全 文 ：·278· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
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RP—HPLC法测定何首乌和夜交藤中二苯乙烯苷
和葸醌类成分
苏建，袁志芳，张兰桐+，王春英，吕春艳，刘伟娜
(河北医科大学药学院药物分析教研室，河北石家庄050017)
何首乌RadixPdygoniMultiflori为蓼科植物
何首乌PolygonummultiflorumThunb．的干燥块
根。性微温，味苦、甘、涩。《中国药典>>2005年版一部
记载具有润肠通便之功效。何首乌中的主要有效成
分之一为蒽醌类口](anthraquinone，AQ)，包括大黄
素(emodin，EM)、大黄酸(rhein)、大黄酚(chryso—
phanol，CH)、大黄素甲醚(physcion，PH)等；何首乌
中另一种有效成分为二苯乙烯苷(stilbene
glycoside)类[2]。夜交藤CaulisetFoliumPolygoni
Multiflori，YJT叉名首乌藤，为蓼科植物何首乌的
干燥藤茎或带叶藤茎，有养心、安神、通络、祛风止痛
等功效口]，用于治疗失眠、劳伤、多汗、血虚身痛。何
首乌与夜交藤虽为同一植物的不同部位，但功效却
不尽相同。二苯乙烯苷和蒽醌类衍生物均为何首乌
中的有效成分。《中国药典>>2005年版中记载了何首
乌中二苯乙烯苷的测定，但并未记载关于何首乌中
蒽醌类成分的测定方法。本实验采用RP—HPLC法
分别测定了何首乌、制首乌和夜交藤中二苯乙烯苷
和蒽醌类衍生物的量，并且对3种药材中二苯乙烯
苷和蒽醌类衍生物的量进行了比较，为探讨其药效
物质基础与作用机制，开发新的药物制剂提供了
依据。
1仪器与试药
Waters高效液相色谱仪，Waters色谱工作站。
大黄素(批号：0756—9908)、大黄酸(批号：0757—
200206)、大黄酚(批号：110796—200309)、大黄素甲
醚(批号：758—9803)、二苯乙烯苷(批号：0844—
200003)对照品购于中国药品生物制品检定所，甲
醇、乙腈均为迪马公司的色谱纯，水为自制重蒸水。
何首乌、制首乌和夜交藤购于河北省安国市药
材公司、河北乐仁堂药店和石家庄市饮片厂，经河北
医科大学药学院聂凤提教授鉴定。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：Dikma(迪马)C，。柱(250
mm×4．61Tim，5t-tm)；流动相：甲醇一乙腈一1％甲酸
(15：10：75)，检测波长为320BITI，柱温30℃，体
积流量1．0mL／min。理论板数按二苯乙烯苷计算
不低于2500，分离度大于2L．0。流动相：甲醇一乙腈一
1％磷酸(70：10：15)，检测波长为254nm，柱温30
℃，体积流量1．0mL／min。理论板数按大黄素、大
黄酸、大黄酚和大黄素甲醚计算不低于2500，分离
度大于2．0
2．2对照品溶液的制备：精密称取二苯乙烯苷、大
黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，分
别加甲醇溶解并稀释制成160、90．0、100、100、100
lag／mL的溶液，即得。
2．3二苯乙烯苷定量用供试品溶液的制备：取何首
乌、制首乌细粉0．2g，或者夜交藤细粉1．0g，精密
称定，加50％乙醇25mL，称定质量，超声处理15
min，放冷，再次称定质量，用50％乙醇补足减失的
质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2．4蒽醌类成分定量用供试品溶液的制备[4巧]：将
收稿日期：2006—04—14
作者简介：苏建(1980一)，男，河北秦皇岛人，河北医科大学2004级硕士研究生。
*通讯作者张兰桐Tel：(0311)86266419Fax：(03 1)86052053E—mail：zhanglangtong@263．net
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·279·
何首乌、制首乌和夜交藤样品粉碎，取其细粉0．5g，
