全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·519·
制剂与质量
穴贴定喘膏体外透皮试验用皮肤的比较研究
祖 强，狄留庆。，赵晓莉，黄耀洲，于燕燕，毕肖林
(南京中医药大学，江苏南京210029)
摘 要：目的 对穴贴定喘膏体外透皮试验用皮肤做比较研究，选择适宜亲脂性成分的实验皮肤。方法 应用
TP一5型智能透皮扩散仪，以穴贴定喘膏中木兰脂素为考察指标，采用HPLC法测定，比较了不同种皮肤对穴贴定
喘膏经皮渗透参数的影响。结果 累积渗透量：硝酸纤维素>裸鼠>小鼠>壳聚糖>大鼠>兔>乳猪>蛇蜕；时
滞：蛇蜕>壳聚糖>硝酸纤维素>乳猪>兔>大鼠>小鼠>裸鼠。结论硝酸纤维素膜可作为适宜亲脂性成分木
兰脂素体外经皮渗透实验的理想皮肤模型。
关键词：穴贴定喘膏；木兰脂素；皮肤；经皮渗透
中图分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)04—0519—03
ComparisonofskiforpercutaneouspermeabilityofXuetieDingchuanPlasterinvitro
ZUQiang，DILiu—qing，ZHAOXiao—li，HUANGYao—zhou，YUYan—yan，BIXiao—lin
(NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210029，China)
Abstract：ObjectiveTos udytheCOmparisonofthe．skinsforpercutaneouspermeabilityofXuetie
DingchuanPl sterinvitroandmakearegulationofpre——disposalmethodwhichevaluatespercutanousper、—
meabilitypreliminarilyfothexcisedkininvitro．MethodsApplyingTP一5automaticdiffusionappa—
ratustodetermineagnolininXuetieDingchuanPlasterbyHPLC，comparisonoftheparametersofpe cu～
taneouspermeabilityind fferentskins，lagtimeandamountofXuetieDingchuanPl sterp meability．
ResultsCumulativepermeationam unt：pyroxylin>hairlessmouse>mouse>chitosan>rat>
rabbit>porket>snakeslough；Lagtime：snakeslough>chitosan>pyroxylin>porker>rabbit>
rat>mouse>hairlessmouse．ConclusionThecellulosenitratefiltercanberegardedasagoodmodel
forthestudyofpercutanouspermeabilityof ipophilicmagnolin．
Keywords：XuetieDingchuanPlaster；magnolin；skin；percutaneousperm ability
穴贴定喘膏是江苏省名老中医许济群教授在清
代张璐“白芥子涂法”基础上研制而成，主要组成为
辛夷、细辛、白芥子等，每贴含膏体0．48g，具有透达
经络，逐饮豁痰，利气平喘的功效，对哮喘实证有一
定作用。在药物体外经皮渗透研究中，不同皮肤的性
质、状态差异对药物透皮扩散影响很大，体外实验选
择皮肤模型时，应尽量选择实验重现性好，个体差异
小，对亲水性和亲脂性药物均适用的一类皮肤模型。
本实验选用穴贴定喘膏，应用TP一5型智能透皮扩
散仪，以木兰脂素为考察指标，比较了不同种皮肤对
穴贴定喘膏经皮渗透参数的影响，以选择适宜亲脂
性成分的实验皮肤，为中药经皮给药制剂经皮扩散
试验评价体系的建立奠定基础。
1实验材料
Agilent1100高效液相色谱仪(惠普公司)；
YXJ一2台式高速离心机(金坛市金城国胜仪器厂)；
FAll04电子分析天平(上海精密科学仪器有限公
司)；TP一5型智能透皮扩散仪(中国药科大学研制)。
20～25g的小鼠，180～220g的大鼠，2～2．15
kg的大白兔，雌雄不拘，南京中医药大学动物房提
供；8～10周龄的裸鼠，购自中国药品生物制品检定
所实验动物中心；新鲜蛇蜕购自安徽毫州药材市场；
乳猪购自南京郊区农户。
木兰脂素对照品购自中国药品生物制品检定
所，批号882—200001；医药壳聚糖购自青岛海普生
物技术有限公司，相对分子质量3．5×105～4．0×
105；硝酸纤维素膜(o．22弘m)购自上海大沪科学仪
器有限公司；穴贴定喘膏(自制，每贴含膏体0．48
收稿日期：2006—06—29
基金项目：江苏省教育厅高新技术产业化项目(JH02--103)；南京中医药大学青年基金课题(05XZR09)
作者筒分：．祖强(1975一)，男，江苏南京人，助理工程师，药剂学专业2004级在读硕士，主要从事中药经皮给药系统合理性评价研究。
