全 文 ：·1224· 中草焉ChineseTraditionalandHerbMDrugs第39卷第8期2008年8月
麻素作为一种新型的肝细胞保护药物，其抗肝癌作
用也受到人们的关注，日本东京大学石川隆俊研究
证实芝麻素能抑制前期肝癌病变。采用二乙基亚硝
胺对大鼠进行诱发肝癌试验，同时在癌细胞形成期、
生长期饲料中投入芝麻素，喂养大鼠17周，结果发
现食用芝麻素的大鼠癌症发病率降到对照组的
50％以下，且大鼠的体质量、肝脏质量均无变化[2]。
这一研究结果首次证实了芝麻素的抗癌功效。
本研究采用MTT法检测了芝麻素对体外培养
的肝癌H：：细胞的杀伤作用，结果表明8、16、32pg／
mL芝麻素在作用24h后即表现出抑制H：：细胞生
长的作用，48h后抑制作用更强，此3个剂量在两个
时间点对H：。细胞的杀伤作用均无显著差异。64、
128pg／mL芝麻素组在24、48h均未表现出抑制作
用。证实了较低质量浓度的芝麻素对H：：肝癌细胞
有较好的抑制作用。本研究还观察了芝麻素对H。：
肝癌荷瘤小鼠的抑癌作用以及对荷瘤小鼠白细胞的
影响，结果表明小剂量的芝麻素对H：：肝癌细胞的
生长有一定的抑制作用，小鼠瘤质量明显低于模型
组，但其作用不及传统抗癌药物环磷酰胺，较高剂量
芝麻素对肿瘤的抑制作用较小，但芝麻素对人体正常
免疫细胞(白细胞)的杀伤作用较环磷酰胺小。本实
验结果提示芝麻素有望成为治疗肿瘤的一种新药。
芝麻作为天然植物在我国资源丰富，但我国对
芝麻素的利用仅处于其保健作用，作为药物使用的
研究极少。目前芝麻素的提供纯度已高达99％，所
以芝麻素有可能成为一种新型的肝细胞保护药物，
其抑制肝癌细胞生长的机制有待研究和深入。
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咳喘灵对实验性哮喘模型豚鼠支气管肺泡灌洗液嗜酸性
粒细胞凋亡的影响
朱振刚，刘贵颖，乔亚珍
(天津中医药大学第一附属医院呼吸科，天津300193)
支气管哮喘是一种以嗜酸性粒细胞(EOS)浸
润为主，多种细胞(肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细
胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性
炎症性疾患[1]，无论是急性期还是缓解期，肺组织内
均有明显的EOS浸润。并与病情的严重程度相平
行。EOS释放的各种介质可发挥其炎症效应，并可
以在气道重塑中起一定作用。近年来，中药治疗哮喘
的实验研究日渐增多，但着眼点在支气管肺泡灌洗
液EOS的并不多。咳喘灵是本院多年临床经验积
累的院内制剂，已应用多年，临床疗效显著，多年的
临床观察未发现不良反应，临床治疗哮喘有效率达
86％。为进一步探讨咳喘灵的作用机制，本实验进行
了咳喘灵对实验性哮喘模型豚鼠支气管肺泡灌洗液
EOS凋亡的影响，从分子水平上阐明咳喘灵治疗哮
喘是通过诱导EOS凋亡实现的。
收藕日期：2008-01—17
1材料
1．1 主要试剂和仪器：强的松(天津氨基酸公司)
用生理盐水配成10％混悬液备用；卵白蛋白(华美
生物工程公司，批号990218)实验前用生理盐水配
成1％和10％的卵白蛋白溶液；EOS分离液、细胞
凋亡检测试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司；
PAl8067雾化器，美国；Leitz切片机，德国；
OlympusCH显微镜，日本；Olympus，VanoxPM—
lOAD摄影显微镜，日本；HPIAS一100病理图文分
析系统，同济医科大学千屏影像工程公司。
1．2咳喘灵制备：黄芩、地龙、当归、蝉衣、细辛、半
夏、五味子等，水提取，浓缩至含生药1、2、3g／L，本
院药厂自制。
2方法
按Barnes[2j和吕宝璋：13方法略加改良造模。豚
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1225·
鼠100只，随机取14只作为对照组。其余86只以
10％卵白蛋白溶液ip1mL致敏，而后以l％卵白
