全 文 ：·226· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
药理与临床
四物汤中糖类物质对辐射小鼠造血功能的影响
，
梁乾德，朱力军，谭洪玲，马百平，高 月，王升启’
(军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850)
摘要：目的初步探讨四物汤中糖类物质与四物汤补血作用的关系。方法 四物汤部位分离采用醇沉法、萃取法
和大孔吸附树脂法。用辐射小鼠血虚证模型考察活性。结果将前期发现的具有提高辐射血虚模型小鼠外周血白
细胞数和促进骨髓造血祖细胞增殖作用的四物汤部位C2(正丁醇部位)，用吸附树脂法分离为C2—1(糖部分)和C2—
2(非糖部分)两个部位。活性研究表明部位C2—1具有提高模型小鼠外周血白细胞数和促进骨髓造血祖细胞增殖的
作用，部位C2—2仅显示促进骨髓造血祖细胞增殖的作用。按照部位C2中糖类的组成和质量分数，将D一果糖、D一葡
萄糖和蔗糖混合，活性研究表明混合糖具有促进模型小鼠骨髓造血祖细胞增殖的作用，但对外周血白细胞的作用
不显著。结论单、双糖类物质对四物汤促进辐射小鼠造血功能的作用有一定贡献。
关键词：四物汤；造血功能；糖类；辐射小鼠
中图分类号：R286．I 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)02—0226一04
EffectsofsaccharidesinSi—Wu—Tangonhematopoieticfunctioninirradiatedmice
LIANGQian—de，ZHULi—jun，TANHong—ling，MABai—ping，GAOYue，WANGSheng—qi
(InstituteofRadiationMedicine，AcadamyofMilitaryMedicalSciences，Beijing100850，China)
Abstract：ObjectiveTomakepreliminarystudontherelationshipbetweensaccharidesanblood—
tonifingeffectofSi—Wu—Tang．MethodsSi—Wu—Tangwasfractionatedbyethanolprecipitation。extrac—
tion，andmacroporousadsorptionresichromatography．Activitywasinvest gatedonirradiatedmiceas
modelofblooddeficiency．ResultsThefractionC2(，2一butanolfraction)，whichhadpreviouslyshownac—
tivityofraisingtheamountofperipheralleukocyteandpromotingheproliferationofhematopoieticpro—
genitorcellinbonemarrowofirradiatedmice，wasseparatedintotwofractions，fractionC2—1(saccharide
fraction)andC2-2(non—saccharidefraction)，bymacroporousadsorptionresichromatography．Activity
experimentshowedhatfractionC2—1couldraisetheamountofperipheralleukocyteandpromotethepro—
liferationofhematopoieticprogenitorcellinbonemarrowofirradiatedmice，whilefractionC2—2showed
onlytheffectofpromotingheproliferationofhematopoieticprogenitorellinbonemarrow．Then，ac—
cordingtOthecompositionandc ntentsofsaccharidesinfractionC2，D—fructose，D—glucose，andsucrose
weremixed．Activityexperimentshowedthathesaccharidem xturecouldpromotetheproliferationof
hematopoieticprogenitorellinbonemarrowofirradiatedmice，buttheffectofraisingtheamountofpe—
ripheralleukocytewasnotsignificant．ConclusionTosomeextents．themonosaccharideandisaccharide
