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马钱子碱聚乳酸纳米粒在家兔体内的药动学研究
赵继会1 ,刘召林1 ,孙占国2 ,许 　洁1 ,于燕燕1 ,冯年平1 3
(11 上海中医药大学中药学院 ,上海 　201203 ; 21 北京嘉事联博医药科技有限公司 ,北京 　100083)
摘 　要 :目的 　研究马钱子碱聚乳酸纳米粒 (Bru2PLA2NPs) iv 注射给药后在家兔体内的药动学行为。方法 　建
立 HPLC 法测定家兔血浆中马钱子碱浓度。色谱柱为 Kromasil C18 (250 mm ×4. 6 mm , 5μm) ;流动相为乙腈2水
(23 ∶77) ,水中含庚烷磺酸钠 1101 g/ L ,磷酸二氢钾 1136 g/ L ,加磷酸调节 p H 至 218 ;体积流量为 1 mL/ min ;检
测波长为 265 nm ;柱温为 25 ℃。采用 3p87 软件计算马钱子碱药动学参数。结果 　单剂量 iv Bru2PLA2N Ps
(4 mg/ kg) 后马钱子碱在兔体内的药动力学数据符合三室模型 ,单剂量静注马钱子碱溶液 (4 mg/ kg) 后符合二室
模型 ;与马钱子碱溶液相比 ,Bru2PLA2N Ps 给药后 ,马钱子碱的消除半衰期 ( t1/ 2β) 提高 616 倍 ;生物利用度提高 817
倍。结论　与马钱子碱溶液相比 ,Bru2PLA2NPs iv 给药后马钱子碱在家兔体内的药动学行为发生了显著变化。
关键词 :马钱子碱 ; 聚乳酸纳米粒 ; 药动学
中图分类号 :R285161 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921422204
I n vivo pharmacokinetics of brucine2loaded polylactide nanoparticles in rabbits
ZHAO Ji2hui1 , L IU Zhao2lin1 , SUN Zhan2guo2 , XU Jie1 , YU Yan2yan1 , FEN G Nian2ping1
(11 College of Chinese Materia Medica , Shanghai University of Traditional Chinese Medicine , Shanghai 201203 , China ;
2. J IASHIL IANBO Pharmaceutical Sci. & Tech. Co. , Ltd. , Beijing 100083 , China)
Abstract : Objective 　To evaluate t he p harmacokinetic behavior of brucine2loaded polylacticacid nano2
particles (Bru2PL A2N Ps) in rabbit s. Methods 　An HPL C met hod was developed for determination of Bru
in rabbit plasma. The separation of Bru was achieved with a Kromasil C18 column (250 mm ×4. 6 mm ,
5μm) . The mobile p hase consist s of acetonit rile and water (23 ∶77) . To each liter of water , 1. 01 gram of
sodium heptanesulfonate and 1. 36 gram of potassium dihydrogen p hosp hate were added , and then t he p H
value of t he water was adjusted to 2. 8 wit h p hosp horic acid. The flow rate was set at 1 mL/ min ; The
detection wavelength was set at 265 nm ; The column temperature was kept at 25 ℃. Compart mental p har2
macokinetics was used for calculating the parameters using 3p87 sof tware , a p ractical p harmacokinetic p ro2
gram by Chinese Association of Mat hematic Pharmacology (Beijing , China) . Results 　The p harmacokine2
tic data of Bru obtained f rom the single dose iv administ ration of Bru2PL A2N Ps and Bru solution fit t hree2
compart ment and two2compart ment open models , respectively. Compared wit h Bru solution af ter a single
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3 收稿日期 :2009201222　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :上海市博士点基金资助项目 (2006B02) ; 上海市教委项目 (07ZZ53) ; 上海市教委重点学科项目 (J50302)
作者简介 :赵继会 (1977 —) ,男 ,讲师 ,博士 ,专业方向为中药新型给药系统研究。3 通讯作者　冯年平　Tel : (021) 51322197 　E2mail : npfeng @hot mail . com
dose iv administ ration , t he elimination half2life ( t1/ 2β) and bioavailability of Bru were increased by 6. 6
times and 8. 7 times , respectively. Conclusion 　Compared wit h Bru solution , the p harmacokinetic behavior
of Bru changes obviously , following the iv administ ration of Bru2PL A2N Ps in rabbit s.
