全 文 ：·科技简报·
［基金项目］国家民委自然基金项目 “马钱子生物碱抗肿瘤作用药理评价体系及其分子结构的生物优化”（编号：ＭＺＹ０９００３）；国家自然科学基
金“马钱属药用植物毒－效物质基础的共性研究”（编号：８１０７３１４７）；国家科技部“十二五”科技支撑计划“基于壮、傣、土家等民族医特色病种药
物的有效性及质量评价关键技术研究”（编号：２０１２ＢＡＩ２７Ｂ０６）　［作者简介］周玲，女，硕士研究生，助理实验师，电话：０２７－６７８４３２３７，Ｅ－ｍａｉｌ：
ｚｌｃ＿２００９＠１６３．ｃｏｍ　［通讯作者］邓旭坤，男，博士，副教授，电话：０２７－６７８４１１５０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｘｋ９９０７２０＠１６３．ｃｏｍ
高效液相色谱法测定３种马钱属药材
中士的宁和马钱子碱的含量
周玲１，孙汉斌２，邓旭坤１，陈旅翼１　（１．中南民族大学
药学院，湖北 武汉４３００７４；２．武汉市第三医院，湖北 武汉
４３００６０）
［摘要］　目的：通过比较马钱属３种药材山马钱、马钱子、吕
宋果中士的宁和马钱子碱的含量，探讨山马钱与吕宋果是否
可以作为马钱子的替代资源。方法：采取 ＨＰＬＣ法，条件：
Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８柱，流动相为水－冰醋酸－三乙胺（２３０∶２．４∶０．３）
（Ａ）∶甲醇（Ｂ）为７５∶２５，检测波长２５４　ｎｍ，流速１　ｍＬ·ｍｉｎ－１，
柱温３０℃，进样体积１０μＬ。结果：士的宁和马钱子碱的质
量浓度分别在０．２２４～２．２６１　ｍｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９　４，ｎ＝５）和
０．１２４～１．２４１　ｍｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９　８，ｎ＝５）范围内呈良好的
线性关系，平均回收率分别为９９．０１％和９８．９１％；吕宋果中
士的宁含量在３种药材中最高，其马钱子碱的含量低于马钱
子，而山马钱中的士的宁和马钱子碱的含量均较低。结论：
该法精确，简便，重复性好；吕宋果有可能成为马钱子的替代
资源，而山马钱不适宜作为其药用资源。
［关键词］　３种马钱属药材；士的宁；马钱子碱；高效液相色
谱法；替代资源
［中图分类号］Ｒ９２７．２１　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－
５２１３（２０１２）１６－１３０１－０２
　　马钱属（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　Ｌｉｎｎ．）是马钱科（Ｌｏｇａｎｉａｃｅａｅ）植物
中种类最多的一个属，分布于热带至温带地区。马钱属植物
大多具有通经络、强筋骨、祛风湿、散结肿等疗效，临床应用
广泛。通常说的马钱子为马钱科马钱属植物马钱（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ
ｎｕｘ－ｖｏｍｉｃａ　Ｌ．）或云南长籽马钱（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　ｗａｌｌｉｃｈｉａｎａ
Ｓｔｅｕｄ．ｅｘＤＣ．）的干燥成熟种子［１］。但近年来随着药用植
物资源的日益枯竭，再加上对马钱属植物缺乏深入的了解及
不法利益的驱动，在不少地区普遍存在将其他同属植物的种
子与之混用的情况。生物碱是马钱属植物的主要成分之一，
其中士的宁和马钱子碱是马钱的主要有效成分及毒性成
分［２］。本文拟以马钱属常见的３种植物山马钱（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ
ｎｕｘ－ｂｌａｎｄａ　Ｈｉｌ．）、马钱子（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　ｎｕｘ－ｖｏｍｉｃａ　Ｌ．）和吕
宋果（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　ｉｇｎａｔｉｉ　Ｐ．Ｊ．Ｂｅｒｇｉｕｓ．）作为研究对象，采用
ＨＰＬＣ法对三者的士的宁和马钱子碱进行含量测定，为寻找
马钱药用基源的替代品提供理论依据。
１　材料
