全 文 ：·1376· 中革焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2007年9月
罗达灵通胶囊对前列腺增生大鼠的影响
李晓华1，房志仲”，扬金荣1，孙锐2，孟令新3，吕菁菁1
(1．天津医科大学药学院，天津300070l2．天津医科大学基础医学院，天津300070；
3．天津医科大学肿瘤医院，天津300060)
擅要：目的探讨罗达灵通胶囊对前列腺增生大鼠模型的作用。方法采用去势大鼠注射丙酸睾酮的方法复制
前列腺增生模型，采用ig方式给予太鼠罗达灵通胶囊高、低剂量及等体积去离子水，连续15d后处死，观察前列腺
组织形态及质量，并通过免疫组化的方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和碱性成纤维细胞生长因子(hFGF)表
达的变化情况。培果给药组大鼠前列腺质量，PCNA增殖指数和bFGF表达水平均低于模型组，其中高剂量组的
教果较为明显，其各项指标都趋近于正常水平。结论罗达灵通胶囊有较好的抑制前列腺增生的效果。
关犍词：罗达灵通胶囊；前列腺增生#免疫组化
中圈分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)09—1376—03
EffectofI—uodalingtongCapsulaonbenignprostatehyperplasiainrats
LIXiao—hual，FANGZhi—zhon91，YANGJin—ton91，SUNRui2。MENGLing—xin3，LUJing—jin91
(1·CollegeofPharmacy，TianjinMedicalUniversity，Tianiin300070，Chinal2．Col egeofBasicMedicine，TianjinMedical
University，Tianjin300070，China}3．CancerHospital，TianjinMedicalUniversity。Tianjin300060。China)
Keywords：LuodalingtongCapsula●benignprostatehyperplasia；immunohistochemistry
前列腺增生症(benignprostatehyperplasia，
BPH)和前列腺炎是前列腺发病最普遍的两种疾
病。罗达灵通胶囊主要由大黄、桂枝、泽泻、自术、瞿
麦、麦冬、地黄、竹叶、黄芪、甘草等中药组成，具有清
热解毒、利尿去浊、固脾肾等功效，用于治疗前列腺
增生、前列腺炎等。前列腺增生的发病机制的阐明越
来越多的借助了免疫组的方法，本实验旨在通过免
疫组化的方法验证罗达灵通胶囊抑制前列腺增生的
作用，为申报医院制荆提供药效学依据。
1材料与方法
1．1动物：Wistar大鼠，由中国人民解放军军事医
学科学院实验动物中心提供。
1．2药物与试剂；罗达灵通胶囊(批号20040518，
规格：350mg×40粒，由河北省沧县中医院提供，经
HPLC法测定含大黄素1．98％)。按照人与大鼠体
重折算后，以人正常剂量的1倍和3倍剂量分别作
为低、高剂量，取胶囊内粉末加水适量配成0．0189
g／mL和0．0567g／mL的混悬液，用时摇匀。丙酸
睾酮(天津市氨基酸公司人民制药厂；批号
0304271)，注射用油，增殖细胞核抗原(PCNA)单
克隆抗体，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗体
(北京中杉金桥生物技术有限公司)。
1．3仪器：Leicarm2025型组织切片机(德国徕卡
仪器公司LeicaMicrosysterasNusslochGmbH)，
303A一34型隔水式培养箱(通州市申通科化器材
有限公司)，DS型电热三用冰箱(北京医疗设备
厂)，BP210S电子天平。
1．4 大鼠前列腺增生模型的制备[1】：取体重
(280士20)g的雄性大鼠40只，预养3d 称重。随
机选取30只大鼠用乙醚麻醉，在无菌操作下手术摘
除双侧睾丸(采取经阴囊摘取睾丸的方法)，结扎输
精管和血管，缝合伤口。休养1周后每天im丙酸睾
酮3mg／kg，连续14d。另外10只作为假手术组
(与模型相同操作但不摘除睾丸，不结扎输精管和血
管) 缝合伤口，休养1周后每天im注射用油，连续
14d。将模型大鼠随机分为3组，每组10只，分别为
罗达灵通胶囊高、低剂量(567、189mg／kg)组和模
型组。各组ig给药，每天1次，连续15d。假手术组
和模型组ig水。给药后第16天称体重后，摘取大鼠
前列腺并称质量，记录各组前列腺湿质量，计算前列
