全 文 :·科技简报·
[基金项目]国家民委自然基金项目 “马钱子生物碱抗肿瘤作用药理评价体系及其分子结构的生物优化”(编号:MZY09003);国家自然科学基
金“马钱属药用植物毒-效物质基础的共性研究”(编号:81073147);国家科技部“十二五”科技支撑计划“基于壮、傣、土家等民族医特色病种药
物的有效性及质量评价关键技术研究”(编号:2012BAI27B06) [作者简介]周玲,女,硕士研究生,助理实验师,电话:027-67843237,E-mail:
zlc_2009@163.com [通讯作者]邓旭坤,男,博士,副教授,电话:027-67841150,E-mail:dxk990720@163.com
高效液相色谱法测定3种马钱属药材
中士的宁和马钱子碱的含量
周玲1,孙汉斌2,邓旭坤1,陈旅翼1 (1.中南民族大学
药学院,湖北 武汉430074;2.武汉市第三医院,湖北 武汉
430060)
[摘要] 目的:通过比较马钱属3种药材山马钱、马钱子、吕
宋果中士的宁和马钱子碱的含量,探讨山马钱与吕宋果是否
可以作为马钱子的替代资源。方法:采取 HPLC法,条件:
Agilent C18柱,流动相为水-冰醋酸-三乙胺(230∶2.4∶0.3)
(A)∶甲醇(B)为75∶25,检测波长254 nm,流速1 mL·min-1,
柱温30℃,进样体积10μL。结果:士的宁和马钱子碱的质
量浓度分别在0.224~2.261 mg·mL-1(r=0.999 4,n=5)和
0.124~1.241 mg·mL-1(r=0.999 8,n=5)范围内呈良好的
线性关系,平均回收率分别为99.01%和98.91%;吕宋果中
士的宁含量在3种药材中最高,其马钱子碱的含量低于马钱
子,而山马钱中的士的宁和马钱子碱的含量均较低。结论:
该法精确,简便,重复性好;吕宋果有可能成为马钱子的替代
资源,而山马钱不适宜作为其药用资源。
[关键词] 3种马钱属药材;士的宁;马钱子碱;高效液相色
谱法;替代资源
[中图分类号]R927.21 [文献标识码]A [文章编号]1001-
5213(2012)16-1301-02
马钱属(Strychnos Linn.)是马钱科(Loganiaceae)植物
中种类最多的一个属,分布于热带至温带地区。马钱属植物
大多具有通经络、强筋骨、祛风湿、散结肿等疗效,临床应用
广泛。通常说的马钱子为马钱科马钱属植物马钱(Strychnos
nux-vomica L.)或云南长籽马钱(Strychnos wallichiana
Steud.exDC.)的干燥成熟种子[1]。但近年来随着药用植
物资源的日益枯竭,再加上对马钱属植物缺乏深入的了解及
不法利益的驱动,在不少地区普遍存在将其他同属植物的种
子与之混用的情况。生物碱是马钱属植物的主要成分之一,
其中士的宁和马钱子碱是马钱的主要有效成分及毒性成
分[2]。本文拟以马钱属常见的3种植物山马钱(Strychnos
nux-blanda Hil.)、马钱子(Strychnos nux-vomica L.)和吕
宋果(Strychnos ignatii P.J.Bergius.)作为研究对象,采用
HPLC法对三者的士的宁和马钱子碱进行含量测定,为寻找
马钱药用基源的替代品提供理论依据。
1 材料
高效液相色谱仪(DIONEX Ultimate 3000,USA)。山马
钱(Strychnos nux-blanda Hil.产地:云南大理)、马钱子
(Strychnos nux-vomica L.产地:越南)、吕宋果(Strychnos
ignatii P.J.Bergius.产地:菲律宾)药材,购于亳州药材市
场并经中南民族大学药学院邓旭坤副教授鉴定为正品。士
的宁标准品(中国食品药品检定研究院,批号 110705-
200306)、马钱子碱标准品(中国食品药品检定研究院,批号
110706-200505);甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯,水为
纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent C18柱(4.6 mm×250 mm,
5μm);流动相:水-冰醋酸-三乙胺(230∶2.4∶0.3)(A)∶甲醇
(B)=75∶25;流速:1 mL·min-1;检测波长:254 nm;柱温:30
℃;进样体积:10μL。在此色谱条件下,士的宁与马钱子碱
的分离度较好,色谱图见图1。
图1 山马钱、马钱子和吕宋果等3种马钱属药材的高效液相色谱图
A.标准品;B.山马钱;C.马钱子;D.吕宋果;1-士的宁;2-马钱子碱
Fig 1 The HPLC chromatogram of reference substance and three
species of Strychnos Linn.medicinal materials
A.strychnine and brucine reference substance;B.Strychnos nux-
blanda Hil;C.Strychnos nux-vomica L;D.Strychnos ignatii P.J.