精密称定，加入70％甲醇25mL，超声提取30min
后，药渣用70％甲醇5mL洗2次，合并提取液，蒸
干，于残渣加入水10mL和2mol／L硫酸使之成酸
性，用氯仿提取3次，每次10mL，合并氯仿提取液，
蒸干，加入甲醇5mL，即得游离型蒽醌类成分定量
用供试品溶液；对水层再加入浓硫酸0．6mL和氯
仿10mL，在70～80℃水浴中回流1h水解，冷却
后，取氯仿层，水层再用氯仿提取2次，每次30mL，
将全部提取液合并，蒸干，加入甲醇5mL，即得结合
型蒽醌类成分定量用供试品溶液。
2．5标准曲线的制备
2．5．1二苯乙烯苷标准曲线的制备：取160／．tg／mL
二苯乙烯苷对照品溶液，分别稀释成质量浓度为
20．0、40．0、80．0、120．0、160．0gg／mL的溶液，分
别吸取20肛L，注入液相色谱仪，记录相应的峰面积
值。以峰面积对质量浓度进行线性回归，得其回归方
程为Y一7．17×107X一1．00×105，r一0．9996，结
果表明二苯乙烯苷在20．0～160．0肛g／mL与峰面
积呈良好的线性关系。
2．5．2蒽醌类标准曲线的制备：取2．2项下的对照
品溶液，大黄素对照品稀释成0．6、3．0、15．0、30．0、
60．0、90．0p．g／mL，大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚对
照品稀释成0．5、2．0、8．0、20．0、40．0、100．0#g／
mL，分别吸取20弘L，注入液相色谱仪，记录相应的
峰面积。以峰面积对质量浓度进行线性回归，得其回
归方程，大黄素：Y一53470X一36480，r一
0．9991，大黄酸：Y一86420X一150360，，．一
0．9993，大黄酚：Y一148295X一70207，r一
0．9997，大黄素甲醚：Y一35061X一38742，r一
0．9996。结果表明，大黄素在0．6～90．0p．g／mL和
大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚在0．5～100．0ptg／mL
与峰面积呈良好的线性关系。
2．6稳定性试验：取供试品溶液于0、1、2、4、6、8、
12、24h测定二苯乙烯苷的峰面积，RSD值为2．6％。
结果表明，供试品溶液在24h内稳定；同法测定大黄
素和大黄素甲醚的峰面积，RSD值分别为1．2％和
1．6％。结果表明，供试品溶液在24h内稳定。
2．7精密度试验：取二苯乙烯苷对照品溶液连续进
样5次，测定其峰面积，RSD值为1．6％；取大黄酸、
大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品溶液连续进样
5次，测定峰面积，计算得其RSD值分别为1．3％、
1．1％、0．87％和1．7％。
2．8重现性试验：取同一批药材细粉5份，精密称
定，制备供试品溶液，连续进样5次，测定二苯乙烯
苷的质量分数，RSD值为1．33％；供试品溶液连续
进样5次，测定大黄素和大黄素甲醚的质量分数，
RSD值分别为1．04％和1．42％。
2．9 回收率试验：取何首乌药材细粉6份，每份约
0．1g，精密称定，精密加入二苯乙烯苷对照品溶液
160p．g／mL，制备供试品溶液，测定峰面积，计算平均
回收率为101．9％(RSD为1．81％)；精密称定何首
乌药材细粉6份，每份约0．25g，精密加入蒽醌类4
种对照品溶液适量(分别相当于含50pg)，制备供试
品溶液，测定峰面积，计算平均回收率。结果大黄酸：
98．7％(RSD为4．1％，胛一6)、大黄素：99．1％(RSD
为1．1％，咒一6)、大黄酚：99．7％(RSD为2．2％，，z一
6)和大黄素甲醚：100．2％(RSD为0．7％，孢一6)。
2．10样品测定
2．10．1二苯乙烯苷的测定：分别精密称取5个不
同批次何首乌、制首乌和夜交藤药材细粉适量，制备
供试品溶液，进样测定，每个样品测定3次，以均值
作为结果，色谱图见图1，结果见表1。
t|min
1一二苯乙烯苷
1-stilbeneglycoside
图1二苯乙烯苷对照品(A)、何首乌(B)、制首乌(c)和
夜交藤(D)HPLC色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsfstilbeneglycoside
