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重组水蛭素抗大鼠大脑中动脉血栓形成作用
周　琴, 任开环,韩国柱
,李卫平
(大连医科大学 药理教研室,辽宁 大连　116027)
　　脑血栓的发病率很高, 引起的后果相当严重,抗
脑血栓药物是当前研究的热点。近年,国内外对重组
水蛭素 ( recombinant hirudin, rH )——一种由 65
个氨基酸组成的高效、特异的凝血酶抑制剂的研发
取得了令人瞩目的进展 [ 1]。本研究组曾对国产 rH
的药效学和药动学进行了较深入的研究[ 2, 3] ,证明其
具有强大的抗凝、抗弥漫性血管内凝血 ( DIC) 以及
抗动静脉血栓形成作用。但有关其对脑动脉血栓形
成的影响,迄今未见报道。本研究利用化学法建立血
栓模型以评价 rH 的抗大脑中动脉血栓形成作用。
1　材料与方法
1. 1　动物: SD 大鼠, 280～300 g,雄性,大连医科大
学动物中心提供。
1. 2　受试药品与试剂: rH ,大连高新生物制药有限
公司提供, 批号 010805, 纯度> 99% , 抗凝效价
16 000 AT U/ mg, 相对分子质量 7 000, 经鉴定为
N-Ile
1-Thr
2-63-desulfato-hir udin; 肝素, 北京奥博
星技术责任有限公司产品, 批号 20010513;三氯化
铁 ( FeCl 3) , 北京市朝阳区通惠化工厂, 分析纯, 批
号 950220; 红四氮唑 ( T TC ) , 北京化工厂, 批号
20020809。
1. 3　动物分组: SD 大鼠 78 只, 随机分成两大组。
第一大组再分为 6 组, 每组 10 只。大脑中动脉
( MCA) 血栓形成模型组 ( iv 生理盐水, 以 FeCl3造
模)、假手术组 (除不用 FeCl3外, 其余步骤同其他
组)、高、中、低剂量给药组 (分别 iv rH 1. 0、0. 5、
0. 25 mg/ kg , FeCl3造模) 和阳性药对照组 ( iv 肝素
500 U / kg, FeCl 3造模)。第二大组亦再分为 6组, 每
组 3只, 组别同第一大组, 于术后立即取脑,作病理
检查。
1. 4　MCA 血栓形成模型制备:仿文献方法 [ 4]。各
组均于给药或生理盐水后 10 m in 造模。大鼠用
12% 水合氯醛 ( 250 mg / kg, ip) 麻醉,按 Tamura
等方法[ 5]暴露右侧位于嗅束及大脑下静脉之间的一
段 MCA, 置一小片塑料薄膜保护血管周围脑组织,
将吸有 50% FeCl3溶液 5
L 的小片定量滤纸片贴
在该段 MCA 上,持续 30 m in 后去掉滤纸片, 生理
盐水冲洗局部组织, 逐层缝合,回笼饲养。
1. 5　行为学评分: 于术后 24 h 按文献方法对动物
行为学进行评分[ 4]。满分为 11分, 分数越高, 动物的
行为学障碍越严重。动物行为学评分采用盲法评分。
1. 6　梗死范围测定:术后 24 h, 将大鼠断头取脑,
去掉嗅球、小脑和低位脑干,生理盐水冲洗后做冠状
切片 5 片, 置 0. 2% T TC 溶液中, 37 ℃ 孵育 30
m in。正常脑组织被染成红色,梗死组织成苍白色。
将脑平片照相后,采用 Image-Pro plus 软件分析系
·84· 中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 36 卷第 1 期 2005年 1月

收稿日期: 2004-04-12作者简介:周　琴( 1957—) ,女,辽宁大连人,实验师,主要从事心脑血管药理学的研究。
* 通讯作者　Tel: ( 0411) 84720229　E-m ail : hgzhx2236@ sin a. com
统,测定 5个脑平面总梗死区占总脑平片的面积百
分比。