Key words : brucine (Bru) ; polylactide nanoparticles ( PL A2N Ps) ; p harmacokinetics
　　马钱子碱 ( brucine , Bru) 是马钱科植物马钱
S t rychnos nu x2vomica L . 的主要有效成分之一 ,可
用于胃癌、肠癌、肺癌、肝癌、白血病等疾病的治
疗[1～3 ] 。虽然马钱子碱在抗肿瘤方面表现出不错的
效果 ,但是其毒性大、治疗窗窄 ,半衰期短 ,因而应用
受到了限制[4 ,5 ] 。聚乳酸纳米粒具有生物相容性好
的特点 ,并可对包载的药物起到缓释、靶向作用。制
备马钱子碱聚乳酸载药纳米粒 (Bru2PL A2N Ps) 有
望改善马钱子碱疗效同时降低其毒性。本实验建立
了一种测定家兔血浆中马钱子碱浓度的 H PL C 方
法 ,并将其用于评价 Bru2PL A2N Ps 在家兔体内的
药动学行为。
1 　仪器与试药
　　Agilent 1200 高效液相色谱仪 (Agilent 公司 ,
美国) ,5804R 冷冻离心机 ( Eppendorf 公司 ,德国) ,
Anke RDL260B (上海安亭科学仪器厂) ,XW —80A
旋涡混合器 (上海医大仪器厂) ,D KB —501A 恒温
水浴锅 (上海精宏实验设备有限公司) ,超声清洗仪
(上海科导超仪器有限公司) 。
马钱子碱原料药 (质量分数 9710 % , Fluka 公
司 ,批号 434758/ 1 13802) ,马钱子碱对照品 (中国
药品生物制品检定所 ,批号 1107062200505) , Bru2
PL A2N Ps (自制) , 士的宁对照品 (质量分数 ≥
98 % , 中国药品生物制品检定所 , 批号 1107052
200306) ,庚烷磺酸钠 ( Tedia 公司 ,批号 511006) ,
磷酸二氢钾 (国药集团化学试剂有限公司) ,乙腈
(色谱纯 ,Merck 公司) ,氨水、醋酸乙酯等 (均为分
析纯 ,国药集团化学试剂有限公司) 。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 :色谱柱为 Kromasil C18 (250 mm ×
4. 6 mm , 5μm) ;流动相 :乙腈2水 (23 ∶77 ,水中含
庚烷磺酸钠 1101 g/ L ,磷酸二氢钾 1136 g/ L ,加磷
酸调节 p H 至 218) ;体积流量 : 1 mL/ min ;检测波
长 :265 nm ;柱温 :25 ℃;进样量 :20μL 。
212 　标准样品和质控 (QC) 样品的制备
21211 　储备溶液的配制 :精密称取马钱子碱对照品
510 mg ,置 10 mL 量瓶中 ,加入甲醇并稀释至刻度 ,
摇匀 ,得到质量浓度为 015 mg/ mL 的马钱子碱储
备液 ;精密称取士的宁 510 mg ,置 10 mL 量瓶中 ,
加入甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得到质量浓度为 015
mg/ mL 的内标储备液。
21212 　工作溶液的配制 :取马钱子碱储备液适量 ,
加甲醇稀释 ,得到质量浓度为 1、2、5、10、20、50μg/
mL 的马钱子碱工作溶液 ;取内标储备液适量 ,加甲
醇稀释 ,得到质量浓度 20μg/ mL 的内标工作溶液。
21213 　标准样品的制备 :向每份 1 mL 的家兔空白
血浆中加入 50μL 甲醇或 50μL 马钱子碱工作溶
液 ,得到质量浓度为 0、0105、011、0125、015、110、
215μg/ mL 的马钱子碱标准样品。
21214 　QC 样品的制备 :向每份 1 mL 的家兔空白
血浆中加入 50μL 马钱子碱工作溶液 ,得到质量浓
度为 011、015、215μg/ mL 的 QC 样品。
213 　样品处理方法 :向 1 mL 空白血浆、血浆样品
(先加入 50μL 甲醇) 、标准样品或 QC 样品中加入
内标工作溶液 ( 20 μg/ mL ) 50 μL 、2 mL 乙腈、
50μL 氨水 ,涡旋 1 min ,加入 2 mL 醋酸乙酯 ,涡旋
3 min ,超声 1 min ,在 3 000 r/ min 下离心 10 min ,