referencesubstance(A)，RadixPolygon
Multiflori(B)，RadixPolygonMultiflori
Preparata(C)，andCaulisetFolium
PolygoniMultiflori(D)
2．10．2蒽醌类成分的测定：分别精密称定5个不
同批次何首乌、制首乌和夜交藤样品适量，制备供试
品溶液，进样测定，每批样品测定3次，以3次测定
结果的平均值作为测定值，测得何首乌、制首乌和夜
交藤中蒽醌类成分的量，实验结果见表1，色谱图见
图2。
3讨论
3．1何首乌和夜交藤虽然来源于同一植物，但功能
主治有显著的差异。何首乌苦、甘、涩、温，归肝、心、
肾经。具有解毒，消痈，润肠通便的功效，用于瘰疠疮
万方数据
·280· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
表1样品分析结果(厅一5)
Table1 Resultsofsampleanalysis(一5)
刖k
C
旷r矿赫0旷r矿榭0旷矿F商j确旷r扩赫0旷r可西商蓟旷r矿渤旷r矿西丽o
t／min
A一对照品B一何首乌(游离型)C一制首乌(游离型)D一夜交藤(游离型)E一何首乌(结合型)F一制首乌(结合型)G一夜交藤(结合型)
1一大黄酸 2一大黄素 3一大黄酚 4一大黄素甲醚
A—referencesubstancesofanthraquinoneB—RadixPolygoniMultiflori(freeanth aquinone)C—RadixPolygoniMultiflori
Preparata(freeanthraquinone)D—CaulisetFoliumPolygoniMultiflori(freeanth aquinone)E—RadixPolygoniMultiflori(gly—
cosideanthraquinone)F—RadixPolygoniMultifloriPreparata(glycosideanthraquinone)G—CaulisetFoliumPolygoniMulti-
flori(glycosideanthraquinone)1一rhein2-emodin3-chrysophanol4-physcion
图2蒽醌类对照品与样品色谱图
Fig．2HPLCChromatogramsofanthraquinonereferencesubstancesandsamples
痈，风疹瘙痒，肠燥便秘，高血脂。而夜交藤甘、平，归 是何首乌与制首乌中游离型大黄素的量高于游离型
心、肝经。具有养血安神，祛风通络的功效，用于失眠 大黄素甲醚的量，比值为1．57～1．95，结合型大黄
多梦，血虚身痛，风湿痹痛，外治皮肤瘙痒。参考有关 素的量高于结合型大黄素甲醚的量，何首乌比值在
文献，何首乌和夜交藤所含有的成分大致相似，但成 1．65左右，制首乌比值在4．10～4．74。
分的量有很大的不同，其量的差异可能是何首乌和 3．4在优选样品中二苯乙烯苷提取方法时，考察了
夜交藤功效不同的主要原因之一。 甲醇、乙醇、50％乙醇的超声提取方法，在对不同溶
3．2本实验建立了RP—HPLC法分别测定何首乌、剂超声提取5、15、30、60min进行了考察，结果表
制首乌和夜交藤中二苯乙烯苷及蒽醌成分的分析方 明，50％乙醇超声提取15min可将待测成分提取完
法，并分别对其量进行了比较。何首乌与制首乌中二 全。因此，用50％乙醇超声提取15min为最佳提取
苯乙烯苷和总蒽醌的量较高，但夜交藤中总蒽醌与 方法。
二苯乙烯苷的比值较高，夜交藤为0．4以上，而何首
乌与制首乌中二者的比值分别为0．06～0．09和
0．05～0．07。
3．3夜交藤中游离型大黄素的量低于游离型大黄
素甲醚的量，比值在0．33左右，结合型大黄素的量
高于结合型大黄素甲醚的量，比值在1．74左右，但
3．5 在流动相的选择中，比较了甲醇一水、乙腈一水、
甲醇一1％甲酸、甲醇～乙腈一1％甲酸、甲醇一乙腈一1％
磷酸(60：20：20)、甲醇一乙腈一1％磷酸(70：10：
15)、甲醇一乙腈一1％磷酸(75：5：20)7种不同的流
动相系统，最终确定在甲醇一乙腈一1％甲酸(15：
lO：75)为流动相系统下，二苯乙烯苷分离效果良
