全 文 ：·1330· 中年喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9,el
裹3洗脱溶媒用量对紫丁香苷和刺五加总苷洗脱率的影响
Table3 Effectofeluentvolumeonelutingrate
ofspringin
芒100
需90
鞫
龋
l 2 3 4 5 6 7 8 9 10
树脂使用次数
鞫、～
景50打了知了再莉
图2 以紫丁香苷(A)和刺五加总苷(B)为指标D·101
树脂再生周期的考察
Fig．2EvaluationofregenerationperiodofD一101
resintakingabsorptiverateofspringin(A)
andtotale eutheroside(B)勰indexes
2．10验证试验：取刺五加200g粉碎成粗粉，加水
4L煎煮两次，每次3h，合并煎液，滤过，滤液浓缩
成浸膏20g，加水溶解，离心。沉淀再以适量水加热
溶解，离心；合并两次上清液，加水至1000mL，上
D一101型大孔吸附树脂柱，水洗至糖的反应为基本
阴性后，以5倍柱体积75％乙醇洗脱大孔树脂柱，
合并洗脱液回收乙醇，干燥，测定浸膏中紫丁香苷和
刺五加总苷，计算保留率，结果见表4，可见药材中
表4工艺重复试验白=3)
Table4 Resultsofrepetitiveest(厅=3)
有效成分的量与纯化产物的对比，富集比约为3：1。
3讨论
大孔树脂吸附容量考察时，初采用预吸附1h，
过柱重吸附1次，收集洗脱液，计算上样液与流出液
中紫丁香苷或者刺五加总苷之差，确定大孔树脂的
吸附容量，后因与工业生产中动态洗脱相脱离，故采
用动态吸附曲线的考察确定吸附容量。
树脂的再生或被吸附溶质的解吸通常可以用溶
剂来实现。乙醇是常用的再生剂。采用80％左右的
含水醇、酮或含有酸、碱的含水醇、酮进行洗涤，再生
效果也很好，某些低极性的有机杂质吸附过牢不能
洗除时，可采用低极性溶剂进行再生。
参考文献：
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正交试验优选九节龙皂苷I的提取工艺研究
孙立炜1．-，王晓娟1-，孙文基2，顾宜1，宋娟娜2，王 荣1
(1．第四军医大学口腔医院药剂科，陕西西安710032；2．西北大学陕西省生物医药重点实验室，陕西西安710069)
摘 要：目的 筛选九节龙中九节龙皂苷I的最佳提取工艺，并建立HPLC—ELSD法对九节龙皂苷l的测定方法。
方法采用L。(3‘)正交试验，以九节龙皂苷I提取率和干浸膏得率为检测指标。HPLC—ELSD色谱条件：Phe—
nomenexC18(250mm×4．6mm，5肛m)l流动相为甲醇一水(75：25)I体积流量：1．0mL／min；检测器漂移管温度：
73．8℃；载气体积流量：2．0L／rain。结果最佳提取工艺为75％乙醇，第1次8倍量提取4h，第2次6倍量提取
3h。九节龙皂苷I在0．88～4．42pg范围内线性关系良好(r=0．9999)；样品平均回收率为100．37％，RSD为
1．88％(n一6)。结论建立的正交试验优选九节龙的提取方法可行，采用的HPLC—ELSD法测定九节龙皂苷I的方
收稿日期：2007—12-16
作者简介：孙立炜(1983～)，男，北京人，西北大学2005级中药学在读研究生，研究方向为药用植物结构鉴定与提取分离。
E—mail：nodoubtkaraian@126．corn
-通讯作者王晓娟Tel(029)84776189E—mail：WXJYH231@fmmu．edu．cn
万方数据
中革菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1331·
法可用于九节龙皂苷I的质量控制。
关键词：九节龙；九节龙皂苷I；正交试验IHPLC—ELSD法
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1330—04
九节龙系紫金牛科紫金牛属植物九节龙Ardis～
8apusillaA．DC．的全草，广泛分布于我国四川I、贵
州、湖南、广西等地，具有清热解毒，消炎止痛的功
效。九节龙的药用有效部位为九节龙皂苷n]，主要含
于根茎部分。九节龙皂苷具有显著提高免疫力和良
好的抗肿瘤功效，其中九节龙皂苷I为九节龙皂苷
的主要成分，可作为九节龙皂苷的标识性物质，并且