吸取上清液 ,60 ℃水浴挥干有机溶剂 ,残渣用 100
μL 流动相复溶 ,超声 3 min ,在 10 000 r/ min 下离
心 10 min ,上清液供检测用。
214 　专属性考察 :将药动学研究血浆样品、空白血
浆按样品处理方法处理 ,进样 ,考察方法的专属性。
结果见图 1。
215 　线性关系考察 :取标准样品 ,每个质量浓度平
行 3 份 ,按样品制备方法处理 ,进样分析。以马钱子
碱峰面积与内标峰面积的比值对质量浓度进行线形
回归 ,计算得线性方程为 Y = 1. 113 9 X + 01051 1 ,
马钱子碱质量浓度在 0105～215μg/ mL 峰面积比
值与质量浓度之间线性关系良好 ( r = 0 ,999 8) 。
216 　精密度和准确度 :取临用前配制的高、中、低质
量浓度 QC 样品 ,每个质量浓度平行 5 份 ,按样品制
备方法处理 ,在 1 d 内进样分析 ,考察方法的日内精
密度和准确度。在连续 3 d 内 ,将日内精密度和准
确度实验重复 3 次 ,考察方法的日间精密度和准确
度。方法的精密度和准确度考察结果见表 1。结果
表明 ,方法的精密度和准确度良好。
217 　回收率 :对比 QC 样品 ( 011、015、215 μg/
mL ,每个质量浓度平行 5 份) 与相应质量浓度的马
·3241·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
12马钱子碱　22士的宁内标
12Bru 　22st rychnine internal standard
图 1 　马钱子碱对照品和士的宁内标 ( A) 、兔空白血浆 ( B) 、兔空白血浆 + 马钱子碱对照品 + 士的宁内标 ( C)
和兔血浆样品 ( D) 的 HPLC 色谱图
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of Bru reference substances + strychnine internal standard ( A) , blank rabbit plasma ( B) , blank
rabbit plasma spiked with Bru reference substances + strychnine internal standard ( C) , and rabbit plasma sample ( D)
表 1 　方法的精密度和准确度的结果
Table 1 　Validation of intra2 and inter2day
accuracy and precision
加入量/
(μg ·mL - 1 )
检出量/ (μg ·mL - 1 )
日内 日间
精密度/ %
日内 RSD 日间 RSD
准确度/ %
日内 日间
011 0111 0112 618 1416 11510 11510
015 0153 0152 418 412 10316 10316
215 2159 2167 219 615 10616 10616
钱子碱甲醇溶液 (110、510、25μg/ mL) 的马钱子碱
色谱峰面积 ,计算回收率。结果质量浓度为 011、
015、215 μg/ mL 的 QC 样品的回收率分别为
(88151 ±8197 ) %、( 84124 ±4143 ) %、( 85153 ±
3168) %。
218 　稳定性考察 :将 3 个质量浓度的 QC 样品分别
在室温下放置 12 h ,在 - 20 ℃下放置 7 d ,冻融循
环 3 次考察样品的稳定性。结果表明样品稳定 ,在
上述条件下放置结束后 ,3 个质量浓度 QC 样品质
量浓度均在原质量浓度的 90 % 以上。
219 　药动学研究
21911 　给药和取样 :新西兰大白兔 ,体质量 210～
215 kg ,随机分成两组 ,每组 4 只 ,于实验前 12 h 禁
食不禁水。第 1 组 ,经耳缘 iv 马钱子碱溶液 ( 4
mg/ kg) [2 ] ,第 2 组耳缘 iv Bru2PL A2N Ps ( 4 mg/
kg) 。第 1 组 ,在给药后 0103、0108、0117、0133、
0167、1、115、2 h 自耳缘静脉取血 2 mL ,置肝素抗
凝管中 ,在 3 000 r/ min 下离心 10 min ,取 1 mL 血
