全 文 ：图 3　洗脱曲线
Fig.3　Elution curve
用乙腈-水(37∶63)溶解 , 1.00 mL 定容 ,得产品供
试液 ,进样 20.0μL 进行分析 ,该产品所含目标物的
保留时间(10.791 min)与朱砂根皂苷对照品的保留
时间(10.795 min)一致 ,外标法测得其质量分数为
95.4%(n=6)。采用乙腈-水(37∶63)、(35∶65 、
(32∶68)洗脱系统 ,分别进样 20.0μL 产品供试液 ,
HPLC面积归一法测得质量分数为 96.4%(n=6),
见图 4。
图 4　朱砂根皂苷的色谱图
Fig.4　Chromatogram of ardicrenin
3　讨论
　　制备色谱流动相的选择:以反相高效液相色谱法
测定朱砂根提取液中朱砂根皂苷的色谱图为依据进
行分析 ,朱砂根皂苷的色谱峰独立 ,目标峰前后物质
相距较远 ,为用反相柱制备朱砂根皂苷提供了很好的
条件。制备色谱流动相选择了甲醇-水体系 。在该体
系中 ,调整甲醇的比例 ,可以控制目标物的保留时间 ,
甲醇的比例越小 ,目标物的保留时间越长。考虑到乙
腈有较大毒性 ,制备色谱未使用乙腈作流动相 。
　　制备色谱的条件建立和洗脱液的检测:通过预
试验得知 , 在甲醇-水体系中 , 甲醇比例在 50%以
内 ,目标物保留时间较长 ,甲醇比例在 70%以上 ,目
标物保留时间较短 。根据这一性质 ,确定两个阶段
的梯度洗脱程序 , 70%甲醇洗脱之前阶段 ,主要分离
极性杂质 ,使目标物保留;70%甲醇洗脱之后阶段阶
段 ,主要分离极性与目标物接近的成分 ,从洗脱曲线
得知 ,在该阶段 2 ～ 4 min收集的馏分 ,经 HPLC 检
测 ,为高质量分数的目标物馏分 。
　　由于朱砂根皂苷的吸光系数较小 ,最大吸收波
长为 205 nm ,甲醇的截止波长为 210 nm ,这就使得
紫外检测难以在线进行 ,因此 ,采用柱后分段收集 ,
HPLC 检测 。
　　利用反相制备色谱对朱砂根皂苷进行了制备分
离 。通过一次分离 ,可得朱砂根皂苷单体 。整个过
程 ,用时短 ,效率高 ,分离效果好 ,可连续进样制备。
本文提供的朱砂根皂苷制备方法 ,作为提供朱砂根
皂苷对照品有较好的参考价值。
参考文献:
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全鹿丸的质量标准研究
郑　成1 , 2 ,姚彤炜1 ,向智敏2＊
(1.浙江大学药学院 ,浙江 杭州　310080;2.浙江省药品检验所 , 浙江 杭州　310004)
摘　要:目的　制定全鹿丸的质量标准。方法　采用薄层色谱法对方中的甘草 、五味子 、陈皮进行定性鉴别;采用反
相高效液相色谱法测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素。结果　薄层色谱鉴别特征明显 、专属性强;补骨脂素和
·900· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
＊ 收稿日期:2008-11-25　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　作者简介:郑　成(1978—),男 ,浙江温州人 ,主管中药师 , 2001年毕业于沈阳药科大学中药学专业 ,现为浙江大学硕士研究生 ,主要从事中药的质量标准研究工作。 Tel:(0571)86459425　E-m ail:joef f20@yahoo.com.cn
异补骨脂素分别在 9.75 ～ 195.00 ng 、9.17～ 183.40 ng与峰面积有良好线性关系 , 平均回收率 102.6%、101.5%。
结论　建立了全鹿丸的质量标准 ,定性和定量方法可靠 、实用。
关键词:全鹿丸;甘草;五味子;陈皮;补骨脂素;异补骨脂素;薄层色谱;高效液相色谱
中图分类号:R286.02　　　文献标识码:B　　　文章编号:0253-2670(2009)06-0900-04
　　全鹿丸原标准收载于《中华人民共和国卫生部
药品标准》中药成方制剂第 1册 ,由全鹿干 、甘草 、五
味子 、补骨脂等 32味中药制成 ,具有补肾填神 ,益气
培元的功效。原标准无鉴别项和测定项 。按国家药
品标准提高行动计划中成药品种增修订项目任务的
要求 ,本实验对该标准进行提高 ,增加甘草 、五味子 、
陈皮的薄层色谱鉴别 ,同时还采用了反相高效液相
