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卷柏有效部位对辐射损伤小鼠的保护作用①
郑晓珂1, 翟品芳1, 冯卫生1, 王继峰2, 牛建昭2
(11 河南中医学院, 河南 郑州　450008; 21 北京中医药大学, 北京　100029)
摘　要: 目的　观察卷柏有效部位对60Co2Χ射线所致小鼠辐射损伤的防护作用。方法　设正常组、模型组、雌激素
组和卷柏组; 除正常组外, 其他各组小鼠均接受 610 Gy 60Co2Χ射线全身照射 1 次; 各组小鼠分别于照射前 72、48、
24 h 和照射后即刻 ig 药物或蒸馏水; 照射后 6、12、24 h 立即分批断头处死小鼠, 观察卷柏有效部位对辐照小鼠胸
腺、脾脏指数及胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率的影响。结果　辐射损伤后, 受照射小鼠的胸腺、脾脏指数明显下降,
胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率明显升高; 卷柏有效部位可促进受照射小鼠胸腺脾脏指数的恢复, 并明显降低其胸
腺、脾脏和骨髓的细胞凋亡率。结论　卷柏有效部位对60Co2Χ射线所致小鼠辐射损伤有一定的防护作用。
关键词: 卷柏有效部位; 抗辐射; 细胞凋亡
中图分类号: R 286196　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0250- 03
　　卷柏为蕨类卷柏科卷柏属植物卷柏 S elag inel2
la tam a riscina (Beauv. ) Sp ring 的全草, 多年生草
本, 又名长生不死草、九死还魂草、石莲花等, 是传统
中药材。笔者在前期对其进行系统的化学成分研究
过程中, 在其正丁醇部位得到了黄酮[1 ]、木脂素[2 ]类
成分; 后经细胞活性筛选实验证明, 其水部位和正丁
醇部位确有较好的雌激素样作用[3 ]。另外, 现代药理
及临床研究也表明, 卷柏具有防癌治癌、抗炎、抗病
毒和增强机体免疫功能等作用[4 ]。本实验将卷柏水
部位作为其有效部位, 利用碘化丙啶 (P I) 单染的
方法, 通过观察其对辐照小鼠胸腺、脾脏和骨髓细胞
凋亡率的影响, 并结合辐照小鼠的胸腺、脾脏指数,
来探讨其辐射防护作用。
1　材料
111　动物: 昆明种小鼠 72 只, 雌雄各半, 体重
(20±2) g, 购自河南省动物实验中心。
112　药物与试剂: 尼尔雌醇片, 上海华联制药有限
公司生产。RN ase A、碘化丙啶 (P I) 购自 Sigm a 公
司; 乙醇为国产分析纯。
113　主要仪器: FA CS 流式细胞仪 (BD , 美国) ,
KDC—160HR 高速冷冻离心机, OL YM PU S 倒置
显微镜 (CKX41) , T hera tron 7802C 60Co2Χ射线照
射仪 (河南省肿瘤医院提供) ,W H—2 微型涡旋混
合仪, H ZS—H 水浴振荡器。
114　卷柏水部位的制备: 称取 2 kg 新鲜卷柏 (采
自河南省西峡县, 由河南中医学院生药学科董诚明
副教授鉴定) , 自来水冲洗干净, 用 10 倍量水煎煮
115 h, 滤过, 滤渣用 8 倍量水煎煮 1 h, 滤过, 合并两
次滤液, 低温减压浓缩得浸膏。再将浸膏用适量水溶
解, 依次用乙醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取, 将所剩水
部位低温减压浓缩、真空干燥, 得水部位干燥物 300
g (其中含多糖 24108% ) , 备用。
2　方法
211　分组、照射及给药: 将 72 只昆明种小鼠随机
分为正常组、模型组、雌激素 (阳性对照) 组和卷柏
组, 每组 18 只, 雌雄各半; 卷柏组和雌激素组分别
·052· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 2007205223
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30371775, 30510403202) ; 河南省新世纪优秀人才支持计划 (2006HAN CET 208)
作者简介: 郑晓珂 (1961—) , 女, 河南省郑州市人, 博士, 教授, 硕士生导师, 从事中药活性成分及作用机制研究。
E2m ail: zhengxk. 2006@yahoo. com. cn3 通讯作者　冯卫生　T el: (0371) 65575963　Fax: (0371) 65680011　E2m ail: fw sh@hactcm. edu. cn
ig 卷柏水部位浸膏溶液 (41909 gökg) 和尼尔雌醇
悬浊液 (14155 m gökg) , 正常组和模型组 ig 等体积
蒸馏水。除正常组外, 其他 3 组小鼠均接受 60Co2Χ
射线 610 Gy 全身照射 1 次, 剂量率为 01796 Gyö
m in。各组小鼠分别于照射前 72、48、24 h 和照射后
各 ig 药物或蒸馏水 1 次。
212　小鼠胸腺、脾脏指数的测定: 各组小鼠分别于
