全 文 ：3 讨论
银杏叶片每片含总黄酮 191 2 mg, 黄酮具有扩
张血管、降低胆固醇、解除平滑肌痉挛和松弛支气管
等作用[ 1] 。实验表明,银杏叶显著降低狗的心肌耗
氧量,显著降低狗的血压,对狗心率无影响 [ 2]。银杏
叶提取成分具有降低血清胆固醇作用, 对原发性高
血压有一定的降血压作用。综上所述, 银杏叶片治
疗冠心病的作用机制可能是扩张血管作用,增加心
肌供血;使血液黏滞性减低, 血流加速, 使脑和心肌
的供血增加, 降低心肌耗氧量,增加心肌的耐缺氧能
力;逐渐地使心肌缺血性损害 ) ) ) 缺血性的 ST-T
改变得到明显好转或完全恢复正常。
银杏叶治疗冠心病,对患者的胸痛、胸闷、心悸、
气急、头晕等症的总有效率高。银杏叶片对冠心病
者心电图 ST-T 改善的总有效率也较复方丹参滴丸
高。提示银杏叶片对减轻或消除冠心病患者的胸
痛、胸闷、气急等症有很好效果, 对抬高或恢复心电
图压低的 ST 段和/或倒置的 T 波有显著的疗效。
本研究结果同时表明,银杏叶片使血清 TC、LDL-C
下降, 使 HDL-C 升高。T C 和 T G 的降低及
HDL-C 的水平提高,可使动脉粥样硬化的斑块减少
和显著地降低心血管病的发病危险率和病死率 [ 3]。
银杏叶片治疗后,未见其他不良反应。
银杏叶片是一种治疗冠心病心绞痛的新药, 对
减轻或消除冠心病的胸痛、胸闷、气急、头晕等症状
疗效> 95%,是当前纠正缺血性 T 波改变较为理想
的药物之一。对冠心病并发高脂血症患者具有降低
TC、升高 HDL-C 的作用, 低毒或无毒、不良反应
少,使用方便,安全可靠。当前冠心病心绞痛的治疗
主要以冠脉内支架植入为主, 银杏叶片活血化瘀, 降
低心脏氧耗和改善供血, 但在改善已有冠脉狭窄方
面有待进一步研究。银杏叶片可以作为一种辅助治
疗药物,值得临床推广使用。
参考文献:
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金耳多糖对哮喘大鼠气道炎症反应的影响
蒋剑平1, 2 ,熊耀康2*
( 11 浙江中医药大学,浙江 杭州 310053; 21 浙江中医药大学附属第一医院, 浙江 杭州 310007)
摘 要: 目的 研究金耳多糖 ( T r emell a po ly saccharide, TP ) 对抗原诱导的大鼠过敏性气道炎症反应的影响。
方法 用卵白蛋白 ( OA ) 致敏大鼠, 10 d 后开始 ig 给予 TP 01 4、01 8、11 6 g / kg ,每天 1 次, 连续 10 d;大鼠致敏后
第 15天开始用 OA ( 10 g / L ,每天 1次) 攻击,连续 6 d,观察第 6 次 OA 攻击 24 h 后支气管肺泡灌洗液 ( BALF )
中炎症细胞的数量和支气管肺组织病理学改变情况,测定肺组织中白细胞介素-4 ( IL-4) 的量。结果 TP 能明显
降低 BALF 中炎症细胞总数及嗜酸性粒细胞数,能抑制肺组织中炎症细胞特别是嗜酸性粒细胞的浸润, 减轻组织
水肿及上皮损伤等气道炎症反应; 降低哮喘大鼠肺组织中 IL-4 的量。结论 T P 对大鼠过敏性气道炎症具有抑制
作用, 其作用机制与 IL-4 释放减少有关。
关键词: 金耳多糖; 哮喘; 气道炎症; 嗜酸性粒细胞
中图分类号: R2861 43 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2009) 10-1623-04
气道炎症是支气管哮喘的基本特性, 主要表现
为支气管中炎症细胞增加,细支气管和小血管周围
水肿及大量嗜酸性粒细胞 ( eosinophil, EOS) 渗出
浸润等。金耳 Tr emella mesenter ica ( Schaef f. )
Retz. ex Fr. 为银耳科银耳属真菌金耳的子实体。
金耳性温中带寒,味甘,能化痰、止咳、定喘、调气、平
肝肠,主治肺热、痰多、感冒咳嗽、气喘等 [ 1] , 民间多
用于哮喘和气管炎的治疗。现代研究表明, 金耳多
#1623#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
