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中草黄 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
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正交试验法优选虎杖提取工艺的研究
文金辉h2，郭 涛¨，赵庆春1
(1．中国人民解放军沈阳军区总医院药剂科，辽宁沈阳110016，2．大连医科大学，辽宁大连116023)
虎杖为蓼科植物虎杖Polygonumcuspidatum
Sieb．etZucc．的干燥根茎，味微苦，性微寒，具有散
瘀定痛、祛风利湿等功效[1]。虎杖的主要化学成分为
蒽醌类、蔑类、酚性成分和黄酮类化合物，其中大黄
素等蒽醌类衍生物是其抗炎、抑菌的主要成分[2]。有
关虎杖提取工艺的报道多数单以总蒽醌[3]或大黄
素‰51为指标进行优选，指标具有片面性。本实验采
用L。(34)正交设计，以虎杖出膏率、大黄素的量和总
蒽醌的量3项指标的综合评分优选虎杖的提取工
艺，为虎杖的制剂工艺生产提供试验依据。
1仪器与试药
PU一2087高效液相色谱仪(日本Jasco公司)，
UV一2075紫外一可见检测器(日本Jasco公司)，N一
2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研
究所)，AUWl20D十万分之一电子天平(日本
Shimadzu公司)，668真空干燥箱(大连第四仪表
厂)，UV--250lPC型紫外分光光度计(日本
Shimadzu公司)。大黄素对照品由中国药品生物制
品检定所提供，虎杖购自沈阳广生堂药业有限责任
公司，经沈阳药科大学孙启时教授鉴定。甲醇为色谱
纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1大黄素的测定
2．1．1 高效液相色谱条件：色谱柱SpherisorbC。8
柱(150mmX4．6mm，10pm)；流动相：甲醇一
0．1％磷酸溶液(80It 20)；体积流量：1．0mL／mifi#
柱温：室温；检测波长：254nm；进样量：20弘L。
2．1．2标准曲线绘制：精密称取以五氧化二磷为干
燥剂减压干燥至恒重的大黄素对照品适量，加甲醇
配制成24、48、96、144、192、240、480／．tg／mL的溶
液，依次进样，按上述色谱条件测定。以峰面积(y)
对质量浓度(X)进行线性回归，得回归方程：y一
2330．1X+4．364．6，，．一0．9999。表明大黄素在
24～480弘g／mL与峰面积呈良好的线性关系。
2．1．3 供试品溶液制备及测定：取虎杖浸膏约30
mg，精密称定，精密加入氯仿25mL和2．5mol／L
硫酸溶液20mL，称定质量，置水浴中加热回流2h，
冷却至室温，再称定质量，用氯仿补足减失的质量，
摇匀，精密吸取氯仿层10mL，蒸干，残渣用甲醇溶
解并定容至10mL，用微孔滤膜(o．45pm)滤过，取
续滤液，进样，按外标法测定。色谱图见图1。
t／mln
*一大黄素
*．emodin
圈1大黄素对照品(A)和虎杖提取物(B)的
HPLC色谱图
Fig·1HPLCChromatogramsofemodinreference
。substance(A)andP．cuspidatumex ract(B)
2．2总蒽醌的测定
2．2．1标准曲线绘制‘1]：精密称取以五氧化二磷为
干燥剂减压干燥24h的大黄素对照品适量，加甲醇
收稿日期：2006—04—21
*通讯作者郭涛Tell(024)23994860E—mailI sy—guotao@263．net
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万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月·393·
配制成100、120、160、200、240、280、320pg／mL的
溶液。精密吸取1mL，氮气吹干甲醇，残渣各精密加
入2％氨溶液与5％氢氧化钠溶液的等量混合溶液
lOmL使溶解。以试剂为空白，在520nm波长处测
定各溶液吸光度。以吸光度(y)对质量浓度(x)进行
线性回归，得回归方程：Y=0．002X+0．004，，．d
0．9995。表明大黄素在100～320#g／mL与吸光度
呈良好的线性关系。
2．2．2供试品溶液制备及测定：取2．1．3项下制备
的供试品溶液2mL，依照2．2．1项下方法测定溶液
在520nm波长处的吸光度，代入方程计算总蒽醌
的量。 ．
2．3正交试验
2．3．1 因素水平：乙醇体积分数(A)、乙醇用量
(B)、提取次数(C)和提取时间(D)4个因素对虎杖
提取工艺的影响较大，选择的因素水平见表1。
表1因素水平
Table1 Factorsandlevels
2．3．2试验设计与结果：每次称取粉碎的虎杖药材
25g，按正交试验表安排试验(每个试验重复2次)，
回流提取，提取液滤过后减压浓缩，并将浓缩后的浸
膏放人减压干燥器中干燥，得干浸膏，称重，得出膏
率。以提取物中出膏率、大黄素和总葸醌的量3项考
察指标的综合评分优选提取工艺。结果见表2。评分
标准：设定虎杖出膏率15％时取满分15分，大于等
于40％取0分；大黄素的量为10．85％时取满分40
分，量为0时取0分；总蒽醌的量为14．21％时取满
分45分，量为0时取0分。数据统计分析用SPSS
11．5，方差分析结果见表3。“
表2正交设计结果
Table2 ResultofL·(3‘)orthogonaltest
试验号A B c D ?!．奎警．兰!综合
表3方差分析
Table3 Analysisofvariance
，’0．05(2，9)一4·Z6于’o．01(Z’9)=8．02
最适宜的提取工艺A。B。C。D，，即用20倍量
95％乙醇提取3次，总提取时间为3h。4个因素对
提取工艺影响程度依次为A>D>C>B，其中乙醇
体积分数和提取时间对大黄素的影响具有显著性，
乙醇用量和提取时间无显著性差异。
2．4验证试验：为确证该工艺的优劣和稳定性，据
所筛选的最佳提取条件验证3批，结果见表4。验证
试验结果说明，所筛选的提取工艺条件基本稳定。
表4验证试验结果
Table4 Resultsofverification
3讨论
正交试验中大黄素和总蒽醌的量都以各自单次
试验的最高值为满分，表2中的出膏率、大黄素、总
蒽醌和综合评分取两次重复试验的平均值。正交试
验得出的最佳提取工艺A。B：C。D。。具体操作为第一
次8倍量95％乙醇提取1．5h，第二次、第三次各为
6倍量95％乙醇，分别提取1h和0．5h。
大黄素和总蒽醌随着提取时间的延长而降低，
这与先前报道[63温度和提取时间对大黄素有影响相
一致。所以实际操作中，提取的整个过程要注意控制
温度，尽量减少葸醌类衍生物分解、升华所带来的
损失。
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万方数据
正交试验法优选虎杖提取工艺的研究
作者： 文金辉， 郭涛， 赵庆春
作者单位： 文金辉(中国人民解放军沈阳军区总医院,药剂科,辽宁,沈阳,110016;大连医科大学,辽宁,大
连,116023)， 郭涛,赵庆春(中国人民解放军沈阳军区总医院,药剂科,辽宁,沈阳,110016)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(3)
被引用次数： 3次

参考文献(6条)
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