*通讯作者狄留庆Tel：(025)86798226E—mail：diliuqin9928@163．corn
万方数据
·520· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月
g)。乙腈(色谱纯，美国Tedia公司)；重蒸水(自制)；
其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1动物皮肤的预处理【1]：取蛇蜕，剪成3．5cm×
3．5cm。其余实验动物脱颈椎处死，剪去背部的毛
(裸鼠除外)，剥取3．5cm×3．5cm的皮。除净皮下
脂肪组织和结缔组织。将上述皮肤于0．9％生理盐
水反复洗净，10％甘油浸润后，置塑封袋中一20℃
冷冻保存，实验前自然解冻并在生理盐水中浸泡30
min，保存时间不超过1周。
2．2壳聚糖膜的制备：称取壳聚糖2g，置100mL
量瓶中，用0．1mol／L醋酸溶液定容至100mL。转
移至烧杯中置100℃水浴上加热搅拌使之全溶。抽
滤，超声脱气30min。将脱气后的滤液等分体积置
于直径5．8cm的玻璃培养皿内，置50℃恒温烘箱
中6h，使之烘干，然后置于0．1mol／L氢氧化钠溶
液中浸泡24h，成膜(膜厚约45～50弘m)脱落后，用
重蒸水反复洗涤，置塑封袋中一20℃冷冻保存，实
验前自然解冻并在生理盐水中浸泡30min，于1周
内进行实验。
2．3硝酸纤维素膜的制备R]：将直径47mm硝酸
纤维素膜浸渍在肉豆蔻酸异丙酯中20min(膜重增
加到150％～160％)，取出，允许大的液体滴掉，再
把膜夹到两张吸墨水纸中轻轻挤压，去除表面多余
的液体，备用。
2．4木兰脂素的HPLC法测定口1
2．．4．1 色谱条件：LichrospherC8色谱柱(250
mm×4．6mm，5弘m)；流动相：乙腈一四氢呋晴一水
(35：1：64)；体积流量：1．0mL／min；柱温：30℃；
检测波长：278nm。
2．4．2对照品溶液的制备：取60℃减压干燥至恒
重的木兰脂素对照品10．5mg，加甲醇制成1．05
mg／mL的溶液，即得。
2．4．3标准曲线的绘制：精密吸取1．05mg／mL木
兰脂素对照品溶液2．0、1．0、0．6、0．4mL于5mL
量瓶中，加甲醇至刻度，得不同质量浓度的木兰脂素
对照品溶液，分别进样5pL，测定，记录峰面积积分
值。以峰面积积分值对进样质量浓度进行线性回归，
得回归方程：A=2633．809C+14．43025，r=
0．9999，线性范围为0．42～5．25弘g。
2．5体外经皮渗透性实验：取出实验皮肤，实验前
自然解冻，生理盐水中浸泡30min，用滤纸吸干。称
取穴贴定喘膏1．05g，贴于预处理过的实验皮肤上，
钢夹固定皮肤在TP一5型智能透皮扩散仪的扩散
室与接受室之间，皮肤角质层(人造皮肤除外)朝上，
在接受室中注入40％乙醇的接收液22mL，液面恰
与皮肤内层接触，开动电磁搅拌器，保持恒速搅拌和
恒温，水浴温度(37±1)℃，转速300r／min，于1、2、
3、4、6、8、12、24h取样1mL置量瓶中。每次取样后
均补加相同体积的新鲜接收液并排除接受室中的气
泡。样品液用0．2,urn的微孔滤膜滤过后，直接进
样，进行分析，在测得的峰面积标准曲线上求出相应
的药物质量浓度，计算累积渗透量(Q)。以累积渗透
量Q对时间(f)进行线性回归所得方程的斜率即为
透皮速率常数，。实验结果见表1。
n一1
e×22+∑CiXl
Q=
G：第一个取样点测得的药物质量浓度(t-g／mL)Ic。：第i个取样点
测得的药物质量浓度(pg／mL)；A：渗透面积(era2)
表1 木兰脂素在不同皮肤的体外透皮渗透动力学参数(弹一5)
Table1 Kineticparametersofmagnolinviavariousskinsinvitro血一5)
可见，不同皮肤模型累积渗透量Q及透皮速率
快慢程度为：硝酸纤维素>裸鼠>小鼠>壳聚糖>
大鼠>兔>乳猪>蛇蜕；时滞：蛇蜕>壳聚糖>硝酸
纤维素>乳猪>兔>大鼠>小鼠>裸鼠。从实验的
重复性和操作性来看，以硝酸纤维素膜为最好。在体
外经皮渗透试验规范性研究中，硝酸纤维素膜可作
为适宜亲脂性成分木兰脂素体外经皮渗透实验的理
想皮肤模型。
3讨论
文献中记载常用的体外透皮扩散试验的接受介
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·521·
质有生理盐水、适宜体积分数的乙醇和聚乙二醇等，
本研究考虑到木兰脂素的溶解性能，选择40％乙醇
作为接受介质，获得了不同皮肤模型的差异性试验
结果。有关40％乙醇作为接受介质的适宜性有待进
一步研究。
动物去毛时需仔细剪除并不破坏到皮肤，皮肤
用手术刀小心剥离后置15倍放大镜下观察有无破
损或病变。实验用皮肤最好现取现用，若需保存，则
要展平，用10％的甘油浸润，可以防止冰晶形成，保
护皮肤细胞完整。再置密封性好的塑封袋内，于一20
℃以下冰箱中保存备用。临用前取出，放置时间不宜
过长，一般不超过1个月。
以8种皮肤作为透皮实验材料对穴贴定喘膏的
透皮吸收进行研究，发现其体外释药为一线性递增
过程，符合零级释放。
硝酸纤维素膜是一种亲水性膜，肉豆蔻酸异丙
酯作为一种亲脂性成分用来浸渍硝酸纤维素膜，增
加脂质结构，尽可能模拟角质层限速。经肉豆蔻酸异
丙酯浸渍的硝酸纤维素膜渗透性远大于其他皮肤，
其垂现性好、易操作，可用于含亲脂性成分中药透皮
