全 文 ：2.7 稳定性试验:吸取新配制的供试品溶液(批号
20071016)1份 ,分别于 0 、2 、4 、6 、8 、10 、12 h 进样 ,
测定 6-姜酚 、6-姜醇的峰面积 ,结果其 RSD分别为
1.56%、1.41%,表明供试品溶液在 12 h内稳定 。
2.8 回收率试验:分别精密吸取装量差异项下的批
号 20071016本品约 20 mL ,平行 5份 ,精密加入含
6-姜酚 1.498 mg/mL ,6-姜醇 498 μg/mL 的混合对
照品储备液 5.0 mL ,制备供试品溶液 ,按上述色谱
条件进行 HPLC 测定 ,计算回收率 ,结果 6-姜酚的
平均回收率为 99.82%, RSD为 1.40%;6-姜醇的平
均回收率为 100.30%, RSD为 1.44%。
2.9 样品测定:取不同批号的小半夏汤制备供试品
溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液各 10 μL 进
样测定 ,以外标一点法计算质量浓度 ,结果见表 1 。
3 讨论
由于 6-姜酚 、6-姜醇在水中的溶解度很小 ,而在
醚中和醇中的溶解度较大。因此在制备供试品溶液
时 ,试验采用乙醚作为萃取溶剂 。萃取过程中发现 ,
用等量乙醚萃取两次即能将该两种成分提取完全。
表 1 小半夏汤中 6-姜酚 、6-姜醇的测定结果(n=3)
Table 1 Determination of 6-gingerol and 6-shogaol
in Xiaobanxia Decoction(n=3)
批号 6-姜酚/(mg·mL-1) 6-姜醇/(mg·mL -1)
20071016 0.372 1 0.122 5
20071018 0.403 2 0.119 3
20071022 0.356 8 0.126 5
目前对于小半夏汤中有效成分的研究不多。本
实验采用 HPLC 法对其中的主要活性物质 6-姜酚 、
6-姜醇进行测定 ,为全面研究小半夏汤提供参考 ,也
为中药复方研究做了一些初步的探索。
参考文献:
[ 1] 陈 多 ,吴春福 ,宁 卓 ,等.小半夏汤对小鼠小肠推进运动的
影响 [ J].中药药理与临床 , 2003 , 19(2):6-8.
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[ 3] Abdel-Aziz H , Windeck T , Ploch M , et al.M ode of act ion of
gin gerols and shogaols on 5-HT3 receptors:Binding studies ,
cat ion uptake by the receptor channel and cont ract ion of isola-
t ed guinea-pig ileum [ J]. E ur J P harmacol , 2006 , 530:
136-145.
HPLC法测定厚朴温中汤中山姜素 、和厚朴酚 、小豆蔻明和厚朴酚
唐 倩 ,石 珊 ,赵云丽 ,高晓霞 ,王新桃 ,于治国＊
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘 要:目的 建立同时测定厚朴温中汤中山姜素 、和厚朴酚 、小豆蔻明及厚朴酚的反相高效液相色谱法。方法
Scienhome C18柱(250 mm × 4.6 mm , 5 μm);流动相:甲醇-0.5 %醋酸水溶液(75∶25);体积流量:1.0 mL/ min;柱
温:25 ℃;检测波长:294 nm;进样量:10 μL , 按外标法计算。结果 在上述条件下 , 山姜素 、和厚朴酚 、小豆蔻明 、厚
朴酚分别在 1.14～ 22.8、0.9 ～ 18 、0.16 ～ 3.2 、1.9 ～ 38 μg/ m L 呈良好的线性关系 , 加样回收率分别为 97.7%～
100.3%、97.3%～ 98.7%、90.0%～ 100.0%、98.6%～ 99.3 %。结论 该方法简便 、快速 、准确 , 可作为厚朴温中