九节龙皂苷I同样具备良好的抗肿瘤功效[2一]，具有
开发为抗肿瘤药物的良好前景。本实验通过正交试
验以九节龙皂苷I的提取率和干浸膏得率为检测指
标，考察乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间和提取
次数对九节龙中九节龙皂苷I的影响，筛选九节龙
皂苷提取工艺，并建立了HPLC—ELSD法测定九节
龙皂苷I的测定方法。
1仪器与材料
HitachiL一7110色谱仪，AlltechELSD
2000ES型蒸发光散射检测器(美国Alltech公司)，
T2000P色谱工作站，ELSD2000蒸发光散射检测
器控制软件，BTl25D型电子天平(德国Sartorius
公司)。
九节龙皂苷I对照品由第四军医大学口腔医院
药剂科提供，质量分数为99％。甲醇为色谱纯，水为
二次重蒸馏水，无水乙醇、95％乙醇均为分析纯。
九节龙购于四川夹江县，为2006年8月花期时
采摘收集，由四川I大学药学院沈联得教授和四川省
中药学校邬家林教授鉴定为九节龙A．pusillaA．
DC．的根茎，去枝叶后，洗净，阴干，粗粉备用。
2方法与结果
2．1 因素水平的确定：影响九节龙中九节龙皂苷l
提取的因素主要为乙醇体积分数、溶剂用量、提取时
间和提取次数，因此选择作为因素，并选择相关的水
平，见表1。
2．2提取工艺流程：将九节龙粗粉精密称取9份，
表1因素与水平
Table1 Factorsandlevels
每份100g，按1--9进行试验编号，按照正交试验要
求进行操作。合并滤液，减压回流至合适体积，转移
至已干燥至恒重的蒸发皿上挥干溶剂，制得稠膏，每
份稠膏称定质量，冷藏保存备用。
2．3干浸膏得率的计算：精密称取一定量稠膏，于
105℃干燥至恒重，称定质量，可得稠膏的含水量，
计算药材的干浸膏得率。
2．4九节龙皂苷I的HPLC法测定
2．4．1色谱条件：PhenomenexC18柱(250mm×
4．6mlTl，5弘m)；流动相为甲醇一水(75：25)；体积流
量：1．0mL／min；检测器漂移管温度：73．8℃；载气
体积流量：2．0L／rain。九节龙皂苷I保留时间为
5．6min，理论板数不低于3000。见图1。JJUB
·一九节龙皂百I
-一ardipusillosideI
圈l九节龙皂苷l对照品(A)和九节龙提取物(B)的
HPLC图
Fig．1HPLCChromatogramofardipusi¨osideI
referencesubstance(A)andA．pusilla
extract(B)
2．4．2供试品溶液的制备：每份稠膏平行称取粗粉
测定含水量，每份稠膏称取相同的量用甲醇溶解，定
容于10mL量瓶中摇匀放置，取上清液过0．45pm
微孔滤膜滤过，即得。
2．4．3线性关系考察：精密称取九节龙皂苷I对照
品4．42mg置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释
至刻度。分别进样2、4、6、8、10pL，得到相应的峰面
积值。以峰面积的常用对数为纵坐标，进样量的常用
对数为横坐标，绘制标准曲线，得其回归方程为y=
1．8313X+12．758，，．=0．9999。可知九节龙皂苷
I在0．88---4．42／zg与峰面积具有良好的线性关系。
2．4．4精密度试验：精密吸取九节龙皂苷l对照品
溶液重复进样6次，每次进样6pL，测定九节龙皂
苷I的峰面积，计算得其RSD值为1．13％。
2．4．5稳定性试验：精密吸取同一九节龙提取物供
试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10h进样测定，进样
量为10弘L，测定峰面积，计算，结果九节龙皂苷I
万方数据
·1332· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
峰面积的RSD值为1．61％。结果表明供试品溶液
在10h内稳定性良好。
2．4．6重现性试验：精密称取同一批九节龙提取物
样品适量，6份，制备供试品溶液，进样10肛L，测
定九节龙皂苷I峰面积，计算，九节龙提取物中九节
龙皂苷I的平均质量分数为11．86％，RSD为
1．54％。
2．4．7 加样回收率试验：称取含九节龙皂苷I
8．34％的同一样品，约21mg，6份，分别加入
0．442mg／mL九节龙皂苷I对照品溶液4mL，制
备供试品溶液，进样测定，计算，结果平均回收率为