Bergius;1-strychnine;2-brucine.
2.2 供试品溶液的制备 精密称取山马钱、马钱子和吕宋
果粗粉(过3号筛)5.0g,置于锥形瓶中,加甲醇-水-盐酸(50
∶50∶1)20 mL,称重,超声提取30 min,冷却至室温,称重,加
甲醇-水-盐酸(50∶50∶1)补足至原重,过滤,滤液减压蒸干至
恒重,用甲醇定容至10 mL量瓶中,摇匀,0.45μm微孔滤膜
过滤,取续滤液作为供试品溶液[3]。
2.3 标准品溶液的制备 分别精密称取经五氧化二磷减压
干燥24 h的士的宁、马钱子碱标准品适量,置同一量瓶中,
用甲醇定容至25 mL,摇匀,即得标准品溶液。每1 mL标准
品溶液中含士的宁2.26 mg、马钱子碱1.24 mg。
2.4 线性关系考察 精密吸取标准品溶液1,2,4,8,10 mL
置10 mL量瓶中,分别加甲醇定容至刻度,摇匀,得到不同浓
度的标准品溶液,分别进样10μL,按“2.1”色谱条件下测定,
以质量浓度X(mg·mL-1)为横坐标,峰面积Y(mAU·min)
为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程:士的宁:Y=
18.122 X-0.082 9,r=0.999 4(n=5);马钱子碱:Y=13.58
X-0.062 7,r=0.999 8(n=5)。结果表明士的宁和马钱子
碱分别在0.224~2.261 mg·mL-1和0.124~1.241 mg·
·1031·中国医院药学杂志2012年第32卷第16期Chin Hosp Pharm J,2012 Aug,Vol 32,No.16
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2012.16.006
mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 取标准品溶液,按“2.1”项色谱条件下重
复进样5次,测定峰面积。士的宁平均峰面积为413.78,
RSD为0.32%;马钱子碱平均峰面积为167.26,RSD 为
0.11%。试验结果表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验 精密称取同一批号马钱子 (批号
101020)粗粉5份,每份5.0g,按“2.2”项下制成供试品溶液,
按“2.1”项色谱条件下分别测定峰面积。测得样品中士的宁
平均峰面积为208.97,RSD为1.43%;马钱子碱平均峰面积
为105.92,RSD为1.79%。
2.7 稳定性试验 取“2.2”项下方法制得的供试品溶液,室
温25℃放置,按“2.1”项下色谱条件和方法,分别于0,2,4,
8,24 h测定峰面积(每个时间点平行测定3次)。测得士的
宁的平均峰面积为208.73,RSD为1.02%;马钱子碱的平均
峰面积为105.49,RSD为1.12%,表明处理后的供试品溶液
在24 h内具有良好的稳定性。
2.8 加样回收率试验 取已知含量的样品(士的宁含量为
1.69%,马钱子碱含量为0.87%)9份,每份约0.5 g,精密称
定,精密加入一定量的对照品,按“2.2”项下制成供试品溶
液,按“2.1”项下色谱条件分别测定。结果见表1和表2。
表1 士的宁加样回收率试验结果(n=5)
Tab 1 Results of strychnine recovery test(n=5)
称样量
/g
士的宁
量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
率/%
RSD
/%
0.50 8.45 5.01 13.48 100.13
0.49 8.28 5.01 13.18 99.15
0.51 8.62 5.01 13.31 97.65
0.52 8.79 6.02 14.63 98.83
0.51 8.62 6.02 14.57 99.56 99.01 0.68
0.49 8.28 6.02 14.12 98.77
0.49 8.28 7.01 15.17 99.24
0.50 8.45 7.01 15.29 98.93
0.50 8.45 7.01 15.27 98.80
表2 马钱子碱加样回收率试验结果(n=5)
Tab 2 Results of brucine recovery test(n=5)
称样量
/g
马钱子碱
量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