高效液相色谱仪（ＤＩＯＮＥＸ　Ｕｌｔｉｍａｔｅ　３０００，ＵＳＡ）。山马
钱（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　ｎｕｘ－ｂｌａｎｄａ　Ｈｉｌ．产地：云南大理）、马钱子
（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　ｎｕｘ－ｖｏｍｉｃａ　Ｌ．产地：越南）、吕宋果（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ
ｉｇｎａｔｉｉ　Ｐ．Ｊ．Ｂｅｒｇｉｕｓ．产地：菲律宾）药材，购于亳州药材市
场并经中南民族大学药学院邓旭坤副教授鉴定为正品。士
的宁标准品（中国食品药品检定研究院，批号 １１０７０５－
２００３０６）、马钱子碱标准品（中国食品药品检定研究院，批号
１１０７０６－２００５０５）；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯，水为
纯化水。
２　方法与结果
２．１　色谱条件　色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８柱（４．６　ｍｍ×２５０　ｍｍ，
５μｍ）；流动相：水－冰醋酸－三乙胺（２３０∶２．４∶０．３）（Ａ）∶甲醇
（Ｂ）＝７５∶２５；流速：１　ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长：２５４　ｎｍ；柱温：３０
℃；进样体积：１０μＬ。在此色谱条件下，士的宁与马钱子碱
的分离度较好，色谱图见图１。
图１　山马钱、马钱子和吕宋果等３种马钱属药材的高效液相色谱图
Ａ．标准品；Ｂ．山马钱；Ｃ．马钱子；Ｄ．吕宋果；１－士的宁；２－马钱子碱
Ｆｉｇ　１　Ｔｈｅ　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｒｅｅ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　Ｌｉｎｎ．ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ
Ａ．ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ　ａｎｄ　ｂｒｕｃｉｎｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ；Ｂ．Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　ｎｕｘ－
ｂｌａｎｄａ　Ｈｉｌ；Ｃ．Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　ｎｕｘ－ｖｏｍｉｃａ　Ｌ；Ｄ．Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ　ｉｇｎａｔｉｉ　Ｐ．Ｊ．
Ｂｅｒｇｉｕｓ；１－ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ；２－ｂｒｕｃｉｎｅ．
２．２　供试品溶液的制备　精密称取山马钱、马钱子和吕宋
果粗粉（过３号筛）５．０ｇ，置于锥形瓶中，加甲醇－水－盐酸（５０
∶５０∶１）２０　ｍＬ，称重，超声提取３０　ｍｉｎ，冷却至室温，称重，加
甲醇－水－盐酸（５０∶５０∶１）补足至原重，过滤，滤液减压蒸干至
恒重，用甲醇定容至１０　ｍＬ量瓶中，摇匀，０．４５μｍ微孔滤膜
过滤，取续滤液作为供试品溶液［３］。
２．３　标准品溶液的制备　分别精密称取经五氧化二磷减压
干燥２４　ｈ的士的宁、马钱子碱标准品适量，置同一量瓶中，
用甲醇定容至２５　ｍＬ，摇匀，即得标准品溶液。每１　ｍＬ标准
品溶液中含士的宁２．２６　ｍｇ、马钱子碱１．２４　ｍｇ。
２．４　线性关系考察　精密吸取标准品溶液１，２，４，８，１０　ｍＬ
置１０　ｍＬ量瓶中，分别加甲醇定容至刻度，摇匀，得到不同浓
度的标准品溶液，分别进样１０μＬ，按“２．１”色谱条件下测定，
以质量浓度Ｘ（ｍｇ·ｍＬ－１）为横坐标，峰面积Ｙ（ｍＡＵ·ｍｉｎ）
为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：士的宁：Ｙ＝