照射后 6、12、24 h 分批断头处死, 立即取出胸腺、脾
脏称质量, 计算胸腺、脾脏指数 (胸腺或脾脏指数=
胸腺或脾脏质量ö小鼠体重)。
213　胸腺、脾脏及骨髓单细胞悬液的制备: 分别于
照射后 6、12、24 h 分批断头处死小鼠, 立即取出胸
腺、脾脏和右侧股骨。用生理盐水漂洗胸腺和脾脏表
面血污, 用眼科镊在小平皿内充分研磨分别制成胸
腺、脾脏单细胞悬液。用 1 mL 注射器吸取 1 mL
PBS 将右侧股骨骨髓腔内细胞冲出, 反复抽吸, 制
成骨髓单细胞悬液。
214　胸腺、脾脏及骨髓细胞凋亡率检测: 将制备的
单细胞悬液 3 000 röm in 离心 2 m in, 弃上清, 弹匀
细胞后加入 70% 的冷乙醇固定, 涡旋仪混匀后
4 ℃ 放置 24 h。将固定的单细胞涡旋混匀后离心,
去除固定液, 弹匀细胞加入 PBS 洗涤。取总数为
115×106的单细胞悬液, 离心弃去上清, 弹匀细胞后
加入 RN ase A 37 ℃ 水浴作用 40 m in, 再加入 P I
染色, 避光 4 ℃ 放置 1 h, 上机检测细胞凋亡率。用
Cell quest 软件计数 1×104个细胞, 进行细胞凋亡
分析 (以亚 G1峰细胞为凋亡细胞, 计算凋亡率)。
215　统计学处理: 用 SPSS 1310 统计软件处理, 数
据用 x ±s 表示, 组间差异比较用单因素方差分析
(O ne2W ay ANOVA )。
3　结果
311　对受照射小鼠胸腺、脾脏指数的影响: 结果见
表 1。经 610 Gy 60Co2Χ射线照射后, 模型组小鼠的
胸腺和脾脏严重萎缩, 且随时间延长, 萎缩程度加
深; 卷柏有效部位可抑制这种萎缩, 并在 12 h 与模
型组相比, 差异非常显著 (P < 0101) , 脾脏指数与雌
激素组相比, 无统计学意义, 表明卷柏有效部位对受
辐照小鼠的胸腺和脾脏均有保护作用。
312　对受照射小鼠脾脏、骨髓细胞凋亡率的影响:
结果见表 2。辐照后, 模型组小鼠各时间点的脾脏和
骨髓细胞凋亡率与正常组相比均明显升高。卷柏有
效部位可明显抑制辐照造成的小鼠脾脏和骨髓细胞
凋亡率的升高, 且与模型组相比, 差异显著 (P <
0105)。另外随时间延长, 脾脏和骨髓的细胞凋亡率
逐渐降低, 表明脾脏和骨髓为急性辐射敏感器官, 而
卷柏水部位可以修复射线造成的小鼠脾脏和骨髓的
损伤。
313　对受照射小鼠胸腺细胞凋亡率的影响: 结果见
表 2。辐射后, 模型组小鼠各时间点的胸腺细胞凋亡
率与正常组相比均明显升高。卷柏有效部位可明显
抑制辐照造成的小鼠胸腺细胞凋亡率的升高, 且与
模型组相比, 差异非常显著 (P < 0101) ; 与雌激素组
表 1　受照射小鼠胸腺和脾脏指数的变化 (x±s, n= 6)
Table 1　Index changes of thymus and spleen in irrad iated m ice (x±s, n= 6)
组　别
剂量ö
(m g·kg- 1)
照射后 6 h
胸腺指数 (×10- 3) 脾脏指数 (×10- 3)
照射后 12 h
胸腺指数 (×10- 3) 脾脏指数 (×10- 3)
照射后 24 h
胸腺指数 (×10- 3) 脾脏指数 (×10- 3)
正常 - 5110±01383 3 6140±01423 3 - - - -
模型 - 3110±0118 3110±0127 2110±0121 2130±0131 1170±0115 1190±0110
雌激素 14155 4150±0142 3160±01483 3190±01633 3 2180±01223 2130±0119 2100±0126
卷柏 4 909 3140±0127△△ 3150±0131 3100±11333 3 △△ 3110±01693 3 2100±0108 2110±0124
　　　与模型组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101; 　与雌激素组比较: △△P < 0101
　　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs model group; △△P < 0101 vs estrogen group
表 2　受照射小鼠胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率的变化 (x±s, n= 6)
Table 2　Changes of apoptosis rate of thymus, spleen , and bone marrow in irrad iated m ice (x±s, n= 6)
组　别
剂量ö
(m g·kg- 1)
照射后 6 h 凋亡率ö%
胸腺 脾脏 骨髓
照射后 12 h 凋亡率ö%
胸腺 脾脏 骨髓
照射后 24 h 凋亡率ö%
胸腺 脾脏 骨髓
正常 - 0180±0117 1170±0129 2123±0149 - - - - - -
模型 - 55105±10145 29146±1181 23107±5115 59120±3167 14119±1153 24122±6170 60115±5155 6194±0156 13163±2164