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·281·
好，且保留时间恰当；在甲醇一乙腈一1％磷酸(70：
10：15)为流动相系统下，蒽醌类分离效果良好，且
保留时间恰当。
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(上海交通大学药学院，上海 200240)
五味子为木兰科植物五味子Schisandrachi—
nensis(Turcz．)Baill．的干燥成熟果实，习称北五味
子。其味酸、甘，性温，人肺、心、肾经，收敛固涩、益气
生津、补肾宁心。用于久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿
频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、短气脉虚、内热
口渴。五味子含多种有效成分如木脂素、有机酸、挥
发油、多糖，木脂素类成分可滋补肝肾、治疗肝炎[1]，
柠檬酸、苹果酸等多种有机酸具有祛痰和镇咳作
用瞳’3]，木脂素类成分检测方法较多，但尚无有机酸
测定的文献报道。本实验采用直接电位滴定的方法
测定五味子中总有机酸的量，避免酸碱滴定法中有
机酸提取液较深颜色对滴定终点的干扰。
1仪器与试药
雷磁pHS一25数显pH计(上海志威电器)，
85—2型恒温磁力搅拌器(上海志威电器)，E一
201一C一9型pH复合电极(上海罗素科技公司)。
五味子(上海华宇药业有限公司3份，标为上海华宇
1～3号；安徽亳州药材市场3份，标为毫州药市1～
3号；成都荷花池药材市场3份，标为荷花池药市
1～30)，经上海交通大学药学院王梦月讲师鉴定，
符合《中国药典))2005年版一部的要求。邻苯二甲酸
氢钾(基准级)、柠檬酸(质量数99．5％，上海润捷化
学试剂有限公司，批号20000219)，其他试剂试药均
为分析纯。
2方法与结果
2．1 对照品溶液的配制：称取柠檬酸适量置100
mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成
12．8mg／mL的对照品溶液，备用。
2．2供试品溶液的制备：取五味子50目粉，精密加
入30倍去CO。蒸馏水和少许沸石至烧瓶中，精密
称质量，煎煮提40min，放冷，加水补足质量，抽滤，
弃去初滤液，收集续滤液待测。
2．3测定方法：精密移取一定量待测溶液置于250
mL锥形瓶中，置电磁搅拌器上，将连接有pH计的
pH复合电极插入液面下，放入搅拌子，开启搅拌，
照《中国药典}2005年版附录ⅧA电位滴定法[4]，用
0．099mol／I。NaOH滴定液滴定。采用ORIGIN
软件绘制一阶导数曲线(△E／△y)一y。一阶导数曲线
最高点对应的体积即为滴定终点体积。将结果用空
白实验校正，总游离有机酸量按柠檬酸折算，以占生
药材的质量分数表示。每1mLNaOH滴定液
(0．099mol／L)相当于6．397mg的柠檬酸(尬一
192．1)。
2．4柠檬酸对照品突跃范围试验：准确吸取柠檬酸
对照品溶液10mL，加水20mI。，按前述测定方法用
0．1025mol／LNaOH滴定液测定，将结果用空白
实验校正。柠檬酸对照品的一阶导数滴定曲线见图
1一A。
由图可见：曲线的极大值对应体积就是滴定终
点，消耗碱量为17．7mL。由公式(V碱一3C酸V酸／
收稿日期：2006—06—12
基金项目：上海市科委中药现代化专项(05DZl9733)
作者简介：吴建兵(1978一)，男，湖北省武汉市人，上海交通大学在读硕士研究生，主要从事中药物质基础研究和新药开发。
*通讯作者邱明丰Tel＆Fax：(021)62932292E—mail：mfqiu@sjtu．edu．ca
万方数据
RP-HPLC法测定何首乌和夜交藤中二苯乙烯苷和蒽醌类成分
作者： 苏建， 袁志芳， 张兰桐， 王春英， 吕春艳， 刘伟娜
作者单位： 河北医科大学药学院,药物分析教研室,河北,石家庄,050017
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)
被引用次数： 12次

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200702044.aspx