contributetOSi—Wu—Tang
7
Seffectofimprovinghematopoieticfunctionnirradiatedmice．
Keywords：Si—Wu—Tang；hematopoieticfunc ion；sac haride；irradiatedmice
方剂药效物质基础是中药现代研究的关键问题
之一。四物汤是补血经典方剂，多项现代研究显示其
具有促进机体造血功能的作用，但其物质基础尚不
清楚Ⅲ。前期工作‘21将四物汤分离为C1、C2、C3等
部位，发现部位C2(正丁醇部位)和部位C3具有
提高辐射致血虚证模型小鼠外周血白细胞数和促进
骨髓造血祖细胞增殖的作用，而部位C1作用不显
著。化学分析嘲表明部位C2和部位C3均含有单糖
和二糖，部位C1含糖极少，部位C1和部位C2均
含有芍药苷，并且发现芍药苷具有促进辐射小鼠骨
收稿日期：2005—05—26
基金项目：国家自然科学基金项目(30271617，30070913)；军队“十五”重点项目(012019)；北京市“二四八”重大创新工程项目
(H010210220113)
作者简介：粱乾德(1971一)，男，吉林省农安县人，军事医学科学院助理研究员，博士，1994年毕业于北京中医药大学中药系，2000年、
2003年获得军事医学科学院药物分析学硕士、博士学位，主要从事中药现代化基础研究及新药研究。
Tel：(010)66931422E—mail：liangqiande@yahoo．eom．cn
*通讯作者王升启Tel：(010)66932211Fax：(0 0)66932211E—mail；sqwang@nic．bmi．ac．ca
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月·227·
髓造血祖细胞增殖的作用。本研究考察四物汤部位
C2中的糖类物质对辐射小鼠造血功能的影响。
1材料与方法
1．1 药品与仪器：四物汤各药材饮片购于北京同仁
堂药店，经军事医学科学院马百平副研究员鉴定，分
别为玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLi—
bosch．，伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv．)
Diels，川芎LigusticumchuanxiongHort．，毛茛科
芍药PaeonialactifloraPall．的根及根茎加工而
成。无水乙醇、醋酸乙酯、正丁醇、D一葡萄糖和蔗糖
为国产分析纯。D一果糖为国产生化试剂。SP825型
吸附树脂为日本三菱产品。Sysmex--820自动血球
计数仪，日本；QT一3型7剂量辐射检测控制仪，军
事医学科学院；Napco--5410CO。培养箱，美国；
Labofuge400R型低温离心机，德国；TGL一16G台
式高速离心机，国产；CJT—Z—I洁净工作台，国
产；Coic显微镜，国产。
1．2 四物汤提取部位的制备：制备四物汤水煎液
(熟地、当归、白芍、川芎的用量比例为15：10：
10：6)。将四物汤水煎液在低于60℃下浓缩至约
为原体积的1／5～1／6，然后在不断搅拌下，滴加乙
醇至乙醇体积分数为20％，离心并弃去沉淀，上清
液继续加乙醇至乙醇体积分数为40％，离心得沉淀
(部位B1)，上清液继续加乙醇至乙醇体积分数为
60％，离心得沉淀(部位B2)，上清液继续加乙醇至
体积分数为80％，离心得沉淀(部位B3)，上清液浓
缩至无乙醇味，加适量水稀释，分别以醋酸乙酯、正
丁醇萃取，每种溶剂萃取3次，萃取液浓缩至干分别
得到醋酸乙酯部位(部位C1，含芍药苷14％、阿魏
酸4％)和正丁醇部位(部位C2，含果糖16％、葡萄
糖10％、蔗糖22％、芍药苷9oA)，余下的药液浓缩
得部位C3(含果糖9％、葡萄糖7％、蔗糖31％)。将
部位C2用水溶解后上大孔吸附树脂柱，用水洗脱，
洗脱液减压浓缩得部位C2一l(预试验TLC检识见
单糖和二糖斑点，未见芍药苷斑点)；然后用80％乙
醇洗脱，洗脱液减压浓缩得部位C2—2(预试验TLC
检识未见单糖和二糖斑点，见芍药苷斑点)。
1．3 四物汤水煎浓缩液的制备：制备四物汤水煎液
(各药味用量比例同1．2项)，在低于60℃下浓缩
至含四物汤生药1g／mL的浓缩液(含果糖33mg／
mL、葡萄糖24mg／mL、蔗糖113mg／mL、芍药苷
2．6mg／mL、阿魏酸0．2mg／mL)。
1．4单双糖混合溶液的制备：按部位C2中所含果
糖、葡萄糖和蔗糖的量，将D一果糖、D一葡萄糖和蔗糖
混合并用水溶解，得单双糖混合溶液(含果糖3．2
mg／mL、葡萄糖1．9mg／mL、蔗糖4．3mg／mL)。
1．5 辐射血虚证模型小鼠外周血白细胞检测：
C57BL／6J小鼠，二级，雌性，6～8周龄，体重(20士
2)g，由军事医学科学院实验动物中心提供。常规饲
养数天适应环境后，按体重随机分组，经60CoY射线