腺指数[前列腺质量(mg)／大鼠体重(g)]。然后将
分离的前列腺浸于中性福尔马林中，固定24h，常
规蜡块包埋用以制备光镜及免疫组化标本。
1．5免疫组化方法
啦疆日期：200703—29
尊嘉景荏害5糕替82名碍％凌了髻黧嚣铲霍萎器銮差慧差急罨嚣：盖羹譬I科孝学药荆学专业磺士生·
万方数据
中革焉Chin∞eTraditionalandflerbalDrugs第37卷第9期2007年9月·1377·
1．5．1PCNA测定：采用LSAB法。将前列腺组织
常规石蜡包埋，切片厚约4pm，脱蜡后放入柠檬酸
(pH6．O)缓冲液中，置微波炉处理，加一抗(1t
200)4℃过夜。二抗和三抗在湿盒孵育1h，各步间
均用PBS洗片。结果判断：细胞核染成棕黄色为
PCNA阳性细胞，连续观察5个视野，在每个视野
计算100个细胞中的阳性细胞数．取其平均值作为
PCNA阳性表达率。即PCNA增殖指数。
1．5．2bFGF测定：切片常规脱蜡，ABC法染色，滴
加bFGF抗体，一抗体滴度为lI 100}PBS洗后滴
加二抗，三抗，DAB显色，以二甲苯透明，最后以光学
树脂胶封固，备检测用。结果判断o]：bFGF阳性物质
定位于细胞质，呈棕黄色，主要表达于前列腺的间质
组织中，分别观察染色强度和染色面积两项指标，计
算积分。其中染色强度积分为：无着色记为1分，着浅
色记为2分，中等着色记为3分，强染色记为4分；染
色面积积分为：≤10％记为1分，lo％～25％记为2
分，25％一50％记为3分，≥50％记为4分。将两项
积分相加作为每个标本的一次得分，随机观察5个视
野，取5次得分的中位数作为该标本的最后得分。总
体积分G4分为阴性，i>4分为阳性。
1．6病理切片：每例标本均进行常规HE染色，光
镜下观察。
1．7统计学处理：应用SPSS11．5统计软件，采用
方差分析，Kruskal—Wallis秩和检验，Fisher确切概
率法进行分析。
2结果
2．1各组间在鼠前列腺湿质量和前列腺指数的差
别：经方差齐性检验(Levene检验)，发现各组间前
列腺湿质量指标能够满足方差齐性(P=O．2613)，
因此选用方差分析的方法进行检验(，=45．749，
尸GO．001)，各组间比较采用LSD-t检验；而各组问
前列腺指数指标不满足方差齐性(P—O．0025)，因
此选用Kruskal—walli8秩和检验(日=26．987，
P<0．001)并进行多重比较。对不同组别大鼠的前
列腺湿质量和前列腺指数进行统计分析后发现，其
中模型组的这两项指标均高于其他组，罗达灵通胶
囊的低、高剂量组均能不同程度地缓解丙酸睾酮导
致的前列腺增生引起的前列腺湿质量和前列腺指数
的增高，结果见表1。
2．2不同组间大鼠PCNA增殖指数的区别：通过
观察发现，丙酸睾酮所致前列腺增生大鼠的PCNA
指数较假手术组明显偏高(P<0．01)，而罗达灵通
胶囊组的PCNA指数有不同程度的下降，统计分析
过程中．进行方差齐性检验，满足方差齐性(P一
0．5155)，进而进行方差分析(F=27．122，PG0。00
01)及处理组间的多重比较，结果见表2。另外，光镜
下可见，模型组大鼠前列腺呈弥散阳性，有乳头状增
生，腺腔扩大，染色强度也较大，多呈棕黄色，而罗达
灵通组，以散在阳性居多，染色强度也较小。
裹I罗达冕通胶囊对丙酸睾酮所致大鼠前刊腺增生的
影响(-土，，^一10)
Table1 EffectofLuodalingtangCapsulaoⅡbenign
prostatehyperpJasiainratscausedby
testosteronep pionate(z士s，^一10)
与假手术组比较l～P<0．01⋯P<0．001
与模型组比较；△△△P
△△△P<0．001wmodelgroup
裹2罗达灵通胶囊对丙酸睾酮所致大鼠前列脾增生
PCNA阳性裹达的影响“土$，#=10)
Table2EffectofLuodallngtongCapsulaOnPCNApositive
expressionofbe ignprostatehyp g‘plasiainrats
cansedbytestosteroneproplonate(；士s，”一10)
与假手术组比袄t—P
2．3、不同组问大鼠bFGF表达水平的区别：在光
学显微镜下进行观察发现，在模型组中阳性染色主
要位于问质，部分靠近问质，基底部的腺上皮细胞也
有较多的表达。根据方法中的判别标准进行观察，得
到各组的阳性例敷，应用Fisher确切概率法进行统
计分析，计算其确切概率，同时利用每个标本的总体
积分，进行Kruskal—wallis秩和检验(日=24．137，
PG0．001)，并进行多重比较(比较时矫正检验水准
分别为0．0083、0．0017)，结果见表3。