１８．１２２　Ｘ－０．０８２　９，ｒ＝０．９９９　４（ｎ＝５）；马钱子碱：Ｙ＝１３．５８
Ｘ－０．０６２　７，ｒ＝０．９９９　８（ｎ＝５）。结果表明士的宁和马钱子
碱分别在０．２２４～２．２６１　ｍｇ·ｍＬ－１和０．１２４～１．２４１　ｍｇ·
·１０３１·中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第１６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ａｕｇ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．１６
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2012.16.006
ｍＬ－１范围内呈良好的线性关系。
２．５　精密度试验　取标准品溶液，按“２．１”项色谱条件下重
复进样５次，测定峰面积。士的宁平均峰面积为４１３．７８，
ＲＳＤ为０．３２％；马钱子碱平均峰面积为１６７．２６，ＲＳＤ 为
０．１１％。试验结果表明仪器精密度良好。
２．６　 重复性试验 　 精密称取同一批号马钱子 （批号
１０１０２０）粗粉５份，每份５．０ｇ，按“２．２”项下制成供试品溶液，
按“２．１”项色谱条件下分别测定峰面积。测得样品中士的宁
平均峰面积为２０８．９７，ＲＳＤ为１．４３％；马钱子碱平均峰面积
为１０５．９２，ＲＳＤ为１．７９％。
２．７　稳定性试验　取“２．２”项下方法制得的供试品溶液，室
温２５℃放置，按“２．１”项下色谱条件和方法，分别于０，２，４，
８，２４　ｈ测定峰面积（每个时间点平行测定３次）。测得士的
宁的平均峰面积为２０８．７３，ＲＳＤ为１．０２％；马钱子碱的平均
峰面积为１０５．４９，ＲＳＤ为１．１２％，表明处理后的供试品溶液
在２４　ｈ内具有良好的稳定性。
２．８　加样回收率试验　取已知含量的样品（士的宁含量为
１．６９％，马钱子碱含量为０．８７％）９份，每份约０．５　ｇ，精密称
定，精密加入一定量的对照品，按“２．２”项下制成供试品溶
液，按“２．１”项下色谱条件分别测定。结果见表１和表２。
表１　士的宁加样回收率试验结果（ｎ＝５）
Ｔａｂ　１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ（ｎ＝５）
称样量
／ｇ
士的宁
量／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ
／％
０．５０　 ８．４５　 ５．０１　 １３．４８　 １００．１３
０．４９　 ８．２８　 ５．０１　 １３．１８　 ９９．１５
０．５１　 ８．６２　 ５．０１　 １３．３１　 ９７．６５
０．５２　 ８．７９　 ６．０２　 １４．６３　 ９８．８３
０．５１　 ８．６２　 ６．０２　 １４．５７　 ９９．５６　 ９９．０１　 ０．６８
０．４９　 ８．２８　 ６．０２　 １４．１２　 ９８．７７
０．４９　 ８．２８　 ７．０１　 １５．１７　 ９９．２４
０．５０　 ８．４５　 ７．０１　 １５．２９　 ９８．９３
０．５０　 ８．４５　 ７．０１　 １５．２７　 ９８．８０
表２　马钱子碱加样回收率试验结果（ｎ＝５）
Ｔａｂ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｂｒｕｃｉｎｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ（ｎ＝５）
称样量
／ｇ
马钱子碱
量／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ
／％
０．５０　 ４．３５　 ２．０５　 ６．２９　 ９８．２８
０．４９　 ４．２６　 ２．０５　 ６．２５　 ９９．００
０．５１　 ４．４４　 ２．０５　 ６．３２　 ９７．４３
０．５２　 ４．５２　 ３．０２　 ７．４３　 ９８．４９
０．５１　 ４．４４　 ３．０２　 ７．３６　 ９８．７０　 ９８．９１　 ０．８２
０．４９　 ４．２６　 ３．０２　 ７．２２　 ９９．１３
０．４９　 ４．２６　 ４．０５　 ８．２８　 ９９．６０
０．５０　 ４．３５　 ４．０５　 ８．４２　 １００．２４
０．５０　 ４．３５　 ４．０５　 ８．３４　 ９９．２９