100．37％，RSD为1．88％。
2．4．8测定：精密称取9份正交试验样品，制备供
试品溶液，进样测定。每批样品测定2次，按回归
方程计算，结果以2次测定的平均值作为测定值，
计算九节龙皂苷I的提取率。
2．5正交试验设计与结果：采用L。(34)正交试验，
以九节龙皂苷I提取率和干浸膏得率为检测指标，
结果见表2。方差分析见表3和4。
表2正交试验结果和分析
Table2 Resultsandanalysisoforthogonaltest
试验号A B C D黼甍1赢
1 l 1 1 1 1．31 12．53
2 l 2 2 2 1．62 15．58
3 1 3 3 3 1．90 17．47
4 2 1 2 3 1．80 14．08
5 2 2 3 1 1．60 13．43
6 Z 3 1 2 1．63 14．12
7 3 1 3 2 1．02 9．63
8 3 2 1 3 1．01 9．55
9 3 3 2 1 0．78 8．45
九节Kl4．83 4．13 3．95 3．69
龙皂K25．03 4．23 4．20 4．27
苷，K3 2．81 4．31 4．52 4．71
R 0．81 0．09 0．30 0．49
干浸K145．5736．2336．1934．40
膏得K241．6338．5638．1139．33
率 K327．6340．0440．5341．10
R 17．943．81 4．34 6．70
极差分析表明，4个因素对九节龙皂苷I影响
的顺序为：以九节龙皂苷I提取率为检测指标：A>
D>C>B；以干浸膏得率为检测指标：A>D>C>
B，即依次是乙醇体积分数，提取次数，提取时间，乙
醇用量液固比(倍)。
’对上述两个指标进行方差分析表明，因素A对
表3以九节龙皂苷I提取率为指标的方差分析
Table3 Varianceanalysisba edonextractra e
OfardipusiIlosjdeasindex
Fo．05(2，2)=19．00Fo 1(2，2)=99．00
表4 以干浸膏得率为指标的方差分析
Table4 Varianceanalysisba edondry
extractra easindex
F0．os(2，2)一19．00Fo01(2，Z)一99．00
提取工艺有显著影响，而因素B、C、D各水平之间差
异不显著，以九节龙皂苷I提取率为检测指标：可以
见到A因素二水平(85％乙醇)的九节龙皂苷I提
取率最高，A因素一水平(75％乙醇)的九节龙皂苷
I提取率略低，而A因素三水平(95％乙醇)的九节
龙皂苷I提取率明显降低，B、C、D因素均为三水平
九节龙皂苷I提取率最大；以干浸膏得率为检测指
标：可见A因素一水平的干浸膏得率最高，并且干
浸膏得率随着乙醇体积分数增加而减小，B、C、D因
素均为三水平干浸膏得率最大。
综合以上因素，考虑到实际生产上85％乙醇成
本较高、挥发快的特点，且实际上与九节龙皂苷I提
取率于75％乙醇提取时差异不大，故确定乙醇体积
分数为75％，进一步试验优化提取次数。
2．6正交优化的补充试验：根据正交试验的优化结
果，以正交最优试验组合，进行了补充试验，取药材
粗粉100g，每次提取的滤液分别收集后，制成供试
品溶液，测定并计算相对提取率和干浸膏得率，结果
见表5。
由正交试验可知最优组合为A。B3C。D。，但考虑
到工业生产上操作简便、省时、经济，故进行补充试
验，以求得到最适于生产的正交组合。以正交试验3
号的药材中九节龙皂苷I提取率1．90％为100％，
九节龙皂苷l的相对转移率前两次总和已达到
59％，九节龙皂苷I提取率为1．13％，提取3、4次占
相对转移率不到4％，九节龙皂苷I提取率仅为
万方数据
中革黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1333·
表5正交试验的补充试验
Table5 Supplymentalresultsoforthogonaltest
0．06％，从干浸膏得率来看，前两次的干浸膏得率以
占总量的87％。因此考虑到生产上的可行性，正交
试验的最优组合为75％乙醇，第1次8倍量提取4
h，第2次6倍量提取3h。
2．7工艺验证试验：按照工艺优化条件制备3批样
品，结果九节龙皂苷I提取率为1．15％(RSD为
1．41％)，干浸膏得率为17．24％(RSD为2．66％)，
说明该工艺条件下，九节龙皂苷I提取率和干浸膏
得率均较高，从经济角度考虑在实际生产上比较节