贴剂基质处方的预筛选，能否作为中药经皮给药制
剂的体外扩散试验评价体系最合适的皮肤模型，有
待进一步的实验验证。
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HPLC法测定侧柏叶及其制剂侧柏V号胶囊和异海松酸胶囊中异海松酸
程立方1，崔秀君2，马海勇3
(1．山东省中医药研究院，山东济南250014；2．济南市妇幼保健院，山东济南250001；
3．南京中医药大学，江苏南京210046)
摘要：目的建立异海松酸的HPLC测定方法，控制侧柏叶及其制剂侧柏V号胶囊和异海松酸胶囊的质量。方法
采用高效液相色谱法。色谱条件：KromasilC18柱(200mm×4．6mm，5Mm)；流动相：甲醇一水一冰醋酸(60l 37：3)；
体积流量：1mL／min；柱温：25℃f检测波长：231nm，迸样量：10gL。采用外标法计算样品中异海松酸的质量分
数。结果 异海松酸的线性关系范围为1．25～10．00Mg，回归方程为Y一66214X+2487．9，r一1．000。平均回收
率为95．8％，RSD为2．7％(挖一5)。侧柏叶药材中异海松酸的测定结果分别为3．09、3．20、3．56mg／g，侧柏V号胶
囊的测定结果分别为10．39、9．67、10．99mg／g，异海松酸胶囊的测定结果分别为553．89、541．50、528．83mg／g。结
论该方法简便、准确、分离效果好、无干扰，可用于侧柏及其胶囊的质量评价。
关麓词：侧柏l侧柏V号胶囊|异海松酸胶囊；异海松酸；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2007)04—0521—03
DeterminationofisopimaricacidnleavesofPlatyd!adusorientalisndtspreparations
C：ebaiNO．VCapsulaandlsopimaricAc dCapsulabyHPLC
CHENGLi—fan91，CUIXiu—jun2，MAHai—yon93
(1．ShandongAcademyofTraditionalChineseMedicine，Jinan250014，China；2．JinanMaternityandChildrenHealth
Hospital，Jinan250001，China；3．NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210046，China)
Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofisopimariecidnthe
leavesofP／atycladusorientalisndtspreparationsCebaiNo．VCapsulaandIsopimaricAc dCapsulato
evaluatethequalityofthem．MethodsHPLCMethodwaseveloped．KromasilC】8(200mm×4．6mm，
5肛m)columnwasusedandthemobilephase：methylalcohol—water—aceticacid(60：37：3)，float
收稿日期：2006—07—12
基金项目：山东省中医管理局科技计划项目(ZYl9981018)
作者简介：程立方(1965一)，男，山东济南人，副研究员，从事中药及复方活性成分与质量控制研究工作。
Tel：(0531)86671401E-mail：clf01@163．com
万方数据
穴贴定喘膏体外透皮试验用皮肤的比较研究
作者： 祖强， 狄留庆， 赵晓莉， 黄耀洲， 于燕燕， 毕肖林， ZU Qiang， DI Liu-qing，
ZHAO Xiao-li， HUANG Yao-zhou， YU Yan-yan， BI Xiao-lin
作者单位： 南京中医药大学,江苏,南京,210029
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(4)
被引用次数： 1次

参考文献(3条)
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药与临床药理 2005(02)

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3. 祖强.赵晓莉.狄留庆.黄耀洲.于燕燕.黄燕.ZU Qiang.ZHAO Xiao-li.DI Liu-qing.HUANG Yao-zhou.YU Yan-yan
.HUANG Yan 不同种类离体皮肤及人工合成膜对川芎贴膏体外透皮试验的影响[期刊论文]-江苏药学与临床研究
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皮肤发育的组织形态观察[期刊论文]-西北农林科技大学学报（自然科学版）2008,36(5)

引证文献(1条)
1.吴晓明.狄留庆.毕肖林.刘嘉 穴贴定喘膏中挥发油不同环糊精包合物对透皮吸收的影响研究[期刊论文]-中国医
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