汤质量控制的有效方法。
关键词:厚朴温中汤;山姜素;和厚朴酚;小豆蔻明;厚朴酚;高效液相色谱
中图分类号:R286.02 文献标识码:A 文章编号:0253-2670(2009)10-1581-03
厚朴温中汤源于《内外伤辨惑论》 ,由厚朴 、陈
皮 、甘草 、茯苓 、草豆蔻 、木香 、干姜组成 ,温中行气 ,
燥湿除满 ,主治脾胃伤于寒湿 ,脘腹胀满或疼痛 ,不
思饮食 ,四肢倦怠等症 。方中君药厚朴具有下气除
满 、燥湿消痰功效 ,主要成分和厚朴酚与厚朴酚具有
镇痛抑菌 、抗炎 、抗肿瘤等广泛的药理作用[ 1 , 2] 。草
豆蔻燥湿健脾 、温胃止呕[ 5] ,主要成分小豆蔻明 、山
姜素能够抗菌 、止呕 、健脾[ 3 , 4] 。现代药理学研究表
明厚朴温中汤用于治疗胃肠痉挛 ,十二指肠溃疡 ,病
毒性肝炎等症具有明显疗效[ 5 , 6] 。目前有关其质量
控制方面研究报道较少 ,且定量指标仅限于厚朴[ 7] 。
本实验以和厚朴酚 、厚朴酚 、小豆蔻明和山姜素为指
标性成分进行了同时测定 ,可以更全面 、有效地控制
厚朴温中汤质量 。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津公司),包括 LC —
·1581·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
＊ 收稿日期:2008-12-19 作者简介:唐 倩(1981—),女 ,辽宁沈阳人 ,沈阳药科大学药物分析专业硕士研究生 ,主要从事中药复方的质量控制研究及药动学研究。 Tel:(024)23986295 E-mai l:t angqian8111@163.com＊通讯作者 于治国 Tel:(024)23986295 E-m ail:zhiguo-yu@163.com
10ATvp输液泵 , SPD—10Пvp 可变波长紫外检测
器;TA —130柱温箱(天津奥特赛恩斯仪器有限公
司);ANASTAR色谱数据处理系统。
甲醇(色谱纯),二次蒸馏水(自制),冰醋酸(分
析纯);山姜素(批号 762-9001)、小豆蔻明(批号
763-9001)、厚朴酚(批号 729-9204)、和厚朴酚(批号
0730-9204)对照品均购于中国药品生物制品检定
所;厚朴 、陈皮 、草豆蔻 、木香 、甘草 、茯苓 、干姜药材
均购于沈阳成大方圆连锁药店 ,经沈阳药科大学孙
启时教授鉴定为正品。
2 方法与结果
2.1 色谱条件:Scienhome C18柱(250 mm × 4.6
mm ,5 μm);流动相:甲醇-0.5%醋酸水溶液(75∶
25);体积流量:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;检测波
长:294 nm;进样量:10 μL 。
2.2 对照品储备液的制备:精密称取山姜素 、和厚
朴酚 、小豆蔻明 、厚朴酚对照品适量 ,加甲醇分别制
成质量浓度分别为 1.1 、0.75 、0.5 、1.4 μg/mL 的溶
液 ,即得对照品储备液 。
2.3 供试品溶液的制备:按厚朴温中汤处方量 1/6
精密称取厚朴(5 g)、陈皮(5 g)、甘草(2.5 g)、茯苓
(2.5 g)、草豆蔻(2.5 g)、木香(2.5 g)、干姜(0.3 g),
水煎 2 h ,煎煮两次 ,合并煎液 ,滤过浓缩 ,制成浸膏 。
取经 40 ℃干燥的厚朴温中汤浸膏粉末(过 80
目筛)约 0.5 g(相当于总药材 2 g),精密称定 ,置圆
底烧瓶中 ,精密加入甲醇溶液 25 mL ,回流提取 0.5
h ,放冷 ,称定质量 ,用甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,
0.45 μm 微孔滤膜滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.4 阴性溶液的制备:按厚朴温中汤处方量 1/6精