2．4病理观察：光镜下观察到，模型组前列腺组织
有较多的病理变化，腺体排列紧密，部分腺体扩张，
且上皮细胞数目增多，腺体呈乳头状突向腔内，上皮
细胞呈复层，细胞呈柱状，罗达灵通组与假手术组比
较，也有不同程度的增生，但增生情况较模型组轻，
万方数据
·1378· 中革焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2007年9月
衰3罗选灵通胶囊对丙酸睾酮所致大鼠前剪J脒增生
bFGF阳性衰达的影响(；士j，H=10)
Table3 Eff∞tofLuodalingtongCapsulaolbFGFpositive
expressionofbe ignprostatehyperplasiainrats
eatlsedbytestosteronep plonateG士s，月一10)
与柱手木组比较；一P<阻01f与模型组比较t66P
胞形态更趋于正常。
3讨论
PCNA又称周期蛋白(cyclin)，其量与细胞的
增殖周期密切相关，测定细胞的PCNA表达情况可
反映细胞的增殖状态，近年来它已成为细胞增殖状
态的标志物，其表达与细胞分化过程有关。国内已有
报道o]，证明在前列腺增生的过程中PCNA的表达
也在发生变化，因此本实验对其在实验性前列腺增
生大鼠中的表达进行了进一步验证，并且借助这种
方法探讨中药制剂在治疗前列腺增生中的分子机
制。同时bFGF是一种重要的促血管生长因子和细
胞有丝分裂促进因子，近年也有越来越多的文献报
道“一3其在前列腺增生等疾病中的重要作用，该作用
是与其在前列腺细胞生长、增殖、分化及血管形成过
程中的作用密切相关的。本实验对于bFGF表达的
数据处理，采用了两种方法，Fisher确切概率法和
Kruskal—walli8秩和检验。bFGF表达的观察所得
到的指标是等级资料，所包含的信息不及定量的资
料准确，如果在统计分析过程中，仅区分出每例样本
是否为阳性表达，就更多的损失了数据的信息。因
此，笔者在方法的选择和统计的处理方面都进行了
详细的设计，对于bFGF表达的观察采用了计分的
方式，不但考虑了阳性面积还涉及到了染色强度，在
进行数据分析的过程中，选用秩和检验．最大限度地
体现了观察所得的信息，可以从两种统计方法的结
果中看出，低剂量组的阳性例数较多，但从它的平均
秩次又可看出他的积分并不是很高，然而只考虑阳
性例数，就得到了低剂量组与假手术组和模型组均无
差异的结果，显然这样的结果的出现正说明，应尽可
能多的应用实验数据才能得到较为准确的结果。
祖国医学认为前列腺增生根源于内热火旺，脾
肾两虚，湿热下注，瘀块内阻等，因此选用中药一般
具有清热解毒，补脾益气，利水渗湿等功效，即起到
消肿、消炎、利尿、杀菌、减少前列腺组织充血等作
用。罗达灵通胶囊以大黄、地黄、甘草，麦冬、桂枝、黄
芪、瞿麦、白术，泽泻等为主要组成。其中大黄泻热通
肠、凉血解毒、逐瘀通经，主要成分为蒽醌及二聚蒽
酯类化合物，国内外已有多项报道大黄素具有显著
的抗菌、抗癌、解痉、利尿等作用“3。甘草补脾益气、
清热解毒、缓急止痛、调和诸药；地黄滋阴补血、益精
填髓o]。黄芪补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌。
淡竹叶清热除烦、利尿；泽泻性寒，又能祛热，尤善于
泄肾火与踏肮之熟，故下焦湿热者尤为适宜；可利小
便，清湿热r“。以上各药合用，从发病根源治疗，调节
身体相关器官功能，共奏清热利湿、活血散结、抗炎，
减少前列腺体积之功效，有显著的抗炎、抗前列腺增
生的作用。
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万方数据
罗达灵通胶囊对前列腺增生大鼠的影响
作者： 李晓华， 房志仲， 杨金荣， 孙锐， 孟令新， 吕菁菁， LI Xiao-hua， FANG Zhi-zhong
， YANG Jin-rong， SUN Rui， MENG Ling-xin， L(U) Jing-jing
作者单位： 李晓华,房志仲,杨金荣,吕菁菁,LI Xiao-hua,FANG Zhi-zhong,YANG Jin-rong,L(U) Jing-
jing(天津医科大学药学院,天津,300070)， 孙锐,SUN Rui(天津医科大学基础医学院,天津
,300070)， 孟令新,MENG Ling-xin(天津医科大学肿瘤医院,天津,300060)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(9)
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