* 收稿日期: 2009-03-20 基金项目:国家教育部重点资助项目 ( 02066)作者简介:蒋剑平( 1977 ) ) ,男,浙江绍兴人,博士研究生,从事中药活性物质的研究。
Tel/ Fax : ( 0571) 86611022 E-mail: jiangjp77@ 163. com
* 通讯作者 熊耀康 Tel: ( 0571) 86613533 E-m ail: xiongyaokang@ tom . com
糖 ( T remel la poly saccharide, T P) 具有免疫调
节[ 2] 、调血脂[ 3] 、降血糖[ 4]等作用,然而,国内外关于
T P 对气道炎症作用方面至今未见报道。本实验采
用卵白蛋白致敏大鼠, ig 给予 T P, 观察其对大鼠气
道炎症的作用,并对其作用机制进行初步探讨, 为进
一步研究 TP 治疗哮喘和气管炎的机制, 开发金耳
的新药资源提供药理学依据。
1 材料与方法
11 1 动物: SD 大鼠 72只,体质量 ( 160 ? 10) g ,雌
雄各半,浙江中医药大学实验动物中心提供。
11 2 药品与试剂:金耳药材采自浙江省缙云县, 经
浙江中医药大学药学院资源鉴定教研室熊耀康教授
鉴定为银耳科银耳属真菌金耳的子实体; 金耳多糖
(多糖质量分数 83% ) ,金耳药材经水提醇沉法提取
纯化制备金耳多糖溶液, 由最佳喷雾干燥工艺[ 5] 制
得金耳多糖喷干粉,临用时配成质量浓度为 20、40、
80 g/ L 溶液; 卵白蛋白 ( OA, V 级, 美国 Sigma 公
司,批号 122k7044) ; 地塞米松片 ( DXM, 浙江仙居
制药有限公司,批号 030844) ;白细胞介素-4 ( IL-4)
酶联免疫吸附 ( ELISA) 测定试剂盒 ( U cy T ech
Bio sciences, 荷兰,批号 020103) ; 其他试剂均为国
产分析纯。
11 3 仪器: 冷冻离心机 ( Eppendorf Centr ifuge
5804R, 德国) ,显微镜 ( Olympus BX51, 日本) ,酶标
仪 ( BIOT ek ELX800,美国) , 超声雾化器 ( 980 ) A
型,上海医械有限公司) , 水平离心机 ( LHZ5 ) 2
型,北京医用离心机厂) , 控时调速式高速分散器
( GF ) 1 型,江苏麒麟医用仪器厂)。
11 4 大鼠哮喘模型的制备:参照 Sant ing 等[ 6]的方
法,将 OA 2 mg 溶于氢氧化铝 (自制) 中,配制成
01 2% OA 溶液。每只大鼠两后足掌、前足掌各注
射 01 05 mL, 两后腿、两腹股沟、腰、背各 sc 0. 05
mL, 同时 ip 0. 5 mL,每只大鼠共注射 11 0 mL 进行
致敏。对照组仅用 10% 氢氧化铝凝胶同法注射。
致敏第 15 天抗原攻击, 将致敏大鼠置于 20 cm @
30 cm @ 50 cm 有机玻璃密闭容器内,雾化吸入器雾
化 1% OA (用生理盐水配制) 30 m in,雾量 2 mL/
m in,以激发哮喘, 对照组用生理盐水代替进行攻
击,连续攻击 6 d 后供实验用。
11 5 分组、给药剂量及方式: 72 只大鼠,随机分成6
组,每组 12只,即模型组 (生理盐水 20 mL/ kg ) ,对
照组 (不致敏, 生理盐水 20 mL/ kg ) , TP 3 个剂量
组 ( 20、40、80 g/ L TP 溶液, 20 mL/ kg ) , 致敏第 10
天均 ig 给药,每天 1次,共 10 d; DXM 组 ( 01 5 mg/
kg ) 于第 11、13、15、17、19 天 ig 给药,共 5次。
11 6 样本的采集与制备:于抗原末次攻击后 24 h,
大鼠 ip 30 g/ L 戊巴比妥 ( 11 5 mL/ kg) 进行麻醉,
即刻打开胸腔, 用丝线结扎左肺两叶, 行气管插管,
用 5% 小牛血清生理盐水溶液 10 mL 分 2次进行
支气管肺泡灌洗,每次 5 mL,回收支气管肺泡灌洗
