全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1255·
表3 10批马钱子药材指纹图谱共有峰的相对峰面积
Table3 RelativepeakareasofcommonpeaksforfingerprintsoftenbatchesofSemenStrychni
表4 10批马钱子药材指纹图谱与参照图谱的相似度
Table4 Similaritiesoff ngerprintsoftenbatches
ofSemenStrychni
道，马钱子药材为剧毒药材，控制其质量尤为重要。
本实验通过比较不同的样品制备方法，考察流动相、
色谱柱、波长等色谱条件，建立了马钱子药材HPLC
指纹图谱，通过方法学考察，表明该方法精密度、稳
定性、重现性均符合指纹图谱技术要求。通过10批
马钱子药材指纹图谱的检测结果，确定了12个共有
峰。评价了10批药材的相似度，均达o．9以上，可见
药材来源质量均一、稳定。该指纹图谱方法的建立，
为马钱子药材和相关制剂的全面质量控制研究提供
了参考。
References：
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不同品种郁金的SRAP研究
李敏1，王琦2，付福友3
(1．成都中医药大学中药鉴定与药用植物教研室，四川成都610075；2．广东省江门市药品检验所，广东
江门 529000；3．西南农业大学生命科学院，重庆400716)
摘 要：目的 用SRAP技术探讨郁金类药材原植物分类，并为郁金类药材的种质资源提供一定的依据。方法对
来源于姜科姜黄属的郁金类药材的9个样品进行了SRAP研究。结果从上、下游各10个引物形成的100个引物
组合中筛选出扩增产物条带信号强、重现性好、特征性好的27个引物组合，扩增，得到847条条带，其中多态性条
带397条，平均每个引物组合产生14．7条多态性条带。结论SRAP技术可以很好地分析郁金原植物的种间关系。
结合形态学资料，将6个郁金品种分为了2个组，一组花序从叶鞘抽出，包括黄丝郁金和黄白丝郁金，黄白丝郁金
收稿日期：2005—10-28
基金项目：四川省科技厅“郁金GAP研究”项目
作者简介：李敏(1963一)，女，四川省成都市人，成都中医药大学药学院中药鉴定与药用植物教研室，副教授、硕士生导师。研究方向为
中药材品种质量和中药材GAP研究。Tel：13320988022Fax：(028)87782078E—mail：limin96@yahoo．eom．cn
万方数据
·1256· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
应为黄丝郁金即姜黄的栽培变种CurcumalongaL．CV．chuanyujin；一组花序从根茎抽出，包括绿丝郁金、白丝郁
金、桂郁金和温郁金，其中白丝郁金可能为绿丝郁金即蓬莪术的栽培变种C．phaeocaulisVal．ev．baisi。
关键词：郁金‘；分类；SRAP
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)08—1255—04
SRAPStudyondifferentvarietiesofRadixCurcumae
LIMinl，WANGQi2，FUu—you3
(1．DepartmentofHerbIdentificationandMedicinalPl nt，ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine，Chengdu
610075，China；2．GuangdongProvinceJiangmenInstituteforDrugControl，Jiangmen529000，China；3·Institute
ofAgricultureandLifeScience，SouthwestAgricul uralUniversity，Chongqing400716，China)