1. 7　病理学观察:术后立即取脑,置 10% 福尔马
林中固定, 脱水石蜡包埋,常规切片, HE 染色后在
光镜下观察血栓形成情况。
1. 8　统计方法:采用 SPSS 软件包进行单因素方差
分析。
2　结果
2. 1　大鼠造模后 24 h 行为学改变:模型组术后表
现不同程度的手术对侧前肢内收、肩内旋、肌张力降
低,推右肩向对侧移动,抵抗阻力降低,甚至出现不
停向一侧转圈现象; 而给药组可见不同程度的症状
减轻。由表 1可见, rH 1. 0、0. 5 mg/ kg 剂量组行为
学评分远低于模型组且差异显著 ( P < 0. 01) , rH
0. 25 mg/ kg 剂量组与模型组相比差异无显著性
( P> 0. 05) , rH 对行为学的改善呈剂量依赖性。肝
素 500 U / kg 组的行为学评分亦低于模型组且差异
显著 ( P< 0. 01)。假手术组未见行为学改变。
2. 2　梗死范围:脑平片照相后可见模型组梗死面积
主要累及大脑皮质外侧部、皮质下的尾状核、丘脑前
部和外侧部及下丘脑的外侧部。给药组梗死面积随
剂量增大而逐渐减小。由表 1 可见,血栓形成术后
24 h 脑梗死明显, 模型组梗死面积与假手术组比较
差异显著 ( P< 0. 01) ; rH 1. 0、0. 5、0. 25 mg / kg 剂
量组脑梗死面积与模型组相比差异均显著 ( P<
0. 01) , 且呈剂量依赖性。肝素亦有强大的抗血栓作
用。假手术组未见脑梗死发生。
表 1　大鼠MCA 血栓形成后 24 h 行为学评分
及脑梗死面积 ( x±s, n= 10)
Table 1　Score of behavioral science and area of
cerebral infarct at 24 h af ter MCA
thrombosis ( x±s, n= 10)
组别 剂量 行为学评分 梗死面积/% 抑制百分率/ %
假手术 　　　- 0 0 　　100
模型 　　　- 6. 5±1. 58△△ 11. 08±3. 89△△ 0
rH 1. 0　mg·kg - 1 1. 8±0. 92* * 2. 30±0. 92* * 79. 24
0. 5　mg·kg - 1 3. 0±1. 05* * 4. 23±2. 33* * 61. 82
0. 25 mg·kg - 1 5. 5±1. 18 5. 95±2. 01* * 46. 29
肝素 500 U·kg - 1 1. 5±2. 27* * 1. 22±2. 37* * 88. 99
　　与假手术组比较: △△P< 0. 01;　与模型组比较: * * P< 0. 01
　　△△P< 0. 01 v s Sham group; 　* * P< 0. 01 v s model g roup
2. 3　病理检查:模型组 MCA 切片在光镜下可见血
管内血栓形成, 血栓成分主要为血小板、红细胞及纤
维蛋白,表现为混合血栓的特征; rH 0. 25 mg / kg 剂
量组可见血栓形成出现裂隙, 混合血栓中散在红细
胞; rH 0. 5 mg / kg 剂量组可见血栓形成明显减轻、
疏松; rH 1. 0 mg / kg 剂量组及肝素组未见血栓形
成。结果见图 1。
3　讨论
　　rH 是活血化瘀中药水蛭的主要活性成分,具强
大的抗凝、抗栓活性,是迄今为止世界上最为强大的
凝血酶抑制剂[ 1] ,但来源匮乏,本研究所用药品为基
因重组 rH。rH 作用机制为高效、特异地与凝血酶结
合从而使之失去裂解纤维蛋白原为纤维蛋白的能
1-假手术组　2-模型组　3-rH ( 1. 0 mg/ kg) 组　4-rH ( 0. 5 mg/ kg ) 组　5-rH ( 0. 25 mg / kg) 组　6-Heparin ( 500 U/ mg ) 组