色谱法测定样品中补骨脂素和异补骨脂素。
1　仪器与试药
　　Agilent 1200型液相色谱仪 , T U —1901普析通
用紫外分光光度仪;Mett ler 240 型电子分析天平 。
　　甘草(批号 120904-200511)、五味子(批号
120922-200505)、陈皮(批号 120969-200507)对照药
材 ,补骨脂素(批号 110739-200511)、异补骨脂素
(批号 110738-200511)对照品均由中国药品生物制
品检定所提供。薄层色谱用硅胶 G板(青岛海洋化
工厂),中性氧化铝(200 ～ 300目 ,国药集团化学试
剂有限公司)。全鹿丸(杭州胡庆余堂药业公司提
供 ,水蜜丸)批号为 050802 、051103 、060401。乙腈
为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其他试剂均为分析纯 。
2　薄层色谱鉴别
2.1　甘草的薄层色谱鉴别:取本品 15 g ,研细 ,加甲
醇 50 mL ,超声处理 30 min ,滤过 ,滤液加于中性氧
化铝柱(200 ～ 300目 ,2 g ,内径 1 cm)上 ,收集洗脱
液 ,再以甲醇 10 mL 洗脱 ,合并两次洗脱液 ,蒸干 ,
残渣加水 30 mL 溶解 ,加醋酸乙酯振摇提取 3次 ,
每次 30 mL ,合并醋酸乙酯提取液 ,蒸干 ,残渣加甲
醇1 mL溶解 ,作为供试品溶液 。另取甘草对照药材
0.5 g ,加甲醇 20 mL ,同法制成对照药材溶液 。吸
取上述 3种溶液各 1 μL ,分别点于同一用 1%氢氧
化钠溶液制备的硅胶 G 薄层板上 ,以醋酸乙酯-甲
酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂 ,展开 ,取出 ,
晾干 ,喷以 10%硫酸乙醇溶液 ,于 105 ℃加热至斑
点显色清晰 ,置紫外光灯(UV 365 nm)下检视 ,结果
见图 1。可见供试品色谱中 ,在与对照药材色谱相
应的位置上 ,显相同颜色的荧光斑点。
2.2　五味子的薄层色谱鉴别:取本品10 g ,研细 ,加
醋酸乙酯 50 mL ,回流处理 40 min ,滤过 ,滤液挥至
近干 ,加中性氧化铝柱(200 ～ 300目)1.5g ,充分搅
图 1　全鹿丸中甘草的薄层色谱图
Fig.1　TLC Chromatogram of Radix Glycyrrhizae
in Quanlu Pills
拌 ,挥干 ,加于中性氧化铝柱(200 ～ 300 目 , 15 g ,内
径 1.5 cm)上 ,以石油醚(30 ～ 60 ℃)50 mL 洗脱 ,弃
去洗液 ,再用三氯甲烷 30 mL 洗脱 ,收集洗脱液 ,蒸
干 ,残渣加三氯甲烷 1 mL 溶解 ,作为供试品溶液。
另取五味子对照药材 1 g ,加醋酸乙酯 30 mL ,同法
制成对照药材溶液 。另取五味子乙素对照品 ,加三
氯甲烷制成 1 mg/mL 的溶液 ,作为对照品溶液 。吸
取上述 3种溶液各 5μL ,分别点于同一硅胶G 薄层
板上 ,以石油醚(30 ～ 60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶
5∶1)上层溶液为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外
光灯(UV 254 nm)下检视 ,结果见图 2 。可见供试
品色谱中 ,在与对照药材和对照品色谱相应的位置
上 ,显相同颜色的荧光斑点 。
2.3　陈皮的薄层色谱鉴别:取本品 3 g ,研细 ,加乙
醚 30 mL ,加热回流30 min ,滤过 ,取滤渣及残渣 ,挥
去乙醚 ,加丙酮 30 mL ,加热回流 30 min ,放冷 ,滤
过 ,滤液蒸干 ,残渣加甲醇 1 mL 使溶解 ,作为供试
品溶液 。另取陈皮对照药材 1 g ,同法制成对照药材
溶液。吸取上述两种溶液各 2 μL ,分别点于同一硅
胶 G 薄层板上 , 以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水
(155∶405∶225∶10)10 ℃以下下层溶液为展开
剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光灯(UV 254 nm)下检