２．９　样品含量测定　取３种马钱属药材各５批样品，按
“２．２”项下制成供试品溶液，按“２．１”项下色谱条件分别测定
（每个批号平行测定３次）。计算含量，结果见表３。
３　讨论
本检测方法简便，经济，易行，重复性好；流动相曾经用
甲醇－水（３０∶７０）、甲醇－０．２％冰醋酸（２５∶７５）、乙腈－０．２％磷
酸（３０∶７０）等尝试过，但拖尾严重，分离度不高。经多次实验
发现，当在流动相中加入三乙胺后，色谱峰峰形和分离度均
得到了明显改善。也有学者［４］用乙腈－水（水－冰醋酸－三乙
胺）（２５∶７５）作为流动相成功地对不同产地制马钱子的士的
宁和马钱子碱同时进行了测定，笔者对此也进行过比较研
究，发现分离效果相近，考虑到经济与环保，最终选择用甲醇
代替乙腈作为有机相的流动相。
本实验首次将马钱属的３种药材所含的士的宁和马钱
子碱含量进行比较研究，结果表明吕宋果中的士的宁含量为
马钱子的２倍，而马钱子碱的含量比马钱子的略低，山马钱
中的士的宁和马钱子碱的含量均较低，提示吕宋果有可能成
为马钱子的替代资源，而山马钱则不适宜作为其药用资源。
同时实验结果还提示：同属植物虽然主成分相同，但含量差
异还是比较大的，因此，在临床应用上要注意种属的区别。
表３　各药材样品中士的宁和马钱子碱的含量测定结果（ｎ＝３，珚ｘ±ｓ）
Ｔａｂ　３　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ　ａｎｄ　ｂｒｕｃｉｎｅ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓａｍｐｌｅｓ（ｎ＝３，珚ｘ±ｓ）
样品 产地 批号 士的宁含量／％ 珚ｘ／％ ＲＳＤ／％ 马钱子碱含量／％ 珚ｘ／％ ＲＳＤ／％
山马钱 云南大理
０８０８１０　 ０．２２４±０．００１　 ０．４１５±０．００２
０８１０２０　 ０．２２７±０．００３　 ０．４１１±０．００２
０９０９２８　 ０．２２１±０．００２　 ０．２２３　 １．３２　 ０．４０３±０．００３　 ０．４０８　 １．６８
０９１０２３　 ０．２２３±０．００１　 ０．３９７±０．００４
０９１２１０　 ０．２２１±０．００３　 ０．４０９±０．００３
马钱子 越南
０９０３２１　 １．６９１±０．００３　 ０．８７９±０．００３
０９０８２６　 １．６９４±０．００１　 ０．８７７±０．００３
１００９１０　 １．６９８±０．００１　 １．６９１　 ０．３　 ０．８６３±０．００２　 ０．８７１　 ０．８９
１０１０２０　 １．６８９±０．００２　 ０．８６２±０．００１
１０１１１５　 １．６８５±０．００４　 ０．８７５±０．００２
吕宋果 菲律宾
０９０５１３　 ３．１１７±０．００３　 ０．８１１±０．００３
０９０７１２　 ３．１２１±０．００２　 ０．８０４±０．００１
１００８１１　 ３．１０３±０．００３　 ３．１２　 ０．４６　 ０．８１９±０．００３　 ０．８１　 ０．８６
１００８１９　 ３．１２７±０．００１　 ０．８０２±０．００２
１００８２８　 ３．１４５±０．００４　 ０．８１５±０．００３
下阶段还需对它们的药理与毒理做进一步的比较研究，来确
定这种替代的可能性。
参考文献：
［１］　中国药典．一部［Ｓ］．２００５：３４．
［２］　马密霞，胡文祥，刘接卿，等．马钱子属植物的药理毒理作用及
临床应用进展［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００７，２７（１２）：１７２５－
１７２８．
［３］　王丹丹，李俊松，蔡宝昌，等．ＨＰＬＣ法同时测定制马钱子中４
种生物碱类成分的含量［Ｊ］．药学与临床研究，２００８，１６（６）：
５２３－５２４．
［４］　金芝兰，潘金火，周娟娟．ＨＰＬＣ法测定不同产地制马钱子中士
的宁和马钱子碱的含量［Ｊ］．现代中药研究与实践，２０１０，２４
（１）：５７－５９．
［收稿日期］２０１２－０１－０６
·２０３１· 中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第１６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ａｕｇ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．１６