浆 ,按照样品处理方法项下方法处理 ,进样分析。第
2 组 ,取样时间点为给药后 0103、0117、0167、1、2、
3、4、5、8、12、18 h 自耳缘静脉取血 2 mL ,置肝素抗
凝管中 ,在 3 000 r/ min 下离心 10 min ,取 1 mL 血
浆 ,按照样品处理方法项下方法处理 ,进样分析。
21912 　数据处理 :对所得的药动学数据应用药动学
软件 3P87 进行房室模型拟和并计算药动学参数。
21913 　药动学结果 :马钱子碱溶液和 Bru2PL A2
N Ps iv 给药后平均血药浓度对时间作图 ,见图 2。
药动学参数见表 2。
　　经 3p87 软件计算 ,单剂量 iv Bru2PL A2N Ps 后
图 2 　兔 iv 马钱子碱溶液和 Bru2PLA2NPs 后
平均血药浓度2时间曲线 ( x ±s , n = 4)
Fig. 2 　Mean plasma concentration2time curves
of Bru after iv administration of Bru
solution and Bru2PLA2NPs ( x ±s , n = 4)
表 2 　马钱子碱溶液和 Bru2PLA2NPs 兔 iv 给药后
药动学参数 ( x ±s , n = 4)
Table 2 　Pharmacokinetic parameters of Bru after iv
administration of Bru solution and Bru2PLA2
NPs ( x ±s , n = 4)
参　数 单　位 马钱子碱溶液 Bru2PL A2NPs
A μg ·mL - 1 31 14 ±1161 0143 ±0106
α h - 1 261 11 ±0165 0159 ±0117
B μg ·mL - 1 01 31 ±0116 0144 ±0111
β h - 1 01 79 ±0127 0110 ±0103
VC L ·kg - 1 11 16 ±0145 2197 ±0138
t1/ 2α h 01 03 ±0102 1117 ±0125
t1/ 2β h 01 88 ±0102 6169 ±1107
AUC μg ·mL - 1 ·h 01 52 ±0107 5103 ±0126
CL h - 1 ·kg - 1 71 73 ±2108 0180 ±0105
k21 h - 1 31 09 ±0135 7153 ±2103
k10 h - 1 61 67 ±0169 0127 ±0104
k12 h - 1 171 13 ±0135 3175 ±0172
P μg ·mL - 1 0148 ±0114
γ h - 1 11147 ±4148
t1/ 2γ h 0106 ±0102
k13 h - 1 0126 ±0111
k31 h - 1 0135 ±0107
·4241· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
马钱子碱的药动学数据符合三室模型 ,单剂量 iv 马
钱子碱溶液后符合二室模型。与马钱子碱溶液相
比 ,Bru2PL A2N Ps 给药后 ,马钱子碱的消除半衰期
( t1/ 2β) 提高 616 倍 ;生物利用度提高 817 倍。由上
述结果可知 ,与马钱子碱溶液相比 , iv 给药 Bru2
PL A2N Ps 后 ,马钱子碱在家兔体内的药动学行为发
生了显著变化。
3 　讨论
　　本实验比较了沉淀蛋白后萃取和直接用有机试
剂萃取两种血浆样品处理方法 ,前者由于含有较少
的杂质 ,而且回收率更高 ,故选择沉淀蛋白后萃取
法 ;考察了甲醇、乙腈、氯仿、乙醚、醋酸乙酯、乙腈和
氯仿、乙腈和醋酸乙酯、乙腈和乙醚等多种方案 ,发
现用乙腈沉淀蛋白效果最好 ,氯仿和醋酸乙酯在回
收率方面相差不大 ,但是用醋酸乙酯操作性更好 ,故
选择用乙腈沉淀蛋白 ,用醋酸乙酯萃取。
与马钱子碱溶液相比 ,将马钱子碱制成纳米粒可
延长药物在动物体内的循环和作用时间 ,提高生物利
用度。这可解释为 :纳米粒进入血液后 ,定向分布到
网状内皮系统丰富的组织 ,血中循环量减少 ,进入组
织的纳米粒缓慢释放出马钱子碱 ,一部分重新进入血
液 ,最后达到动态平衡 ,使血中循环量增加 ,循环时间
延长 ,生物利用度提高 ,且血药浓度平稳[6 ] 。