Keywords：RadixCurcumae；classifying；SRAP
郁金为常用中药材之一，为姜科植物温郁金
CurcumawenyujinY．H．ChenetC．Ling、姜黄C．
10ngaL．、广西莪术C．kwangsiensisS．G．Leet
C．F．Liang或蓬莪术C．phaeocaulisVal．的干燥
块根[1]。商品上分别称为温郁金、黄丝郁金、桂郁金
和绿丝郁金。市场上郁金品种复杂，仅四川就有黄白
丝郁金(川郁金)和白丝郁金人药。笔者在双流郁金
GAP基地建设过程中，发现由于郁金品种的混乱，
传统粗放的种植模式导致郁金品种退化、病毒化严
重、产量低，质量不稳定；再加上药材种植的种苗市
场混乱，郁金药材优质种苗难寻，导致郁金药材的品
种混乱，品质、产量下降。而且姜黄属植物的亲缘关
系、系统分类和中药鉴定一直存在很大的争议。有专
家认为川郁金为姜黄的栽培变种[2]；有的专家认为
温郁金和川郁金关系密切[31；也有专家认为川郁金
可定为一个单独的种[4]。因此对郁金的种质资源进
行研究非常必要。SRAP(sequence—related
amplifiedpolymorphism)技术为Li等[5]发展的一
种新标记，该标记具有简便、稳定、产率高、便于克隆
目标片段的特点，已被应用于图谱构建口]、比较基因
组学嘲和遗传多样性‘73分析中，如水稻、油菜和大蒜
等植物的分析研究中。本实验首次应用SRAP技术
对郁金类药材进行了分析研究，拟为郁金类中药的
分类学研究、种质资源和遗传多样性以及GAP研
究提供一定的科学依据。
1材料与方法
1．1实验材料：供试材料为新鲜叶片，样品均系笔
者于2000--2001年分别从各道地药材产地引种至
四川省双流县金桥镇舟渡村郁金GAP生产种源基
地栽培而得，见表1。
1．2 主要仪器和试药：梯度PCR仪：Biometra
Tgradient；垂直电泳仪：Sequin—GenGT；低温离
心机：Hettich—Universal32R；低温离心机：
Eppendorf5804R。TaqDNA聚合酶：上海生工生物
工程技术服务有限公司；SD伽NDAMarker：参照
片段19325、600、500、400、300、200、100，北京鼎国
生物技术有限责任公司；引物：由上海生工生物工程
技术服务有限公司合成。
表1样品来源及编号
Table1 Sampleresourcesandtheirnumbers
编号 样品 植物学名 产地来源
1．3 DNA提取：采用CTAB法，略有改动。提取出
的DNA用TE200弘L溶解，存于一20℃冰箱备用。
1．4引物设计：根据Li等[53发表的引物，设计了10
个上游引物(ME。～ME。。)和10个下游引物(EM。～
EMlo)，见表2L5灌j。
表2实验中应用的SRAP引物序列
Table2 Primersequencesus dforSRAPanalysis
编号 上游引物ME5-3’ 下游引物ME5-3
1 TGAGTCCAAACCGGATA ACTGCGTACGAATTCAA
2 TGAGTCCAAACCGGAGCACTGCGTACGAATTCTG
3 TGAGTCCAAACCGGAATGA T CG ACGAATTCGA
4 TGAGTCAAACCGGACC ACTOCGTACG ATTCCA
5 TGAGTCCAAACCGGAAGGA T CGTACGAATTAAT
6 TGAGTCCAAACCGGTTGGACT CGTACGAATTAAC
7 TGAGTCCAAACCGGTGTGACTGCGTAA TTTGC
8 TGAGTCCTTT CGGTAAGACTGCGTAA TTTGA
9 TGAGTCCTTTCCGGTCCACTGCGTACGAATTGAC
10 TGAGTCTTTCCGGTGCACTGCGTAA TTGCA
1．5 PCR反应：反应体系20弘L：DNA2弘L(30
ng／p．L)，10×PCRbuffer2 pL，MgCl22肛L(25
mmol／L)，dNTP2弘L(2mmol／L)，上游引物2
