全 文 ：中革嚆ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3搠2006年3月·375-
量，对被提取的新棒状花椒酰胺的影响不大，故选择
体积流量大一点的因素C。来提取两面针中新棒状
花椒酰胺。因此，用渗漉法提取两面针中新棒状花椒
酰胺的最佳工艺条件是A。B。C。，即用95％乙醇溶
液，在渗漉柱中以3．9mL／min的体积流量流出，提
取72h，即可达到两面针中新棒状花椒酰胺提取的
最佳工艺效果。
寰2正交试验结果
Table2 Resultsoforthogonaltest
表3方差分析
Table3 Variancea alysis
Fo05(Z，2)=100 F0 1(Z，2)=90．0
2．3验证试验：取两面针100．0g，用渗漉法在
A。B。C。条件下提取两面针中的新棒状花椒酰胺，按
同样的方法来检测分析提取液中新棒状花椒酰胺，
结果提取液中新棒状花椒酰胺的提取率为0．74％，
这与试验8号的A。B。c。结果一致。这可能是只要选
择合适的提取溶剂，有足够的浸泡时间让溶剂将两
面针中的新棒状花椒酰胺提取完全即可，渗漉速度
的快慢对两面针中的新棒状花椒酰胺提取影响不
大，所以用渗漉法在A。B。C。的条件下与试验8号的
A。B。C，结果都是0．74％。
3讨论
试验研究发现，不同的提取条件，两面针中新棒
状花椒酰胺差别很大。当乙醇体积分数为95％、浸
泡时间为72h、渗漉体积流量为3．9mL／min时，两
面针提取液中新棒状花椒酰胺的提取率最高，为
0．74％；当乙醇体积分数为50％、浸泡时间为24h、
渗漉速度为1．3mL／min时，两面针提取液中新棒
状花椒酰胺的提取率最低，为0．031％。
与回流提取法相比，渗漉法提取不需要加热回
流，但是乙醇的体积分数要求高一些，时间要长一
些，提取率为0．74％；而回流方提取时，要加热回
流，乙醇的体积分数要求稍低一些，时间要短一些，
提取率为0．76％[2]，稍高一些。通过比较研究发现，
这两种提取方法都是切实可行，可以根据具体情况
选择合适的提取方法。
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高速逆流色谱法分离制备淡豆豉中大豆素和染料木素
曲丽萍，宓鹤鸣’，范国荣，位华，孙亮
(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海200433)
淡豆豉是经大豆Glycinemax(L．)Merr．发
酵而来的传统中药，其中所含的大豆异黄酮是该药
主要活性成分之一。近年来的研究结果表明，大豆异
黄酮是一类重要的生理活性物质，具有预防心血管
疾病、防癌抗癌、治疗骨质疏松、降低妇女更年期综
合症o~31等功效。经发酵处理后大豆异黄酮中游离
型苷元的质量分数明显提高，如大豆素和染料木素，
而游离型大豆异黄酮比结合型大豆异黄酮具有更强
鏊鍪最智；至蒜等旨墨基金资助项目(。。Dz。。，。。)
*通讯作者宓鹤鸣Tel：(021)25074436Email：mixia00519@⋯COin
万方数据
·376· 中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
的生物活性“]。因此，如何简便、快速从淡豆豉中分
离制备大豆异黄酮苷元对进一步进行药效与作用机
制研究、开发现代中药和充分利用我国的药材资源
等具有重大意义。高速逆流色谱(highspeed
countercu rentchromatography，HSCCC)法是一
种不需固态载体的液液分配色谱技术，该技术与传
统方法比较具有分离效率高、操作简便、可避免因不
可逆吸附而引起的样品损失等无可比拟的优点，因
此已被广泛应用于天然产物有效成分的分离制备当
中1⋯。本实验采用高速逆流色谱技术从淡豆豉中分
离制备大豆素和染料木素，优选了最佳的溶剂系统，
该法分离时间短、产物纯度高。
l实验部分
1．1仪器：TBE--300A高速逆流色谱仪(深圳同出
生化技术有限公司)，聚四氟乙烯管缠绕在3个水平
轴上形成螺旋管(管直径2．6mm，分离体积300
mL)，20mI．进样圈，该HSCCC还配备了柱塞式泵
(S系列，北京圣益通技术开发有限公司)，uV一Ⅱ
型检测器(中围科学院上海生物化学研究所)，
N2010色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究
所)。Waters高效液相色谱仪，包括515泵，2487检
测器，20m．定量圈，N2000色谱工作站(浙江大学
智能信息工程研究所)。
1．2材料与试剂：淡豆豉购于上海童涵春中药饮片
厂。大豆素和染料本素对照品购于上海同田生化技
术有限公司，质量分数均大于99％。实验中所用的
氯仿、甲醇、石油醚为分析纯，乙腈为色谱纯，购于上
海市化学试剂公司。水为自制重蒸馏水，并经微孔滤
膜滤过。
1．3淡豆鼓中大豆异黄酮粗品的分离：将药材适当
粉粹，称取粗粉2kg，先用石油醚于索氏提取器中
回流提取8h除去脂肪油后，加8倍量75％乙醇+回
流提取2次，每次2．0h。滤过，台并滤液，减压回收
乙醇，得浸膏。取浸膏加适量水混悬后．过1300大孔
吸附树脂，依次用水、40％乙醇和75％乙醇洗脱，将
75％乙醇洗脱流份减压浓缩后真空干燥得黄色粉
末，置冰箱保存，备用。
1．4溶剂体系选择：在分液漏斗中配制氯仿一甲酵一
水(4：3：2)溶剂体系，充分振摇后静止，使用前分
取上下相，超声脱气后泵人逆流色谱仪。先将色谱柱
中充满上相作为固定相．调整主机转速为800r／
min，再以2．0mL／min体积流量泵入下相作为流动