视 ,结果见图3 。可见供试品色谱中 ,在与对照品色
·901·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3　补骨脂素和异补骨脂素的测定
谱相应的位置上 ,显相同颜色的荧光斑点。
3.1　色谱条件:Dikma C18(250 mm ×4.6 mm , 5
μm);流动相:乙腈-水(30∶70);体积流量:1.0 mL/
min;检测波长:246 nm;柱温:30 ℃;进样量 10 μL。
3.2　对照品溶液的制备:精密称取补骨脂素和异补
骨脂素对照品各10 mg ,置50 mL 量瓶中 ,加乙醇至
刻度 ,作为对照品储备溶液 。取对照品储备溶液适
量 ,加甲醇稀释制成 2 μg/mL 的对照品溶液。
3.3　供试品溶液的制备:取本品 ,研细 ,取约 0.1 g ,
精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25 mL ,
密塞 ,称定质量 , 超声处理(功率 250 W , 频率 50
kHz)30 min ,放冷 ,再称定质量 ,用甲醇补足减失的
质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,作为供试品溶液。
3.4　阴性样品溶液的制备:取缺补骨脂阴性样品 ,
按供试品溶液的制备方法 ,制成阴性样品溶液。
3.5　专属性试验:精密吸取对照品溶液 、供试品溶
液和阴性样品溶液 ,注入液相色谱仪 ,结果见图 4。
补骨脂素的出峰时间为 20 m in ,异补骨脂素的出峰
时间为 22.1 min ,理论板数分别为 9 200 、9 400 ,阴
性样品对主峰无干扰。
图 4　阴性样品(A)、对照品(B)和全鹿丸(C)的
HPLC色图谱
Fig.4　HPLC Chromatograms of negative sample(A),
reference substances(B), and Quanlu Pills(C)
3.6　标准曲线的制备:精密吸取补骨脂素 、异补骨
脂素对照品储备液(质量浓度分别为 9.75 、9.17
μg/mL)适量 ,分别稀释 0 、1 、2 、5 、10 、20倍 ,进样 20
μL ,测定峰面积。以进样质量对峰面积进行线性回
归 ,得回归方程Y =7.533 3 X+2.521 2 , r =0.999 9
(补骨脂素);Y =7.438 82 X +1.816 2 , r =0.999 99
(异补骨脂素)。补骨脂素和异补骨脂素分别在
9.75 ～ 195.0 ng 、9.17 ～ 183.4 ng 与峰面积呈良好
的线性关系 。
3.7　重现性试验:取同一样品(批号 051103)6份 ,
制备供试品溶液 ,进样测定 ,测定补骨脂素和异补骨
脂素平均质量分数分别为 0.10 、0.11 mg/g , RSD
为 1.5%、1.4%。
3.8　精密度试验:精密吸取供试品溶液 10 μL ,重
复进样 6次 ,测定补骨脂素和异补骨脂素峰面积 ,计
算峰面积 RSD分别为 1.1%、1.6%。
3.9　稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液(批号
051103)10 μL ,分别在制备后的 0 、1 、2 、6 、10 、15 、24
h进样测定补骨脂素和异补骨脂素峰面积 , 结果
RSD分别为 1.4%、1.4%。
3.10　加样回收率试验:精密称取同一样品(批号
051103)6份 ,每份 0.05 g ,精密加入一定量的补骨脂
素和异补骨脂素对照品 ,制备供试品溶液 ,进行测定 ,
计算回收率 ,结果补骨脂素 、异补骨脂素平均回收率
分别为 102.6%、101.5%, RSD分别为 0.8%、1.7%。
3.11　样品测定:取 3 批样品 ,分别制备供试品溶
·902· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
液 ,进行测定 ,结果见表 1。根据测定结果 ,暂定本
品含补骨脂以补骨脂素和异补骨脂素的总量计 ,不
得少于 0.15mg/g 。
表 1　全鹿丸中补骨脂素和异补骨脂素的测定结果
Table 1　Determination of psoralen and isopsoralen
批　号 补骨脂素/(mg· g -1)
异补骨脂素/
(mg· g -1)
总量/