全身一次照射，剂量为3．5Gy，照射距离4121，制备
血虚证动物模型。各组小鼠造模后立即ig给予相应
受试药物，给药剂量(以相当于四物汤生药用量表
示)为10g／(kg·d)，每只0．2mL，每天1次，连续
7d。模型对照组ig给予同体积生理盐水。分别于小
鼠造模及给药后第0、3、5、7、10、13天，每只小鼠尾
静脉取血20弘L，用自动血球计数仪检测外周血白
细胞数目。
1．6 辐射血虚证模型小鼠骨髓造血祖细胞集落培
养：模型制备及给药方法同1．5项。增设正常组，小鼠
不照射，ig给予生理盐水。造模及给药后第8天，每组
处死3或4只小鼠，取股骨骨髓混合后按文献方法[4]
进行集落培养，检测粒系(CFU—GM)、红系(CFU—
E、BFU—E)、混合系(CFU—MIX)造血祖细胞。
1．7 四物汤C2—1和C2—2部位的活性考察：将四
物汤水煎浓缩液，部位C2—1、C2—2、C1、C2、C3的水
溶液(相当于四物汤生药1g／mL获得的提取部
位)，作为受试药物考察其对辐射小鼠外周血白细胞
和骨髓造血祖细胞的影响。
1．8单双糖混合液的活性考察：将四物汤水煎浓缩
液、单双糖混合液、部位C2—1、C2的水溶液(相当于
四物汤生药1g／mL获得的提取部位)作为受试药
物，考察其对辐射小鼠外周血白细胞和骨髓造血祖
细胞的影响。
1．9统计学处理：各数据以z±s表示，组间比较行
t检验。
2结果
2．1 受试药物对辐射模型小鼠外周血白细胞和骨
髓造血祖细胞的影响：结果见表1和2。小鼠经辐射
后外周血白细胞数显著降低，而后随时间呈缓慢回
升的趋势；各系骨髓造血祖细胞集落数亦显著降低。
四物汤具有提高血虚证模型小鼠外周血白细胞数的
作用，各时间点的白细胞数均显著高于模型组(P<
0．05)，并且能促进模型小鼠骨髓造血祖细胞的增
殖，各系祖细胞集落数均高于模型组(P位C2和部位C3也具有提高模型小鼠外周血白细
胞数的作用。部位C2第3天和部位C3第13天的
结果高于模型组(P 万方数据
·228· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
胞的增殖，各系祖细胞集落数均高于模型组(P< (P0．05)。部位C1活性不显著。这些与以往的研究结著，但在造血祖细胞指标上，对CFU—GM和CFU一
果[3]一致。部位C2—1具有提高模型小鼠外周血白细E两系的集落数有提高(P胞数的作用，其第5、7、13天的结果高于模型组1和部位C2—2均有一定的促进模型小鼠造血功能
(P<0．05)，并且能促进各系造血祖细胞的增殖的作用。
、
表1 四物汤及其部位C2—1、C2—2、C1、C2、C3对辐射小鼠外周血白细胞的影响(；士s，弹一10)
Table1 EffectsofSi-Wu-TanganditsfractionsC2-1，C2—2，C1，C2，andC3
onperipheralleukocyteinirradiatedmice(i土s，露一10)
白细胞计数／(109·L1)
组 另U一第0天 第3天 第5天 第7天 第10天 第13天模型 12．8士3．6 1．6士0．5 2．4土0．7 2．8士0．4 3．7土0．7 3．9±1．0四物汤 12．3土4．1 3．5士1．5’ 5．1士1．4+ 5．4士1．9’ 5．5士0．5。 6．64-1．1。部位C1 13．6士2．1 2．04-0．9 3．4士0．5 2．44-0．7 2．9士0．4 4．74-1．6部位C2 10．3士3．4 2．7土1．2。 2．9士1．1 4．0士1．2 4．9士1．6 5．3士1．O部位C3 12．0士4．1 1．4士0．6 2．7±1．1 3．74-1．4 4．2士0．9 6，9士1．1。部位C2—1 10．74-3．4 1．6土0．4 3．6士1．5’ 4．2土1．6。4．8土1．26．9士1．3’部位C2—2 10．8士4．1 1．4土0．4 2．2±0．3 3．3土1．0 3．9士1．4 5．9土0．7与模型组比较：’PCFU—GMCFU—E BFU—ECFU—M1X
与模型组比较：。P’P2．2单双糖混合液对模型小鼠外周血白细胞和骨
髓造血细胞的影响：见表3和4。结果表明，四物汤
具有提高血虚小鼠外周血白细胞数的作用，其在第
3、13天的结果高于模型组(P造血祖细胞均有促进增殖作用(P<0．05)；部位C2
和部位C2—1均有不同程度提高模型小鼠外周血白
细胞数和促进造血祖细胞增殖的作用。这些均与以
往的结果一致。单双糖混合液对模型小鼠外周血白
细胞未见显著影响，但对CFU—GM、CFU—E和
CFU—MIX3个细胞系的造血祖细胞有促进增殖作
用(P<0．05)，表明单双糖混合液具有一定促进模
型小鼠造血功能的作用。
3讨论和结论
3．1前期工作[2’3’51考察了四物汤C1、C2、C3部位
对辐射致血虚证模型小鼠外周血白细胞和骨髓造血
祖细胞增殖的影响，以及各部位化学成分的特点，发
现部位c2和c3均具有与四物汤类似的提高模型