蛋白溶液雾化吸入，每天2次，每次lOmin或致出
现咳嗽、喘息、呼吸道梗阻等症状为止，连续3d。随
机取模型豚鼠1只处死，取右肺中叶组织，HE染色、
制片，光镜下观察，出现EOS浸润为造模成功。将
剩余85只豚鼠随机分为模型组，强的松(0．5g／
kg)组，咳喘灵低、中、高剂量(15、30、45g／kg)组，
每组17只。模型组每日ig生理盐水5mL，强的松
组每日iglO％强的松混悬液5mL，咳喘灵组每日
ig中药5mL，对照组不雾化，连续14d。最后1次激
发并用药后24h，用3％戊巴比妥钠1mLip处死
动物，气管插管，Hanks液灌洗，每次5mL，共6次，
计30mL。收集灌洗液离心制成细胞悬液。取右叶
肺组织用10％中性甲醛固定、石蜡包埋、HE制片、
染色。右肺中叶组织EOS以HE染色计数：细胞核
呈蓝色，细胞浆、红细胞及嗜伊红颗粒呈不同程度的
红色；细胞悬液凋亡EOS以免疫细胞化学法染色：
细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的
EOS。在400倍高倍镜下，各组随机选取lo个视
域，用HPIAS一1000彩色病理图文分析系统进行计
数分析。使用SPSS11．0统计软件进行统计学处
理。全部数据用z士s表示。
3结果
3．1对哮喘模型豚鼠支气管肺组织EOS计数的
影响：镜下可见经HE染色，EOS胞浆中的嗜伊红
颗粒被染成浅红色，模型组EOS多且染色较深；对
照组EOS少且染色较浅；咳喘灵组与强的松组
EOS多于对照组，但明显少于模型组，咳喘灵中、高
剂量组EOS少于强的松组。结果见表1。模型组、强
的松组及咳喘灵低剂量组EOS计数明显高于对照
组(P<0．05)；强的松组及咳喘灵中、高剂量组
EOS计数明显低于模型组(尸<0．05)；咳喘灵中、
高剂量组EOS计数略低于强的松组(P3．2 对哮喘模型豚鼠支气管一肺泡灌洗液凋亡
EOS计数的影响：镜下可见细胞核中有棕黄色颗粒
者为阳性细胞，即凋亡细胞，模型组凋亡细胞多且染
色较深，对照组凋亡的细胞少且染色较浅，咳喘灵组
较强的松组略多。结果见表1。模型组凋亡EOS计
数略高于对照组，但两组比较无显著差异(P>
0．05)；强的松组及咳喘灵中、高剂量组凋亡EOS
计数明显高于模型组及对照组，组间比较有显著差
异(P略高于强的松组，咳喘灵低剂量组凋亡EOS计数
低于强的松组(PEOS计数低于咳喘灵中、高剂量组(P<0．05)。
表1各组豚鼠支气管一肺组织EOS计数的比较
(；士s，n=10)
Table1 ComparisonofEOScountsinbroncha-lung
tissueandbronchoMveolarlavagefluid
ofguinea-pigamongroups(；±j，a=10)
删。。卷鬻7
EOS计数
支气管一肺组织 支气管一肺泡灌洗液
与对照组比较：。尸与强的松组比较：Ap<0．05
+P<0．05UScontrolgroup!△P▲P<0．05wprednisonegroup
3．3肺组织HE染色：对照组肺及支气管结构正
常，各级支气管上皮完整，肺泡间隔正常，少量炎细
胞浸润；模型组支气管管腔狭窄，管壁增厚，黏膜皱
襞增多，部分脱落；杯状细胞明显增加；气道壁大量
EOS浸润；肺泡间隔增宽，其中可见多量EOS；部分
肺泡腔变小，肺实变区扩大。强的松组支气管黏膜皱
襞增多，部分脱落，管壁轻度增厚，管腔轻度狭窄。咳
喘灵组支气管黏膜上皮轻度增厚，气道壁炎细胞浸
润较轻，肺泡间隔明显变薄，肺泡腔趋于正常，其间
有少量EOS浸润。结果见图1。
图1 哮喘模型豚鼠肺组织HE染色结果
Fig．1HEStainingoflungtissuesinasthmamodelguinea’pig
万方数据
·1226· 中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
3．4肺组织电镜观察：对照组肺毛细血管管腔较正
常，二型肺泡上皮细胞较少，肺泡膈有少量胶原纤
维，EOS少见。模型组可见EOS增加，分布在肺
泡毛细血管内、肺泡腔内或肺泡膈中；肺泡腔可见红
