blank
of mixed decoction (C) , separated decoction (D) , and blank of separated decoction (E)
滤膜,滤液即为合煎液测定甘草酸样品供试品溶液。
　　加甲醇适量, 超声提取 30 min 后加甲醇至刻
度, 摇匀,取 1 mL 置10 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,
摇匀, 4 000 r/ m in 离心5 min, 过0. 45 Lm 滤膜,滤
液即为合煎液测定苦杏仁苷样品供试品溶液。
2. 2. 2　分煎液供试品溶液的制备(煎煮方法由贵州
宏宇药业有限公司提供) : 分别称取药材饮片麻黄
9. 0 g、杏仁 9. 0 g、甘草 3. 0 g ,杏仁和甘草分别加8
倍量的水浸泡 1 h, 煎煮保持微沸 1 h, 倒出煎液;药
渣再加6倍量的水煎煮 1 h, 合并两次煎液, 制备各
药材的煎液, 冷冻干燥成干粉;麻黄加 10倍量的水
浸泡1 h,煎煮保持微沸40 min,倒出煎液,药渣再加
6 倍量的水煎煮40 m in, 合并两次煎液,冷冻干燥成
干粉。将各药材干粉混合均匀, 精密称取0. 2 g ,制备
分煎液样品供试品溶液。其他配伍情况的煎液制备
也按此法。
2. 2. 3　阴性对照液的制备:再按上法制备分别不含
麻黄、甘草、杏仁的合煎液、分煎液的阴性对照溶液。
·373·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
2. 3　对照品溶液的制备: 精密称取盐酸麻黄碱对照
品适量, 用甲醇溶解, 制成1 546 Lg/ mL 的溶液,备
用。精密称取甘草酸对照品适量,用甲醇溶解, 制成
124 Lg/ mL 的溶液,备用。精密称取苦杏仁苷对照品
适量, 用甲醇溶解,制成216 Lg/ mL 的溶液,备用。
2. 4　标准曲线的绘制:精密吸取盐酸麻黄碱、甘草
酸、苦杏仁苷对照品溶液适量,分别置于10 mL 量瓶
中, 加入甲醇至刻度, 使麻黄碱质量浓度分别为
38. 65、77. 30 、154. 60、309. 20 、463. 80 mg/ L , 甘草
酸质量浓度分别为 49. 59、123. 97、198. 35、272. 73、
347. 12 mg / L , 苦杏仁苷质量浓度分别为 21. 60 、
43. 20、64. 80 、86. 40、108. 00 mg/ L。精密吸取相
应量进样,测定峰面积。以峰面积积分值( Y )对进样
量( X )进行线性回归,结果见表1。
2. 5　精密度试验:分别精密吸取麻黄碱对照品溶液
2 LL、甘草酸对照品溶液5 LL、苦杏仁苷对照品溶液
5 LL, 连续进样 5 次, 测定相应峰面积, 计算得其
RSD分别为1. 38%、1. 10%、1. 10 %。
表1　盐酸麻黄碱、甘草酸、苦杏仁苷的标准曲线
Table 1　Standard curve of ephedrine hydrochloride, glycyrrhizic acid, and amygdaioside
对照品 进样体积/ LL 回归方程 r 线性范围/ Lg
盐酸麻黄碱 2 　Y = 2 304. 2 X + 7. 4 0. 999 92 0. 077 3～0. 927 6
甘草酸　　 5 　Y = 618. 4 X + 5. 6 0. 999 81 0. 247 9～1. 735 6
苦杏仁苷　 5 　Y = 1 849. 4 X + 9. 2 0. 999 50 0. 108 0～0. 540 0
2. 6　稳定性试验:取供试品溶液分别于 0、2、4、6、8
h 测定峰面积值, 计算RSD, 结果见表2,表明各种供
试品溶液在8 h 内稳定。
表 2　稳定性试验的结果
Table 2　Results of stability test
麻黄 甘草 杏仁
盐酸麻黄碱
RSD/ %
合煎 分煎
甘草酸
RSD/ %
合煎 分煎
苦杏仁苷
RSD/ %
合煎 分煎
+ + + 1. 39 1. 10 1. 10 0. 51 2. 08 2. 77
+ + - 2. 51 1. 27 0. 23 0. 41 - -