率/%
RSD
/%
0.50 4.35 2.05 6.29 98.28
0.49 4.26 2.05 6.25 99.00
0.51 4.44 2.05 6.32 97.43
0.52 4.52 3.02 7.43 98.49
0.51 4.44 3.02 7.36 98.70 98.91 0.82
0.49 4.26 3.02 7.22 99.13
0.49 4.26 4.05 8.28 99.60
0.50 4.35 4.05 8.42 100.24
0.50 4.35 4.05 8.34 99.29
2.9 样品含量测定 取3种马钱属药材各5批样品,按
“2.2”项下制成供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件分别测定
(每个批号平行测定3次)。计算含量,结果见表3。
3 讨论
本检测方法简便,经济,易行,重复性好;流动相曾经用
甲醇-水(30∶70)、甲醇-0.2%冰醋酸(25∶75)、乙腈-0.2%磷
酸(30∶70)等尝试过,但拖尾严重,分离度不高。经多次实验
发现,当在流动相中加入三乙胺后,色谱峰峰形和分离度均
得到了明显改善。也有学者[4]用乙腈-水(水-冰醋酸-三乙
胺)(25∶75)作为流动相成功地对不同产地制马钱子的士的
宁和马钱子碱同时进行了测定,笔者对此也进行过比较研
究,发现分离效果相近,考虑到经济与环保,最终选择用甲醇
代替乙腈作为有机相的流动相。
本实验首次将马钱属的3种药材所含的士的宁和马钱
子碱含量进行比较研究,结果表明吕宋果中的士的宁含量为
马钱子的2倍,而马钱子碱的含量比马钱子的略低,山马钱
中的士的宁和马钱子碱的含量均较低,提示吕宋果有可能成
为马钱子的替代资源,而山马钱则不适宜作为其药用资源。
同时实验结果还提示:同属植物虽然主成分相同,但含量差
异还是比较大的,因此,在临床应用上要注意种属的区别。
表3 各药材样品中士的宁和马钱子碱的含量测定结果(n=3,珚x±s)
Tab 3 Results of content determination of strychnine and brucine from different samples(n=3,珚x±s)
样品 产地 批号 士的宁含量/% 珚x/% RSD/% 马钱子碱含量/% 珚x/% RSD/%
山马钱 云南大理
080810 0.224±0.001 0.415±0.002
081020 0.227±0.003 0.411±0.002
090928 0.221±0.002 0.223 1.32 0.403±0.003 0.408 1.68
091023 0.223±0.001 0.397±0.004
091210 0.221±0.003 0.409±0.003
马钱子 越南
090321 1.691±0.003 0.879±0.003
090826 1.694±0.001 0.877±0.003
100910 1.698±0.001 1.691 0.3 0.863±0.002 0.871 0.89
101020 1.689±0.002 0.862±0.001
101115 1.685±0.004 0.875±0.002
吕宋果 菲律宾
090513 3.117±0.003 0.811±0.003
090712 3.121±0.002 0.804±0.001
100811 3.103±0.003 3.12 0.46 0.819±0.003 0.81 0.86
100819 3.127±0.001 0.802±0.002
100828 3.145±0.004 0.815±0.003
下阶段还需对它们的药理与毒理做进一步的比较研究,来确
定这种替代的可能性。
参考文献:
[1] 中国药典.一部[S].2005:34.
[2] 马密霞,胡文祥,刘接卿,等.马钱子属植物的药理毒理作用及
临床应用进展[J].中国医院药学杂志,2007,27(12):1725-
1728.
[3] 王丹丹,李俊松,蔡宝昌,等.HPLC法同时测定制马钱子中4
种生物碱类成分的含量[J].药学与临床研究,2008,16(6):
523-524.
[4] 金芝兰,潘金火,周娟娟.HPLC法测定不同产地制马钱子中士
的宁和马钱子碱的含量[J].现代中药研究与实践,2010,24
(1):57-59.
[收稿日期]2012-01-06
·2031· 中国医院药学杂志2012年第32卷第16期Chin Hosp Pharm J,2012 Aug,Vol 32,No.16