弘L，下游引物2pL，Taq酶o．2弘L(5U)，H20补足
总体积20弘L。
万方数据
中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1257·
PCR扩增程序：94℃变性5min；开始5个循
环94‘C变性lmin，35℃复性1rain，72℃延伸
lmin；然后35个循环94℃变性1min，50℃复性
1min，72℃延伸1min；72℃延伸5min。
扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳(6％，7mol／
L尿素)分离，电泳缓冲液为0．5×TBE；电泳时，先
用120W电流电泳预热30min，上样后70～90W
电流电泳2h左右，当二甲苯青FF跑过2／3胶板时
中止电泳，银染。
2结果与分析
2．1 用1号和3号样品对100个引物组合进行筛
选，选取出扩增产物条带信号强、重现性好、特征性
好的27个引物组合。27个引物组合分别是：ME一1／
EM一1、ME一1／EM一2、ME—l／EM一3、ME一3／EM一1、
ME一3／EM一2、ME二3／EM一3、ME一3／EM一4、ME一3／
EM一5、ME一3／EM一6、ME一3／EM一7、ME一3／EM一8、
ME一3／EM一9、ME一4／EM一3、ME一4／EM一9、ME一4／
EM一10、ME一5／EM一1、ME一5／EM一2、ME一5／EM一3、
ME一5／EM一4、ME一5／EM一5、ME一5／EM一6、ME一5／
EM一7、ME一6／EM一2、ME一6／EM一3、ME一6／EM一4、
ME一6／EM一5、ME一6／EM一7。用27个引物组合对9
个郁金材料进行扩增，电泳后，共得到847条条带，
其中多态性条带397条，每个引物组合的总条带数从
20～64条不等，多态性条带数从7～25条不等。平均
每个引物组合产生14．7条多态性条带，见图1。
圈1 引物ME一5／EM一4、ME一5／EM一5、EM一5／EM一6
在9个样品上的扩增图
Fig．1AmplifiedresultsofprimerME一5／EM一4，ME一
5／EM-5，ME一5／EM-6forninesamples
2．2采用Baroni—Urban聚类系数，WPGMA聚类
方法，在DPS统计分析软件上运用。一1聚类分析方
法，获得了距离矩阵和聚类分析图。见表3，图2。
表3 Baroni—Urbani和Buser相异系数距离矩阵
Table3 Baroni—UrhaniandBuserdissimilarcoefficient
ofdistancematrix
黄白丝郁会1号
黄白丝郁金2号
黄丝郁金1呼
黄缝郁金2号
黄丝郁金3号
绿丝郁金
白丝郁金
桂郁会
温郁金
000010 020 030 041051
图2 9个郁金材料的SRAP聚类分析图
Fig．2DendrogramfromSRAPresults
ofnineRadixCurcumae
2．3分子生物学研究结合原植物形态可见，当取分
类阈值五。一0．51时，供试的6个品种郁金可分为2
个大组，一组为黄丝郁金和黄白丝郁金(简称I组)，
另一组为绿丝郁金、白丝郁金、桂郁金和温郁金(简
称Ⅱ组)。从原植物形态来看，这两组的主要区别在
于花序的出生部位。I组花序从叶鞘内抽出，Ⅱ组花
序直接从根茎抽出(仅自丝未见花)。在经典植物分
类文献上，花序出生的部位非常重要，常常作为分类
的重要依据。其次在主根茎和侧根茎横切面的颜色
上两组也有区别，I组主根茎和侧根茎颜色均为橙
红色和橙色，Ⅱ组的颜色为墨绿色或黄绿色。
2．4黄白丝郁金和黄丝郁金：黄丝郁金和黄白丝郁
金主要分布于四川双流、崇州、犍为等地，黄白丝郁
金常与黄丝郁金混生，其块根在当地常被当作黄丝
郁金入药。黄白丝郁金植株比较高大，根茎比较发
达，根入土较深；黄丝郁金的植株比较矮小，根茎发
达，根入土较浅。但两者花序均从叶鞘内抽出，叶片
两面均无毛，主根茎和侧根茎横切面的颜色相近，为
橙红色和橙色。故两者具有非常近的亲缘关系，笔者