雌激素 14155 38194±31553 3 12156±11893 3 14168±31033 3 44118±31073 3 9167±11753 3 11183±31883 3 28140±61113 3 5118±01813 7110±11423 3
卷柏 4 909 43128±01673 3 20104±21053 3 △△ 18120±11223 46198±11773 3 10107±21283 3 11145±21593 3 28138±21593 3 4163±01323 10128±1118
　　　与模型组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101; 　与雌激素组比较: △△P < 0101
　　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs model group; △△P < 0101 vs estrogen group
·152·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
相比, 差异不显著 (P > 0105)。另外在各时间段, 胸
腺的细胞凋亡率均高于脾脏和骨髓的细胞凋亡率至
少 1 倍; 且随时间延长胸腺细胞凋亡率逐渐升高, 表
明胸腺细胞对射线较为敏感, 且修复需要较长的
时间。
4　讨论
　　放射线可通过直接和间接作用, 损伤细胞
DNA、生物膜以及其他生物分子, 引起细胞周期紊
乱, 从而造成细胞坏死和凋亡[5～ 7 ] , 而免疫器官 (胸
腺和脾脏)和造血器官 (骨髓)对放射线又极为敏感,
故射线很容易加重机体免疫功能低下或紊乱, 使淋
巴细胞失去调节机体免疫的作用, 使造血干细胞失
去造血活性, 进而加速这些细胞的凋亡。
胸腺和脾脏作为参与免疫功能调节的重要免疫
器官, 是高辐射敏感的细胞群。一般情况下, 机体受
辐射后会引起胸腺、脾脏指数下降, 细胞凋亡增加,
机体免疫功能降低。本实验中辐照小鼠胸腺、脾脏指
数的急剧下降证明了这一点。卷柏组小鼠的胸腺和
脾脏指数高于模型组, 胸腺和脾脏细胞凋亡率明显
低于模型组, 表明卷柏有效部位能够显著抑制辐射
造成的小鼠胸腺、脾脏细胞的凋亡, 从而减轻照射损
伤小鼠胸腺、脾脏的萎缩, 即其对免疫器官有辐射防
护作用。卷柏有效部位可降低辐射小鼠骨髓细胞凋
亡率, 即卷柏有效部位对造血组织也具有辐射防护
作用。
综上所述, 卷柏有效部位即水部位具有抗辐射
作用, 其抗辐射作用的机制可能与其能抑制机体因
受辐照造成的正常免疫细胞凋亡, 提高机体免疫功
能和保护造血组织, 从而提高了小鼠因放疗的适应
性和对有害刺激的抵御能力有关[8 ] , 至于其具体的
机制有待进一步研究。
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知母总黄酮对溴酸钾诱发小鼠肝损伤的保护作用①
李满妹1, 江　涛1, 黄杰昌2, 姚新生1Ξ , 栗原博1Ξ
(11 暨南大学中药及天然药物研究所, 广东 广州　510632; 21 广州莱泰制药有限公司, 广东 广州　510635)
摘　要: 目的　研究知母总黄酮对溴酸钾 (KB rO 3) 诱发小鼠肝损伤的保护作用。方法　200 m gökg KB rO 3 ip 诱发
小鼠肝损伤模型, 分别测定小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶 (AL T )、NO、肝组织丙二醛 (M DA ) 水平、抗氧化能力指数
(ORA C)、谷胱甘肽 (GSH ) 及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH 2Px) 活性。结果　与模型组相比, 知母总黄酮可以明显
降低因 KB rO 3引起的小鼠血浆AL T 水平, 保护因 KB rO 3诱发的肝损伤。此外, 知母总黄酮有效地提高应激小鼠肝
组织匀浆的 ORA C、GSH 及 GSH 2Px 活性, 降低血浆中NO 及M DA 水平。结论　知母总黄酮对 KB rO 3诱发的小
鼠肝损伤具有一定的保护作用, 其作用机制可能部分来自于清除自由基和抑制脂质过氧化过程。
关键词: 知母; 总黄酮; 肝损伤; 氧化应激; KB rO 3
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0252- 04
　　知母为百合科植物知母A nem a rrhena asp hod e2
loid es Bunge 的干燥根茎, 知母中富含皂苷和黄酮
类化合物, 临床上用于清热泻火、生津润燥[1 ]。近年
来国内外对知母皂苷的药理活性已有一些研究报
道, 但有关知母总黄酮研究工作甚少。基于黄酮类化
合物的抗氧化活性, 本研究以溴酸钾 (KB rO 3) 诱发
·252· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 20072062053 通讯作者　姚新生　栗原博　T el: (020) 85221352　Fax: (020) 85225849　E2m ail: H iro sh i- Kurihara@ 163. com