细胞、单核性吞噬细胞及血浆性物质；肺泡二型上皮
细胞体积较大，胞浆内板层小体较多(明显增生)；大
多数毛细血管管腔狭窄，有单核细胞、淋巴细胞、红
细胞堵塞；较大的血管有血小板聚集，其中可见较多
的EOS；肺泡膈可见较多的胶原纤维。强的松组可
见肺实质炎症细胞较多，主要是单核吞噬细胞；毛细
血管管腔狭窄，二型肺泡上皮细胞增生如模型组，血
管内和肺泡膈内EOS较多，肺泡膈胶原形成细胞
较多，同时可见毛细血管腔较扩张，腔内可见较多的
单核性吞噬细胞、血小板及红细胞。咳喘灵组可见肺
泡较松散，肺泡血管管腔通畅，其腔内血浆性物质中
散在红细胞；二型肺泡上皮细胞体积较小、数量较
少；在血管腔内及肺泡腔中可见嗜酸细胞，同时肺泡
腔内有EOS碎片以及颗粒释出。结果见图2。
图2 哮喘模型豚鼠肺组织电镜观察结果
Fig．2Electromicroscopeobservationoflungtissuesinasthmamodelguinea—pig
4讨论
4．1 EOS凋亡与支气管哮喘：大量炎性细胞对气
道黏膜浸润是气道炎症的特征，也是支气管哮喘(哮
喘)病机的核心；其中以EOS最为显著，最近发现
哮喘患者气道中EOS是中性粒细胞的50～100
倍口]，EOS所释放的炎症介质通过损伤气道上皮细
胞，导致纤毛功能降低、细胞丢失，引起气道高反应
性，目前普遍认为EOS是哮喘炎症中的主要致炎
细胞，EOS凋亡及其调控在哮喘发生、发展中起重
要作用。EOS作为介导哮哨气道炎症的根本特征，
其数量的减少有助于炎症消退。现代医学以糖皮质
激素为主的抗炎治疗，被认为是抑制哮喘反复气道
炎症的关键措施。皮质激素不仅可减少哮喘患者
EOS的趋化及黏附作用，亦可促进气道中EOS凋
亡，被巨噬细胞所消除。巨噬细胞靠近凋亡的EOS，
其胞浆内有嗜酸性物质，推测由于巨噬细胞对凋亡
的EOS的吞噬，可促进气道炎症的消退。
4．2 咳喘灵对哮喘模型豚鼠肺组织及支气管肺泡
灌洗液EOS凋亡的影响
4．2．1支气管肺组织中，咳喘灵组与强的松组均较
模型组豚鼠EOS显著减少(P<0．05)，可能的原
因：①外周血中EOS向气道内转移减少；②气道内
EOS分布至其他组织；③EOS发生坏死；④细胞凋
亡机制，被巨噬细胞所消除。但是如果仅是EOS从
外周血转移人气道的数量减少，难以完全解释已进
入气道内的EOS细胞数的减少，亦未证实EOS向
肝、脾、淋巴结及外周血中重新分布。细胞坏死虽可
部分解释细胞数的迅速减少，但其胞浆内毒性物质
的释放增多，气道炎症应不能见减轻，且有加重可
能。因此，可能为外周血中E0s向气道内转移减
少；EOS凋亡被巨噬细胞所消除。
4．2．2支气管一肺泡灌洗液中，咳喘灵组与强的松
组均较对照组及模型组EOS凋亡显著增多(P<
0．05)，模型组凋亡EOS略高于对照组，但无显著
差异(P>0．05)，咳喘灵组及强的松组凋亡EOS
明显高于对照组(P<0．05)，说明强的松与咳喘灵
对哮喘模型豚鼠支气管一肺泡灌洗液存在的EOS凋
亡不同于对照组和模型组的自然凋亡，同时证明咳
喘灵组与强的松组均较模型组豚鼠支气管一肺组织
EOS显著减少与细胞凋亡密切相关。咳喘灵中、高
剂量组作用明显，但无明显量效关系。
综上所述，咳喘灵治疗支气管哮喘的机制主要
是减少支气管EOS浸润，从而减少各种炎症介质
对组织的损害，而EOS浸润减少的主要原因是诱
导EOS凋亡，咳喘灵作用与强的松接近。
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万方数据
咳喘灵对实验性哮喘模型豚鼠支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细
胞凋亡的影响
作者： 朱振刚， 刘贵颖， 乔亚珍
作者单位： 天津中医药大学第一附属医院呼吸科,天津,300193
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(8)
被引用次数： 1次

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200808036.aspx