液 ( br onchoalveolar lavage fluid, BALF) , 回收率
80%。取 BALF 40 LL,加白细胞计数液 360 LL, 用
细胞计数板计数白细胞总数。剩余 BALF 以 1 000
r/ min 离心 10 min, 弃去上清液, 取 40 LL 沉淀涂
片,甲醇固定 3 min 后, 瑞氏-姬姆萨染色,计数 200
个细胞,进行白细胞分类计数。
11 7 肺组织病理切片及细胞因子 IL-4 测定: 右肺
上叶用 100 g/ L 福尔马林溶液固定后做病理切片,
苏木素-伊红染色后观察肺组织炎症变化情况。右
肺下叶,用生理盐水洗净后立即存放于液氮中保存,
测定细胞因子 IL-4 时取出,加入 Hanks 液, 低温下
匀浆,在 4 e 以下 3 000 r/ min 离心 10 m in, 取上
清液按 ELISA 法测定 IL-4 量。
11 8 统计学方法:用 SPSS 111 0 统计实验数据, 数
据用 x ? s 表示, 应用 Student-Newman-Keuals 进
行检验。
2 结果
21 1 TP 对哮喘大鼠肺气道内炎症细胞聚集的抑
制作用: 致敏大鼠气雾吸入 OA 24 h 后, 模型组
BALF 中白细胞总数明显增多,与对照组比较差异
有显著性 ( P< 01 001) ,说明抗原攻击致敏大鼠形成
的大鼠哮喘模型成立。T P 01 8、11 6 g / kg 组与模型
组比较, BA LF 中白细胞总数均显著降低 ( P <
01 05、01 01) ,阳性药物 DXM 组 BA LF 中白细胞总
数与模型组相比也显著降低 ( P< 01 001)。模型组
BALF 中 EOS 比例明显升高,与对照组比较有显著
差异 ( P< 01 001)。T P 01 4 g/ kg 组 BALF 中 EOS
与模型组差异不明显 ( P> 01 05) , TP 01 8、11 6 g / kg
组及 DXM 组 EOS 比例明显低于模型组 ( P<
01 01、01 001) ,结果见表 1。
21 2 TP 对哮喘大鼠肺气道炎症细胞浸润的抑制
作用:高倍镜下观察到对照组大鼠肺部正常, 而模型
组大鼠肺部可见明显过敏性炎症,细支气管和小血
管的管壁增厚、炎症细胞浸润、EOS 数量明显增多、
气道上皮损伤、周围组织疏松水肿。DXM 组肺部
基本正常,有时可见轻度炎症细胞浸润。T P 01 4 g/
kg 组大鼠肺部炎症较为明显, 但随着剂量的增加,
炎症明显减轻 , 特别是T P11 6 g / kg组50% 大鼠
#1624# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
表 1 TP 对 OA 致敏大鼠抗原攻击后 BALF
中炎症细胞的影响 ( x? s)
Table 1 Ef fect of TP on inflammatory cell in BALF of OA-
sensitized rats after antigen challenge ( x? s)
组别
剂量/
( g# kg- 1)
动物/
只
白细胞总数/
(108 # L- 1)
EOS/
%
中性粒细胞/
%
淋巴细胞 /
%
对照 - 10 20 ? 3 21 0 ? 111 219 ? 116 9511 ? 213
模型 - 12 41 ? 9# # # 331 7? 81 6# # # 2119 ? 715# # # 4413 ? 518# # #
T P 01 4 11 35 ? 3 271 4? 51 6 2613 ? 515 4611 ? 813
01 8 11 32 ? 4* 221 9? 41 6* * 2717 ? 711 4913 ? 819
11 6 11 29 ? 4* * 121 1? 41 7* * * 2311 ? 815 6416 ? 916* * *
DXM 01 0005 10 25 ? 5* * * 41 9? 31 3* * * 2912 ? 615* 6518 ? 811* * *
与对照组比较: # # # P< 01 001