密称取全方中不含厚朴或草豆蔻的其他 6 味药材 ,
按供试品溶液的制备项下方法操作 ,制备阴性对照
溶液 。
2.5 标准曲线的制备:取对照品储备液适量 ,加甲
醇制成质量浓度为山姜素 0.114 μg/mL 、和厚朴酚
0.09μg/mL 、小豆蔻明0.016μg/mL 、厚朴酚 0.190
μg/mL 的对照品溶液。精密量取该溶液 0.1 、0.2 、
0.5 、1.0 、1.5 、2.0 mL ,置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀
释至刻度 ,摇匀 ,分别进样 10 μL , 测定峰面积值 。
以质量浓度(X)为横坐标 ,色谱峰面积(Y)为纵坐
标 , 绘制标准曲线 , 得山姜素回归方程为:Y =
2.27×104 X -419(r=0.999 3),和厚朴酚回归方
程为Y =1.79×104 X -272(r=0.999 1),小豆蔻明
回归方程为Y =3.79×104 X -414(r=0.999 8),厚
朴酚回归方程为 Y =1.19 ×104 X -494(r =
0.9992)。结果表明山姜素 、和厚朴酚 、小豆蔻明 、厚
朴酚分别在 1.14 ～ 22.8 、0.9 ～ 18 、0.16 ～ 3.2 、
1.9 ～ 38 μg/mL 呈良好的线性关系 。
2.6 专属性试验:取厚朴温中汤 、对照品 、缺厚朴和
草豆蔻阴性对照进样测定 ,结果其他药材并不干扰
该成分的测定 ,见图 1 。
t/min
1-山姜素 2-和厚朴酚 3-小豆蔻明 4-厚朴酚
1-alpinet in 2-honokiol 3-cardamonin 4-mag nolol
图 1 厚朴温中汤(A)、对照品(B)、缺厚朴阴性对照(C)和缺草豆蔻阴性对照(D)HPLC色谱图
Fig.1 HPLCChromatograms of Houpu Wenzhong Decoction(A), reference substances(B), negative sample
without Cortex Magnolia Of f icinalis(C), and sample without Semen Al pinie Katsumadai(D)
2.7 精密度试验:精密吸取同一供试品溶液(01
批)10 μL ,重复进样 6次 ,记录色谱图 ,测定峰面积 ,
计算 RSD ,结果山姜素 RSD 为 1.9%, 和厚朴酚
RSD为 1.1%, 小豆蔻明 RSD 为 1.3%, 厚朴酚
RSD分为 1.1%。
2.8 重现性试验:取同一批样品(01批)6份 ,制备
供试品溶液 ,测定有效成分的质量分数(按总药材
计),结果山姜素平均质量分数为 0.224 μg/mg ,和
厚朴酚平均质量分数为 0.145 μg/mg ,小豆蔻明平
均质量分数为 0.010 μg/mg ,厚朴酚平均质量分数
为 0.278μg/mg 。其 RSD均小于 2%。
2.9 稳定性试验:取新制备的同一份供试品(01
批)溶液 ,分别在室温放置 0 、1 、2 、4 、8 、12 h时进样 ,
记录色谱图 ,测定峰面积 ,计算 RSD ,结果得山姜素
RSD为 1.0%,和厚朴酚 RSD 为 1.8%,小豆蔻明
RSD为1.5%,厚朴酚 RSD为 1.9%,表明供试品溶
液在 12 h内稳定 。
2.10 加样回收率试验:称取 01 批样品 9份 ,每份
·1582· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
0.25 g ,精密称定 ,分别精密加入含山姜素 0.220
μg/mL 、和厚朴酚 0.150 μg/mL 、小豆蔻明 0.010
μg/mL 、厚朴酚 0.280 μg/mL 对照品溶液 0.5 、1.0 、
1.5 mL ,每个样品平行 3 份 ,制备供试品溶液。在
上述色谱条件下进行分析 ,计算山姜素 、和厚朴酚 、
小豆蔻明 、厚朴酚的质量分数 ,根据加入量计算回收
率 ,结果加样回收率分别为 97.7% ～ 100.3%、