+ - + 1. 33 1. 50 - - 0. 67 1. 78
- + + - - 0. 20 2. 92 2. 26 2. 17
+ - - 2. 69 2. 69 - - - -
- + - - - 0. 67 0. 67 - -
- - + - - - - 0. 20 0. 20
　　“+ ”表示组成中有该项,“- ”表示组成中无该项,表 3同
　　“+ ”exit ing it in composed materials , “- ”l acking i t in com-
posed materials , T able 3 is same
2. 7　回收率试验:精密称取三拗汤样品约 0. 100 0
g ,分为3组,每组各9份, 第 1组(含盐酸麻黄碱约
1. 818 mg ) 分别加入盐酸麻黄碱对照品 2. 286、
1. 946、1. 648 mg ,第2组(含甘草酸约1. 731 mg)分
别加入甘草酸对照品 2. 106、1. 658、1. 306 mg ,第 3
组(含苦杏仁苷约6. 411 mg )分别加入苦杏仁苷对
照品 6. 717、5. 474、4. 659 mg, 制备供试品溶液, 进
样测定各成分峰面积, 计算回收率,结果盐酸麻黄
碱、甘草酸和苦杏仁苷的平均回收率分别为100. 1%
( RSD为0. 4%)、99. 9% ( RSD为 0. 7% )和100. 0%
( RSD为1. 4%)。
2. 8　样品测定:取药材不同配伍, 制备供试品溶液,
进样测定,计算,结果见表3。
表3　不同配伍煎液中麻黄碱、甘草酸和苦杏仁苷的测定结果( n= 5)
Table 3　Determination of ephedrine hydrochloride, glycyrrhizic acid, and amygdaioside in dif ferent decoctions ( n= 5)
麻黄 甘草 杏仁
盐酸麻黄碱
合煎/
(m g·g- 1)
分煎/
( mg·g- 1)
合煎比分煎
增加比例/ %
甘草酸
合煎/
( mg·g - 1)
分煎/
( mg·g- 1)
合煎比分煎
增加比例/ %
苦杏仁苷
合煎/
( mg·g- 1)
分煎/
( m g·g- 1)
合煎比分煎
增加比例/ %
+ + + 2. 75 2. 53 8. 70 2. 59 2. 27 14. 10 9. 65 10. 37 - 7. 46
+ + - 2. 66 2. 57 3. 50 1. 94 2. 14 - 10. 31 - 　 - 　 - 　
+ - + 2. 62 2. 35 11. 49 - - - 9. 25 9. 63 - 4. 11
- + + - - - 　 2. 73 2. 94 - 7. 69 12. 51 14. 17 - 13. 27
+ - - - 1. 58 - - - 　 - - - 　
- + - - - - 　 - 3. 44 - 　 - 　 - 　 - 　
- - + - - - 　 - - - 　 - 10. 96 - 　
　　可以看出三拗汤不同配伍煎液中, 无论合煎分
煎,以及药材的不同配伍,盐酸麻黄碱的量合煎液均
大于分煎液; 甘草酸的量3药合煎时,合煎液大于分
煎液, 但两药合煎时,合煎液小于分煎液; 无论合煎
分煎,以及药材的不同配伍,苦杏仁苷的量合煎液均
小于分煎液。
　　盐酸麻黄碱的量在麻黄、杏仁两药合煎时差异
最大,麻黄、甘草两药合煎时差异最小; 甘草酸的量3
药合煎时差异最大, 甘草、杏仁两药合煎时差异最
小; 苦杏仁苷的量甘草、杏仁两药合煎时差异最大,
·374· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
麻黄、杏仁两药合煎差异最小。
　　3药合煎时甘草酸的量变化最大, 苦杏仁苷的
量变化最小; 麻黄、甘草两药合煎时麻黄碱的量比甘
草酸的量变化小; 麻黄、杏仁两药合煎时麻黄碱的量
比苦杏仁苷的量变化大;甘草、杏仁两药合煎时甘草
酸的量比苦杏仁苷的量变化小。
3　讨论
　　三拗汤不同配伍煎液中, 盐酸麻黄碱的量合煎
液均大于分煎液, 说明 3味药材在煎煮过程中各药
材可能共同发生反应或两两之间发生化学反应,都