与模型组比较: * P < 01 05 * * P < 01 01 * * * P < 01 001
# # # P< 01 001 v s cont rol group
* P < 01 05 * * P< 01 01 * * * P< 01001 v s m odel group
肺部表现正常,其余仅见轻度炎症细胞浸润 (图1)。
根据 U nderw ood 等[ 7]对致敏动物抗原攻击后肺组
织炎症病理学分级评分标准做半定量分析, 无论是
总评分,还是单项指标,模型组大鼠支气管肺组织病
理学切片检查评分都明显高于对照组; DXM 组的
评分显著低于模型组 ( P< 01 01) , T P 给药组病理
学评分也随着剂量的升高而降低; 但低剂量 T P 01 4
g/ kg 组与模型组比较无显著性差异 ( P> 01 05) , 而
TP 01 8、11 6 g / kg 组与模型组比较有显著差异
( P< 01 01) ,结果见表 2。
21 3 T P 对大鼠肺组织 IL-4 量的影响: 与对照组
比较,模型组肺组织中 IL-4 质量浓度明显增高
( P< 01 001) ; TP 01 4 g/ kg 组大鼠肺组织中 IL-4 的
质量浓度与模型组比较, 有所降低,但无显著性差异
图 1 TP 对大鼠支气管肺组织炎症细胞浸润的影响 (HE染色)
Fig. 1 Ef fect of TP on inflammatory cells infiltration of bronchus pulmonary tissue in rats ( HE stain)
表 2 TP 对哮喘大鼠肺组织病理组织学分级评分的影响
(x ? s)
Table 2 Ef fect of TP on score of pathological and histolo-
gical grade in lung tissue of asthmatic rats ( x? s)
组别 剂量/
( g # kg- 1)
动物/
只
细支气管和小血管
的 EOS增加
组织水肿 气道上皮
损伤
对照 - 7 01 3 ? 01 2 01 1 ? 01 1 01 1 ? 01 2
模型 - 9 31 2 ? 11 6 # # 51 2 ? 01 5# # 41 9 ? 01 4# #
TP 01 4 9 21 0 ? 01 9 # # 31 3 ? 01 4# # 31 1 ? 01 3# #
01 8 10 11 5 ? 01 8 * * 01 8 ? 01 6* * 01 7 ? 01 3* *
11 6 11 01 9 ? 01 6 * * 01 6 ? 01 6* * 01 5 ? 01 5* *
DXM 01 0005 11 01 4 ? 01 3 * * 01 1 ? 01 3* * 01 1 ? 01 3* *
与对照组比较: # # P< 01 01; 与模型组比较: * * P < 01 01
# # P < 01 01 v s cont rol group; * * P < 01 01 v s model group
( P> 01 05) ; T P 01 8、11 6 g/ kg 组大鼠肺组织中的
IL-4 的质量浓度明显低于模型组 ( P < 01 05、
01 01) , DXM 组肺组织中 IL-4质量浓度与模型组相
比显著降低 ( P< 01 001) ,结果见图 2。
3 讨论
目前临床治疗哮喘首选药物为免疫抑制剂糖皮
质激素,但长时间使用会发生许多不良反应。因此,
人们设法采用其他抗炎药物来替代激素治疗。中医
与对照组比较: # # # P < 01 001
与模型组比较: * P< 01 05 * * P< 01 01 * * * P< 01 001
# # # P < 01001 v s cont rol grou p
* P< 01 05 * * P < 01 01 * * * P < 01 001 v s model grou p
图 2 TP 对哮喘大鼠肺组织 IL-4 量的影响
( x? s, n= 10)