1-Sh am group　2-m odel group　3-rH ( 1. 0 m g/ kg) group　4-rH ( 0. 5 mg /k g) gr ou p
5-r H ( 0. 25 mg/ kg) group　6-Heparin ( 500 U/ mg) group
图 1　rH 对抗大鼠 MCA 血栓形成作用病理检查 (×400)
Fig. 1　Pathological examination of rH eff ect against MCA thrombosis in rats (×400)
·85·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 36 卷第 1 期 2005年 1月
力,进而阻止纤维蛋白的凝固, 抑制血栓的形成;由
于凝血酶还是调节多种细胞功能的活化剂, 其可与
血小板结合从而刺激血小板释放活性物质, 导致血
栓形成,故 rH 也可通过此途径抗血栓形成。
本研究采用 FeCl3作为化学物质损伤血管壁进
而形成血栓。FeCl3不仅价廉易得, 且对血管的损伤
作用可靠,已为不少学者采用[ 6]。血管内膜被 FeCl3
损伤后,暴露出内皮下胶原纤维, 诱发血小板的黏
附、聚集, 继而形成血栓。文献报道 FeCl3引起的动
脉血栓形成主要成分是血小板、红细胞及纤维蛋白
等[ 7]。本研究证实 rH 具有强大的抗 FeCl3诱发大鼠
MCA 血栓形成的作用。
另外, 脑梗死急性期局部血小板聚集的同时血
液凝固系统被活化, 大量凝血酶产生并在脑血管内
形成纤维蛋白血栓,同时, 血小板黏附、聚集引起血
管收缩从而导致脑微循环的障碍[ 8]。Kaw ai 等给
MCA 闭塞大鼠模型应用新型选择性凝血酶抑制剂
( arg atr aban) ,发现用药 1 d 后, 微血栓数目减少、脑
血流改善、梗死灶缩小, 3 d后神经症状改善 [ 9]。本研
究中 rH 亦可能通过此机制间接改善脑缺血程度。
致谢: 南开大学汪和睦教授对本项研究给予热
情支持与帮助。
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茅彩萍, 顾振纶
,曹　莉,许夕慧
(苏州大学医学院 药理教研室、苏州中药研究所,江苏 苏州　215007)
　　高血糖不仅是各型糖尿病的共同特征性病变,
而且长期高血糖又往往导致高胰岛素血症, 也是导
致糖尿病血管病变的主要危险因素。研究发现细胞
间黏附分子 ( ICAM-1) 和氧化低密度脂蛋白 ( ox-
LDL) 在糖尿病血管并发症如糖尿病动脉粥样硬化
( AS) 发生机制中起着至关重要的作用[ 1, 2]。肿瘤坏
死因子 ( TNF-
) 能促进血管内皮细胞表达分泌
ICAM-1 等黏附分子,介导炎症细胞与内皮细胞的
黏附 [ 3] , 而且这一作用在晚期糖基化终产物
( AGEs) 的协同作用下尤为突出[ 4]。葛根素 ( puera-
r in, Pue) 是从野葛 Pueraria lobata ( Willd. ) Ohw i
或甘葛藤 P . thomsonii Benth. 的根中提取的主要
有效成分之一,现代药理学研究表明 Pue 具有活血
化瘀、改善微循环、抑制醛糖还原酶活性等作用, 临
·86· 中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 36 卷第 1 期 2005年 1月

收稿日期: 2004-04-02基金项目:江苏省中医药管理局科研基金资助项目 ( H-028)作者简介:茅彩萍( 1968—) ,女,江苏张家港人,副教授,博士,主要从事中药药理学研究。
T el: ( 0512) 65125270　E-m ail : Maocp1018@ s ina. com. cn
* 通讯作者　Tel: ( 0512) 65190599　E-m ail : zh enlungu. 2003@ 163. com