认为黄白丝郁金(川郁金)应为姜黄C．10ngaL．即
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黄丝郁金的栽培变种C．10ngaL．CV．chuanyujin。
2．5 白丝郁金与绿丝郁金：从SRAP研究结果可
见白丝郁金和绿丝郁金有很近的亲缘关系，在分类
阈值为0．22时，两个品种可以相互聚合。在生长环
境上白丝郁金常与绿丝郁金混生在一起。认为白丝
郁金可能为蓬莪术C．phaeocaulis即绿丝郁金的栽
培变种，暂定为自丝郁金C。phaeocaulisV l．CV．
baisi。
3讨论
SRAP技术是一种新型标记，现主要用在水稻、
油菜和大蒜等植物研究中。本文首次将该技术应用
到中药研究领域中来，研究中通过引物的筛选、反应
程序的优化，得到了较好的扩增效果，每个引物组合
平均产生14．7条多态性条带，最多可达25条。研究
证明，SRAP技术可用于郁金分子生物学的研究，本
研究从DNA分子水平上为郁金类药材原植物的分
类、遗传多样性和种质资源以及GAP研究提供了
参考依据，并且为中药研究领域提供了一个新的分
析方法。
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HPLC法研究雄、雌虎杖不同部位化学成分的变化
张须学1，李海霞2，刘延泽3
(1．南阳医学高等专科学校，河南南阳450004；2．郑州大学药学院，河南郑州450052；
3．河南中医学院，河南郑州450008)
虎杖在我国广泛分布，在美国东北部也有大量
分布。临床可用于痹痛，黄疸，经闭，烫伤，跌打损伤，
疮毒，咳嗽、痰多等症。现代药理研究表明虎杖中的
蒽醌类大黄素、大黄酸、大黄素甲醚有抗炎、抑菌、抗
病毒、抗肿瘤等作用[1]；芪类白藜芦醇、白藜芦醇苷
有抑制胃酸分泌、保肝、抗血栓、降血脂、预防动脉硬
化、对多种癌症发生阶段的抑制[2]、强心扩血管、镇
咳平喘[3]、改善微循环、提高烧伤动物存活率和存活
时间等作用[43；黄酮醇苷类槲皮素一3—0一葡萄糖苷、
槲皮素一3—0一阿拉伯糖苷有利尿作用口]；缩合鞣质有
抗肝脂质过氧化物[6]、降血糖[71等作用。虎杖为雌雄
异株植物，在生产、采集及使用中从未涉及到其性别
问题。尽管雌雄异株现象在植物中也常见到，但其化
学成分及药理作用有何异同引起了我们的兴趣。虽
然对虎杖的化学成分已有大量报道，但对其性别和
收稿日期：2005—11—12
部位间的差异目前尚未见文献报道；并且中药是整
体化学成分发挥作用，现有文献虽有大黄素、白藜芦
醇、白藜芦醇苷量的测定方法，但未见用HPLC一
次分析其尽可能多的化学成分的方法；而且《雷公炮
制论》记载“虎杖，采得后，细研，却用虎杖叶裹一夜，
出煞干用”，说明虎杖叶对其根及根茎的炮制有一定
作用，提示有必要研究虎杖不同部位化学成分的异
同。鉴于在我国及美国东北部地区具有十分丰富的
资源及巨大的开发潜力，因此，本试验用HPLC法
对我国及美国雌雄虎杖的不同部位进行化学成分变
化分析，为评价雌雄虎杖的品质及其合理化的采收、
加工、炮制、用药提供依据，并为进一步研究虎杖的
药理药效作用提供参考。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：Waters1525HPLC泵，
万方数据
不同品种郁金的SRAP研究
作者： 李敏， 王琦， 付福友， LI Min， WANG Qi， FU Fu-you
作者单位： 李敏,LI Min(成都中医药大学,中药鉴定与药用植物教研室,四川,成都,610075)， 王琦
,WANG Qi(广东省江门市药品检验所,广东,江门,529000)， 付福友,FU Fu-you(西南农业大
学生命科学院,重庆,400716)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
被引用次数： 6次

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