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藏药佐太对西红花苷21 大鼠体内药动学的影响
李向阳1 ,2 ,冯伟力1 ,朱俊博1 ,尼玛才让3 ,格日力2 3
(11 青海大学医学院 药学系 ,青海 西宁 　810001 ; 21 青海大学高原医学研究中心 ,青海 西宁 　810001 ;
31 青海省藏医院 ,青海 西宁 　810002)
摘 　要 :目的 　探讨藏药佐太对西红花苷21 在大鼠体内药动学特征的影响。方法 　对照组 (连续 ig 生理盐水 7 d)
和实验组 (连续 ig 佐太混悬液 7 d 或 21 d) 大鼠按 5 mg/ kg 剂量 im 西红花苷21 后 ,采用反相高效液相色谱法测
定给药后大鼠血浆中西红花苷21 的质量浓度 ,DAS 210 软件计算各组大鼠西红花苷21 的药动学参数。结果 　实验
组大鼠分别按 10 mg/ (kg ·d) 连续 ig 佐太 7 d 和 21 d 后 ,西红花苷21 的药动学特征发生明显变化 ,AUC、Cmax和
MRT 显著大于对照组 ,而 CL 和 Vd 显著小于对照组 ,并且随着佐太用药时间的延长 ,西红花苷21 的 AUC 增大。
结论 　给予佐太后西红花苷21 在大鼠体内的吸收显著增多、消除显著减慢。
关键词 :藏药 ; 佐太 ; 西红花苷21 ; 药动学
中图分类号 :R285161 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921425204
Effect of Tibetan medicine Zuotai on in vivo pharmacokinetics of crocin21 in rats
L I Xiang2yang1 ,2 , FEN G Wei2li1 , ZHU J un2bo1 , N IMA Cai2rang3 , GE Ri2li2
(11Department of Pharmacy , Medical College of Qinghai University , Xining 810001 , China ; 2. Research Center of High
Altitude Medicine , Qinghai University , Xining 810001 , China ; 3. Qinghai Tibetan Hospital , Xining 810002 , China)
Abstract : Objective 　To st udy the effect of Tibetan medicine Zuotai on i n v i vo p harmacokinetics of
crocin21 in rat s. Methods 　After im injection of crocin21 (5 mg/ kg) in cont rol (continuously ig normal sa2
line for 7 d) and expermental (continuously ig Zuotai suspension for 7 d or 21 d) rat s , The plasma concen2
t ration of crocin21 was determined by RP2HPL C , and plasma concent ration2time data were analyzed by
DAS 2. 0 software to get t he related p harmacokinetic parameters of crocin21. Results 　After continuously
·5241·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
3 收稿日期 :2009201220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家中医药管理局中医药科学技术研究专项 (国中管 04205ZM04)
作者简介 :李向阳 (1974 —) ,男 ,甘肃省会宁县人 ,博士 ,副教授 ,研究方向为药物代谢动力学研究。
Tel : (0971) 3868473 　E2mail : qhmclxy @163. com