省成本，且生产效率较高。
3讨论
对于九节龙皂苷I测定方面，通常用比色皿法，
由于九节龙皂苷I的结构特殊，没有生色基，需加入
显色剂方可进行，一般加入6％香草醛一冰醋酸0．2
mL，高氯酸0．8mL作为显色剂；或使用HPLC—UV
法利用末端吸收，检测波长为205nm。本实验对九
节龙皂苷I的测定采用高效液相色谱法，利用蒸发
光散射检测器进行测定。该方法结果准确，弥补了九
节龙皂苷I因缺少生色基无共轭结构对检测带来的
不便。
考虑到九节龙皂苷有效成分包含有脂溶性成
分，故选择适当体积分数的乙醇作为溶剂，因其主要
成分为九节龙皂苷l，故确定九节龙皂苷I为本工艺
研究的指标成分。
实验中比较了多种色谱柱，不同流动相体系，最
终选择了甲醇一水作为流动相，结果分离效果良好，
继而进一步试验选择了不同流动相配比的甲醇一水
分离九节龙皂苷1的效果，包括纯甲醇、90％甲醇、
80％甲醇、70％甲醇、60％甲醇。结果显示，80％甲醇
出峰时间过早，达不到完全分离的效果，而70％甲
醇出峰时间拖后造成时间和试剂上的浪费，故而最
终选定75％甲醇为流动相，考虑到九节龙皂苷I热
稳定性良好，结构稳定等因素，直接运用蒸发光检测
器的标准推荐参数即可得到良好的分离效果，所以
色谱柱条件最终确定为75％甲醇，检测器漂移管温
度：73．8℃；载气体积流量：2．0L／rain。
参考文献：
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[J]．中药材，2006，29(9)：951．953．
RP—HPLC法测定竹叶提取物中异荭草素
吴巍，程秀凤
(天津市尖峰天然产物研究开发有限公司．天津 300457)
摘 要：目的建立竹叶提取物中异荭草素的RP—HPLC的检测方法。方法色谱条件为KromasilC。。分析柱(250
mm×4．6nlm，5弘m)，柱温：30℃，波长：330rlm，流动相为乙脯．0．1％磷酸，梯度洗脱。结果异荭草素峰面积与质
量浓度成良好线性关系，其线性范围为25．65～256．5tJg／mL，r一0．99998。回收率为100．45％，RSD为0．36％
(行=6)．结论该法可使竹叶提取物中异荭草素得到良好分离，结果准确、重现性好。
关键词：竹叶提取物；异荭草素；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1333一03
收藕日期：2008—01—24
作者简介：吴 巍(197卜)，男，天津人，工程师，长期从事葡萄耔、苹果等提取物检测工作．
Tel(022)66237090—8023E—mail：tjnkwuwei@hotmail．corn
万方数据
正交试验优选九节龙皂苷Ⅰ的提取工艺研究
作者： 孙立炜， 王晓娟， 孙文基， 顾宜， 宋娟娜， 王荣
作者单位： 孙立炜(第四军医大学口腔医院药剂科,陕西,西安,710032;西北大学,陕西省生物医药重点实
验室,陕西,西安,710069)， 王晓娟,顾宜,王荣(第四军医大学口腔医院药剂科,陕西,西安
,710032)， 孙文基,宋娟娜(西北大学,陕西省生物医药重点实验室,陕西,西安,710069)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(9)

参考文献(3条)
1.张清华;王晓娟;缪振春 川产九节龙皂苷的化学研究 1993(09)
2.陶小军;曹永孝 九节龙皂苷Ⅰ的抗肿瘤作用和免疫调节作用[期刊论文]-中国药理学通报 2005(09)
3.王晓娟;高迎春 九节龙皂苷对荷瘤小鼠放化疗的增效作用[期刊论文]-中药材 2006(09)

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的影响[期刊论文]-实用医药杂志2009,26(4)
2. 陶小军.龙静雯.贺建宇.姚鸿萍.刘静.曹永孝.TAO Xiao-jun.LONG Jing-wen.He Jian-yu.YAO Hong-ping.LIU
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3. 缪振春.冯锐.周永新.李光玉.张清华.MIAO Zhen-Chun.FENG Rui.ZHOU Yong-Xin.Li Guan-Yi.ZHANG Qing-Hua
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