Fig. 2 Effect of TP on content of IL-4 in lung tissue
of asthmatic rats ( x? s, n= 10)
药治疗的整体调治、扶正固本,在治疗疑难杂症上具
有独特的优势。明代李时珍5本草纲目6记载, 金耳
治/癖饮积聚,腹痛金疮0,金耳在民间多用于治疗气
管炎与哮喘。该药用资源主要分布于我国云贵高
原,从 20世纪 80年代开始,我国进行了金耳野生资
#1625#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
源调查及驯化栽培研究。目前, 在云南、浙江等地已
研究成功人工规模栽培金耳的技术[ 8] , 为深入开发
利用这一珍贵资源提供了物质保证。
本实验以 OA 为抗原, 以 Al( OH ) 3凝胶为佐
剂, sc和 ip 致敏,再气雾吸入OA 进行攻击,建立大
鼠哮喘模型。结果表明:模型大鼠 BALF 中白细胞
总数比正常大鼠明显增加, EOS 数量也显著提高,
肺部病理学切片检查可见 EOS 浸润, 与文献报道
一致[ 9~ 11] ,这些结果提示本实验中采用的造模方法
是成功的。
临床研究表明, 哮喘病人血、痰及 BALF 中
EOS 数量增加, EOS 阳离子蛋白量上升,提示 EOS
及其分泌的物质对气道组织有明显的损伤作用, 与
哮喘严重程度及气道高反应性密切相关。近来又观
察到 EOS 无论在体内或体外都能产生促炎症细胞
因子。由于 EOS 在支气管哮喘中的重要作用, 采
用 BALF 和肺组织病理切片组织学观察,是否能减
少哮喘时 EOS 的增多及其对支气管肺组织的浸润
是评价药物对过敏性哮喘支气管肺组织炎症作用的
重要标志。
本实验结果表明, T P ig 给药能抑制大鼠哮喘
时 BALF 中 EOS 的增多,而且呈现出剂量依赖性。
支气管肺组织的病理切片的结果显示, 低剂量的
T P 即可明显改善哮喘大鼠肺组织的炎症表现, 虽
然低剂量的 T P 的疗效比 DXM 要差,但是高剂量
T P 组大鼠支气管肺组织病理切片的效果与 DXM
的效果类似, 说明 ig 给予一定剂量的 TP 确实可以
改善哮喘的组织病理变化。
目前认为,代表 Th2 水平的细胞因子 IL-4 可
以诱发 T 细胞增殖, 使未定型 T 细胞分化为 T h2
细胞,促进 B 细胞增殖生长并诱导 B细胞分化为浆
细胞,进而产生 IgE、IgG4, 参与哮喘变态反应性炎
症的发生和发展 [ 12]。实验结果显示中、高剂量的
TP 可以明显降低肺组织中 IL-4 的量, 提示 TP 可
以抑制气道炎症, 改善症状, 可能部分通过抑制 T
淋巴细胞活化, 减少细胞因子 IL-4 的释放来实现,
这可能是 T P 抗哮喘大鼠气道炎症的机制之一。
综上所述, ig 给予 01 8、11 6 g/ kg T P 可以减轻
和抑制哮喘大鼠的气道炎症, 对大鼠变态反应性哮
喘模型的迟发相有明显的保护作用。
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5药物流行病学杂志62010年征订启事
5药物流行病学杂志6由中国药学会主办, 是此边缘学科在我国乃至亚洲第一本公开发行的专业期刊。1992 年创刊, 为科
技部中国科技论文统计源期刊、中国科技核心期刊, 且为万方数据、中国期刊网等国内许多大型检索数据库和5国际药学文
摘6收录 ,为医药科研、生产、经营、使用和管理等方面全面提供对药物有效性、安全性、经济性、适用性的评价信息。本刊设有
/ 述评0/ 论著0/临床用药与药效评价0/ 药物警戒与合理用药0/ 药物利用与药物经济学0/ 综述 # 论坛0和/ 病例报道# 病案分
析0/ 资料# 消息0等栏目。应广大读者、作者的要求, 本刊自 2010 年起更改刊期为月刊,大 16 开, 56 页。每期定价 8 元, 全年
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#1626# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月