相，待流动相从柱出口流出，表明两相在分离管中建
立了动态平衡，由进样阀进样，流出液采用紫外检测
器在254l，tri处进行检测，同时记录色谱图，根据色
谱图接收目标成分，并检测色谱峰纯度。
1．5 液相色谱条件：色谱柱：LichrospherC．B柱
(1501]lm×6，0mm，5m)(江苏，汉邦科技有限公
司)，流动相为乙腈一水冰醋酸(45：55；2)，体积流
量为1．0mL／min，检测波长254ilm，柱温为室温，
进样量20pL。
2结果与讨论
淡豆豉经石油醚除油后，过1300大孔树脂易于
得到较为干净的总异黄酮粗提物。实验中用不同体
积分数乙醇梯度洗脱，各流份经高效液相色谱法检
测，与对照品比较表明：大豆异黄酮苷元主要存在
75％乙醇洗脱物中(图1)，其结合型糖苷主要存在
40％乙醇洗脱物中。本研究中接收75％乙醇洗脱物
减压浓缩后真空干燥(60c)，得浅黄色粉．末
2．14g，得率为1．07％。
，
1太豆索z染料木秉
1 daidzein2一genistein
图l淡豆豉粗提物时高效液相色谱图
Fig．1HPLCChromatogramofcrudeextract
fromSemenSojaePreffaratum
高速逆流色谱法中，分离成败的关键在于能否
选择合适的两相溶剂系统。台适的两相溶剂体系应
满足下列要求：分层时问短于30s；固定相的保留率
要高；目标化合物的两相中的分配系数应合适
(0．j<^<2)等。本研究中，根据所分离化合物的特
性，考察r氯仿甲醇一水(4：3：2、8：10：5、4；
4：3)、正己烷一醋酸乙酯甲醇一水(1：1：1：1、1：
0．7：0．7：l、1：1．1：1．1：1)、醋酸乙酯正丁醇
水(2：1：3、4：1：418种溶剂体系(表1)。试验结
果表明氯仿一甲醇一水(8：10：5、4：4：3)和醋酸乙
酯一正丁醇一水(4：1：4)固定相保留率很低，正己烷
醋酸乙酯一甲醇水(1：1：1：l、1：0．7：0．7：l、
l：1．1；1．1；1)分配系数较小，色谱峰重叠，所得
流份纯度羞，醋酸乙酯一正丁醇一水(2：l：3)分配系
数太大，分离时间过长，溶剂浪费严重，因此最终选
定氯仿一甲醇一水(4：3；2)为高速逆流色谱分离制
备的两相溶剂系统。结果固定相保留率为85％，在3
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月·377·
h内分离得到2个流份(流份I和Ⅱ)，高速逆流色
谱图见图2。
衰1不同溶剂体系中大豆素和染料木素分配系数
和分离度值
Table1 Partitioncoefficientandseparationfactorof
daidzeinandgenisteininvarioussolventsystems
溶剂体系
大豆分离染料木
素k1度(口)索k2
0 “) ZU 】8()
t／rain
圈2溃豆豉粗据物高速逆液色谱圈(J和Ⅱ为接收流份)
Fig-2HSCCCChromatogramofcrudeextract
fromSemensojnePreparatum‘Iand
11 wereobtainedfraction．,；)
采用HPLC法对逆流色谱分离流份进行分析，
结果表明两个流份均为单一色谱峰，与对照品比较
表明，流份I为染料木素，流份I为大豆素，产物的质
量分数分别为99．1％和98．4％。200mg大豆异黄酮
粗品可得26mg大豆素和35mg染料木素(图3)。
2
n j e 6
JL 一～几一
0 5 10 15 20 0 5 10 f5 20
1大百素2染料术素
1—daidzein2—genistein
图3流份Ⅱ(A)和流份I(B)的高速逆流色谱
制备流份高效液相色谱图
Fig．3HPI。CChromatogramoffractionⅡ(A)
andfractionI(B)obtainedbyHSCCC
本实验结果表明采用高速逆流色谱法可以从淡
豆豉中分离得到质量分数的大豆素和染料木索单体
化合物，分离时间较短，操作简便、样品无损失。由此
可以进一步制备获得这两个物质的化学对照品，为淡
豆豉深入研究和质景控制提供了必要的物质基础。
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当归多糖铁的溶出度和生物利用度的研究
王凯平，张玉，戴立泉，曾令杰
(华中科技大学同济医学院药学院．湖北武汉430030)
以前的研究表明若以当归多糖与三价铁配合生
成当归多糖铁(Angelicas nensisp01ysaccharide—
ironcomplex，APC)，有可能开发出一种新型的、具
有双重补血功能的补血剂‘”⋯：一方面，不仅具有较
理想的稳定性、水溶性和吸收率等，而且没有游离铁
离子所造成的对胃肠道的刺激作用，可起到良好的
高价铁治疗缺铁性贫血的作用；另一方面，在多糖铁
中的铁释放之后，配体多糖由于具有多方面的生物
鉴鍪最皙；嚣；：薯蟊箍厅攻关项目。，。。。，。．。。。，
作者简介：mat平(1969--)，女，湖北武汉人，副教授，在读博士研究生，主要从事药物开发研究工作。Email：wkpzcq@163corn
万方数据
高速逆流色谱法分离制备淡豆豉中大豆素和染料木素
作者： 曲丽萍， 宓鹤鸣， 范国荣， 位华， 孙亮
作者单位： 第二军医大学药学院,药物分析教研室,上海,200433
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(3)
被引用次数： 6次

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200603022.aspx