97.3% ～ 98.7%、 90.0% ～ 100.0%、 98.6% ～
99.3%,RSD分别为 1.4%、1.5%、4.3%、0.8%。
2.11 样品测定:取3批厚朴温中汤浸膏样品 ,制备供
试品溶液 ,取供试品溶液 10μL 进样分析 ,按外标法计
算 ,得相当于每 1 g 总药材的厚朴温中汤中山姜素 、和
厚朴酚 、小豆蔻明 、厚朴酚的质量分数 ,结果见表 1。
表 1 厚朴温中汤中山姜素 、和厚朴酚 、小豆蔻明
与厚朴酚的测定结果(n=3)
Table 1 Determination of alpinetin , honokiol , cardamonin ,
and magnolol in Houpu Wenzhong Decoction(n=3)
批号 山姜素/(mg· g -1)
和厚朴酚/
(mg· g -1)
小豆蔻明/
(mg· g -1)
厚朴酚/
(mg· g -1)
01 0.224 0.145 0.010 0.278
02 0.226 0.143 0.012 0.286
03 0.230 0.148 0.009 0.290
3 讨论
3.1 流动相的选择:分别用甲醇-水 、甲醇-水-醋酸 、
乙腈-水 、乙腈-水-醋酸以不同的比例进行考察 ,结果
表明采用甲醇-水-醋酸系统所得色谱峰峰形良好 ,
保留时间适宜 ,可达到理想的分离度 。
3.2 检测波长的选择:厚朴酚与和厚朴酚的最大吸
收为 294 nm ,山姜素的最大吸收 286 nm ,小豆蔻明
的最大吸收为 346 nm ,在 294 nm 也有较灵敏的吸
收。因此选择 294 nm 可同时测定 4种成分。
3.3 柱温的选择:分别选择了 20 、25 、30 ℃柱温进
行比较 ,通过对比各种柱温的色谱图发现在 25℃的
柱温下有较好的峰形。所以选择了 25 ℃的柱温进
行 HPLC分析。
3.4 样品提取条件的选择:采用回流提取法 ,考察
了水 、不同体积分数的甲醇 、乙醇作为提取溶剂时 4
种成分的提取结果 ,发现以甲醇为提取溶剂时提取
率较高 ,分离效果较好 ,故采用甲醇为提取溶剂。考
察了超声法 、回流提取法 ,发现回流提取 0.5 h效果
较好 ,且操作简单 ,节省时间 ,故选择该提取方法。
参考文献:
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国药师 , 2007 , 10(5):438-440.
HPLC法测定安神颗粒中金丝桃苷和芦丁
兰 静＊
(天津市药品审评中心 ,天津 300070)
摘 要:目的 建立测定安神颗粒中金丝桃苷和芦丁的高效液相色谱法。方法 采用 Dima rk 十八烷基键合硅胶
色谱柱(200 mm×4.6 mm , 5 μm);柱温:40 ℃;流动相:甲醇-1%冰醋酸(28∶72);体积流量:1.0 mL/ min;检测波
长:359 nm;进样量:20 μL。结果 金丝桃苷和芦丁在 2.246 ～ 5.242 μg/m L和 2.110～ 4.922 μg/ m L与峰面积呈
良好的线性关系 , r分别为 0.999 9 和 0.999 8。平均回收率分别为 101.4%、99.9%。结论 用此法测定安神颗粒
中金丝桃苷和芦丁简单易行 , 结果准确。
关键词:安神颗粒;金丝桃苷;芦丁;高效液相色谱
中图分类号:R286.02 文献标识码:B 文章编号:0253-2670(2009)10-1583-03
在国外贯叶金丝桃的研究主要集中在抗抑郁作
用 。安神颗粒采用以贯叶金丝桃为主药。贯叶金丝
桃中含有黄酮类化合物 ,笔者拟采用亚硝酸钠 、硝酸
铝法测定总黄酮的量 ,但因干扰较大 ,在显色后 510
·1583·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
＊ 收稿日期:2008-12-20 作者简介:兰 静(1980—),女 ,天津人 ,主管药师 ,硕士 ,主要从事新药审评。 Tel:(022)60255283 E-mail:bluejing80@yahoo.com.cn