能促进麻黄碱盐的生成。盐酸麻黄碱的量麻黄、杏仁
两药合煎差异最大,麻黄、甘草两药合煎差异最小,
反应均能促进麻黄碱的生成。生物碱与甘草皂苷配
伍能产生沉淀[ 9] ,有可能麻黄中的麻黄碱与甘草中
的甘草酸发生部分沉淀反应, 导致麻黄碱的量略有
降低。
　　三拗汤不同配伍煎液中,甘草酸的量3药合煎
时,合煎液大于分煎液,两药合煎时合煎液小于分煎
液,说明3味药材在煎煮过程中各药材共同发生反
应,其反应结果能增加甘草酸在汤剂中的量,但两两
之间发生化学反应, 其反应结果却能降低甘草酸在
汤剂中的量。麻黄、甘草两药合煎与杏仁、甘草两药
合煎甘草酸的量降低较多, 进一步说明了麻黄中的
麻黄碱与甘草中的甘草酸可能发生部分沉淀反应导
致甘草酸的量降低更多。
　　三拗汤不同配伍煎液中, 苦杏仁苷的量合煎液
均小于分煎液,说明3 味药材在煎煮过程中各药材
共同发生反应、两两之间发生化学反应,苦杏仁苷水
解,其反应结果都能降低苦杏仁苷在汤剂中的量。苦
杏仁苷的量甘草、杏仁两药合煎差异最大, 麻黄、杏
仁两药合煎差异最小,说明在煎煮过程中甘草中甘
草酸的酸性可能促进杏仁中苦杏仁苷的水解。
参考文献:
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测定半夏露糖浆中麻黄碱、伪麻黄碱成分 [ J] . 药物分析杂
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毛细管电泳法测定半枝莲药材及灯盏花素片中野黄芩苷
王峻梅1, 2 ,王建伟3, 4 ,李全文2,陈缵光2X ,蔡沛祥4,莫金垣4
( 1. 暨南大学 分子生物研究中心 , 广东 广州　510632; 2. 中山大学药学院, 广东 广州　510080; 3. 佛山市质量
计量监督检测中心, 广东 佛山　528000; 4. 中山大学化学与化工学院, 广东 广州　510275 )
摘　要: 目的　建立半枝莲药材及其制剂灯盏花素片中黄酮类化合物野黄芩苷测定的毛细管电泳高频电导法。方
法　探讨了缓冲液的种类、浓度、添加剂、分离电压和进样量对分离和检测的影响, 以石英毛细管为分离柱,
1. 0 mmo l/ L HAc-15. 0 m mol/ L 三乙醇胺( pH 8. 6)缓冲液为电泳介质, 分离电压20. 0 kV ,用非接触式高频电导法
检测。结果　野黄芩苷的峰形良好, 出峰较快, 线性范围为 0. 001～10. 0 Lg/ mL ,检出限为 0. 5 Lg/ mL , 回收率达
99. 4%以上。结论　为药材及制剂中野黄芩苷的测定提供了一种快速和简便的新方法。
关键词: 半枝莲;灯盏花素片; 野黄芩苷;毛细管电泳高频电导法
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253- 2670( 2008) 03- 0375- 04
　　半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutel laria barbata
D. Don 的干燥全草, 别名通经草、紫连草、并头草、
牙刷草、小韩信草等,具有清热解毒、化瘀利尿的功
效,用于治疗疔疮肿毒、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌扑肿
痛、水肿、黄疸等 [ 1]。半枝莲中主要的有效成分是黄
酮类化合物,含野黄芩苷(灯盏花乙素)最多, 具有抗
·375·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
X 收稿日期: 2007-06-23基金项目:广东省自然科学基金重点项目( 021808 ) ;广东省教育厅科学基金资助项目( Z03055)作者简介:王峻梅( 1978—) ,女,江苏宜兴人,研究实习员,硕士,主要从事毛细管电泳、药物分析和功能基因组单核苷酸多态性研究。
T el: ( 020) 85560925-808　E-mail: m eiger@ 163. com
* 通讯作者　陈缵光　Tel: ( 020) 88364586　Fax: ( 020) 87330558　E-m ail : chen zg@ gzsums. edu. cn