小鼠外周血白细胞数和促进骨髓造血祖细胞增殖的
表3四物汤、单双糖混合液和部位C2—1、C2对辐射小鼠外周血白细胞的影响(x-+-s，弹一10)
TaMe3 EffectsofSi—Wu—Tang，saccharidemixture，fractionsC2—1andC2
onperipheralleukocyteinirradiatedmice(；士s，腮一10)
与模型组比较；。P’P 万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrags第37卷第2期2006年2月·229·
表4四物汤、单双糖混合液和部位C2—1、C2对辐射小鼠
骨髓造血祖细胞增殖的影响(工士s，一一3)
Table4 EffectsofSi-Wu-Tang，monosaccharideand
disaccharidemixture，fractionsC2一landC2
onbonemarrowprogenitorcellproliferation
inirradiatedmice(；士s，露一3)
造血祖细胞集落数／(个·10_5骨髓造血祖细胞)组别——
CFU—GMCFU—E BFU—E CFU—MIX
与模型组比较：。P。P<0．05wmodelgroup
作用，而部位C1作用不显著；部位C2和C3均以
单、双糖为主要成分，部位C1含有种类丰富的成分
而糖类极少，部位C1和C2均含有芍药苷；芍药苷
单体具有促进骨髓造血祖细胞增殖的作用，为四物
汤促进造血功能的活性成分之一。本研究用大孔吸
附树脂将部位C2分离为水洗脱部分(部位C2—1，
以糖类为主)和80％乙醇洗脱部分(部位C2—2，以
脂溶性相对较高的苷类等为主)，结果表明，两个部
位均有一定促进辐射小鼠造血功能的作用，提示糖
类可能具有活性。为了进一步确证，按照部位C2中
主要糖类物质的组成和质量分数，将D一果糖、D一葡
萄糖和蔗糖混合，结果显示仍具有一定的促进辐射
小鼠骨髓造血祖细胞增殖的作用，表明单、双糖类对
四物汤促进造血功能的作用确有一定的贡献。虽然
单、双糖类是植物中常见的成分，其改善小鼠造血功
能的机制不排除可能与提供营养有关，但此结果在
一定意义上提示了中药作用机制的特殊性和复杂
性，有待进一步研究。
3．2从活性考察结果还可看出，部位C2—1提高辐
射小鼠外周血白细胞和促进骨髓造血祖细胞增殖的
作用均显著，而混合糖仅促进骨髓造血祖细胞增殖
的作用显著。这可能与大孔吸附树脂仅能实现粗分
离，部位C2—1中还含有微量的单、双糖以外的其他
活性物质，因而作用更强有关。
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三七皂苷Rg。对大鼠脑缺血一再灌注损伤的保护作用及机制探讨
吴兰鸥，詹合琴，闫俊岭，蔡文锋，吴进平，杨克红
(昆明医学院药理学教研室，云南昆明 650031)
摘要：目的探讨三七皂苷Rg。对局灶性脑缺血一再灌注损伤大鼠大脑皮质中脑源性神经营养因子(BDNF)阳
性蛋白的水平和阳性神经元数目是否具有上调作用。方法选取成年雄性SD大鼠60只，随机分为脑缺血一再灌注
模型组、三七皂苷Rg。高、中、低剂量(200、100、50mg／kg)组和阳性对照(尼莫地乎，1mg／kg)组，采用线栓法制
作大鼠局灶性脑缺血一再灌注模型，各组ig给药并分别于给药后1、3、7d随机取4只大鼠，以灌注法取脑组织，冰
冻法切片，免疫组织化学ABC法染色，用高清晰度彩色病理图文报告分析系统测量、分析各组大鼠大脑皮质中
BDNF阳性蛋白的水平和阳性神经元数目的变化，并观察大鼠脑缺血一再灌注后的神经功能缺失症状。结果与模
型组相比，三七皂苷Rg。高、中、低剂量均能明显改善脑缺血一再灌注的神经功能缺失症状，并能上调大鼠脑缺血一再
灌注损伤的大脑皮质中BDNF阳性蛋白的水平和阳性神经元数量(．P照。结论三七皂苷Rg。能上调BDNF阳性蛋白的表达，通过BDNF对脑缺血一再灌注神经元损伤所起的保护作
收稿日期：2005—05—09
基金项目：云南省自然科学基金项目(2002C0051m)
作者简介：吴兰鸥(1959一)，女，浙江湖州人，药理学硕士，教授，硕士生导师，现为昆明医学院基础医学院药理学教研室主任，主要从事
心脑血管药物药理及毒理学研究。Tel：(0871)5338954E—mail：lanouwu@126．corn
万方数据
四物汤中糖类物质对辐射小鼠造血功能的影响
作者： 梁乾德， 朱力军， 谭洪玲， 马百平， 高月， 王升启， LIANG Qian-de， ZHU Li-jun
， TAN Hong-ling， MA Bai-ping， GAO Yue， WANG Sheng-qi
作者单位： 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(2)
被引用次数： 3次

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