(m g·g -1)
050802 0.105 0.105 0.21
051103 0.102 0.105 0.21
060401 0.107 0.110 0.22
4　讨论
　　测定波长的选择:取补骨脂素 、异补骨脂素对照
品溶液(质量浓度分别为 9.75 μg/mL 、9.17 μg/
mL),在 200 ～ 400 nm 波长扫描 ,结果均在 246 nm
处有最大吸收 ,与现行版药典收载的补骨脂药材补
骨脂素 、异补骨脂素测定项的测定波长一致 ,故确定
全鹿丸的测定波长为 246 nm 。
　　流动相的选择:曾采用乙腈-水(30∶70)、乙腈-
水(32∶68)、甲醇-水(55∶45)、甲醇-水(50∶50)为
流动相进行比较 ,结果乙腈-水系统分离效果较好 ,
两者中以乙腈-水(30∶70)为流动相是补骨脂素 、异
补骨脂素出峰时间较为合适 。
　　不同色谱柱考察:取同一供试品(批号 051103)
溶液 ,分别比较了 Ag ilent XDB C18 、Agi lent Zo rbax
SB C18 、Sunf ire C18 3种色谱柱对补骨脂素 、异补骨
脂素测定的影响 ,结果表明 ,不同厂家色谱柱对测定
结果影响不大(RSD为 2.0%)。
硫磺熏蒸对山药中尿囊素的影响
赵海霞1 , 2 ,刘　伟1＊
(1.康美药业股份有限公司博士后工作站 , 广东 普宁　515341;2.山东中医药大学附属医院 , 山东 济南　250011)
摘　要:目的　探讨硫磺熏蒸对山药中尿囊素的影响。方法　以尿囊素为指标 , 选择硫磺用量 、熏蒸时间 、熏蒸次
数 3 个因素 ,用 L9(34)正交试验表 , 考察不同熏蒸工艺尿囊素的量并与未熏蒸山药进行比较。结果　硫磺用量为
100 g/ m3 ,熏蒸 1 次 , 熏蒸 2 h , 尿囊素的量最高。结论　不同熏蒸工艺对山药中尿囊素有一定影响 , 且有随硫磺用
量增加 、熏蒸时间延长 、次数增加而减少的趋势。
关键词:山药;硫磺熏蒸;尿囊素;高效液相色谱
中图分类号:R286.02　　　文献标识码:B　　　文章编号:0253-2670(2009)06-0903-02
　　山药为薯蓣科多年生宿根蔓草植物薯蓣 D i-
oscor ea op pos ita Thunb.的干燥根茎 ,具有补脾养
胃 、生津益肺 、补肾涩精的功效 ,临床常用于脾虚食
少 、久泻不止 、肺虚喘咳 、肾虚遣精 、带下尿频 、虚热
消渴等症 。山药含有多种化学成分 ,尿囊素是山药
的活性成分之一。尿囊素具有修复上皮组织 ,促进
皮肤溃疡和伤口愈合 ,具有生肌作用 ,可用于胃及十
二指肠溃疡等[ 1] 。山药在加工处理过程中 ,须经硫
磺熏蒸以利于贮存保质 。但硫磺具一定毒性 ,且中
药熏硫会破坏或改变方剂的功效 ,并破坏其化学成
分。为保证临床用药的质量 ,本实验以尿囊素为指
标 ,就硫磺熏蒸山药的影响因素进行了探讨。
1　仪器与试药
　　Agilent 1100高效液相色谱仪 , Agilent二元泵
DAD检测器。
　　尿囊素对照品购自中国药品生物制品检定所 ,
批号 1501-200001;甲醇为色谱纯 , 水为自制重蒸
水 ,硫磺为药用硫磺;山药购自普宁药材市场 ,经国
家中药现代化工程技术中心曹晖教授鉴定为薯蓣科
植物薯蓣D.opposi ta Thunb.的干燥根茎。
2　方法与结果
2.1　硫磺熏制的山药样品的制备:采用不锈钢材料
自制熏箱 ,熏箱内容积为 0.5 m3 ,内设 2层网状隔
板 ,熏箱顶部安装一小型排风扇 ,底部留一观察窗。
实验时 ,将 500 g 山药饮片均匀摆放于网状隔板上 ,
称取规定量药用硫磺置于搪瓷盘中 ,并放入熏箱底
部 ,点燃硫磺 ,关闭熏箱门及排风扇 ,待硫磺形成明
显蓝色火焰时 ,用胶带将熏箱门封闭 。熏至规定时
间后 ,打开排风扇抽气 1 h ,开启熏箱门。
2.2　尿囊素的测定方法的建立[ 2]
·903·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
＊ 收稿日期:2008-11-24　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　作者简介:赵海霞(1965—),女 ,山东威海人 ,副主任药师 ,博士 ,研究方向:中药新药开发及中药炮制原理的研究。
Tel:13793188011　E-mail:zh aohx1115@126.com