全 文 ：·1144· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
FeCl。反应阳性，盐酸一镁粉反应阳性，Molish反应
阳性，薄层酸水解检测有葡萄糖，提示为黄酮苷类化
合物。UVA船Hnm：256，332(MeOH)。1H—NMR
(400MHz，DMSO)d：12．63(1H，s，OH一5)，10．83
(1H，s，OH)，9．68(1H，s，OH)，9．18(1H，s，OH)，
7．58(2H，rn，H一27 67)，6．85(1H，d，J一8．8Hz，H一
5’)，6．41(1H，d，J一1．6Hz，H一8)，6．21(1H，d，J一
1．6Hz，H一6)，5．46(1H，d，J一7．2Hz，gluH—1)。
13C—NMR(100MHz，DMSO)d：177．4(C一4)，164．1
(C一7)，161．2(C一5)，156．3(C一9)，156．2(C一2)，
148．4(C一47)，144．8(C一37)，133．3(C一3)，121．6(C一
6’)，121．1(C一17)， 16．2(C一57)，115．2(C一27)，104．0
(C一10)，98．6(C一6)，93．5(C一8)，100．9(glu—C一1)，
77．5(glu—C一5)，76．5(glu—C一3)，74．1(glu—C一2)，
69．9(glu—C一4)，60．9(glu—C一6)。将该化合物碳氢谱
数据准确归属，鉴定此化合物为异槲皮苷。该化合物
首次从蓝萼香茶菜中分离得到。
化合物Ⅵ：C2，H360⋯黄色粉末，mp190～192
℃。易溶于甲醇。FeCl。反应阳性，盐酸一镁粉反应阳
性。Molish反应阳性，提示为黄酮类化合物。UV
A艘Hnm：259，359。经与芦丁对照品薄层比较，Rf值
及显色行为一致，鉴定此化合物为芦丁。
References：
1-13KimD，ChangR，ShenXY．Diterpenoidsfr mRabdosia
japonicaEJ]．Phytochemstry·1992，31(2)：697．
E23GuiMY，JiYR，WangBz．ChemicalconstituentsofRab-
dosiajaponica[J]．ChinPharmJ(中国药学杂志)，1999，
34(8)：516-518．
r3]GuiMY，JiYR，WangBZ，eta1．Chemicalconstituentsof
RabdosiajaponicarJ]．ChinPharmJ(中国药学杂志)，
2000，35(6)：374—375．
r4]YangXW，ZhaoJ．Studiesonthechemicalonstituents
fromRabdosiajaponica(Burm．f．)Haravar glaucocalyx
(Maxim)Hara[J]．NatProdResDev(天然产物研究与开
发)，2003，15(6)：490—493．
[53ZhangB，LongK，JiangYY．EffectsofglaucocalyxinAon
PAFbiosynthesisandarachidonicacidmetabolisminwashed
rabbitplateletsfJ3．ChinJPharmacolToxicol(中国药理学
与毒理学杂志)，1992，6(1)：52—55．
1-61ZhangB，LongK．EffectsofglaucocalysinAonaggregation
andcAMPlevelsofrabbitplateletsinvitro[J]．ActaPhar—
macolSin(中国药理学报)，1993，14(4)：347—350．
[7]LiuLD，ZhangTz，YangH，eta1．Effectsofvarglaucoca—
lyxonc—losgeneexpressionduringgloblmyocardialischemi—
acreperfusioninratEJ]．ChinaJChinMaterMed(中国中药
杂志)，2003，28(4)：358—361．
不同生长年限栽植黄芪中黄芪多糖的量、相对分子质量及
对人外周血T细胞增殖的影响
张善玉，康东周，朴惠善
(吉林省延边大学医学院，吉林延吉 133000)
黄芪是一种常用中药，具有补气升阳、固表止汗、
托脓排毒和生肌的功效[1]。近年来研究发现黄芪中除
黄芪皂苷、黄酮类等小分子化学成分具有较强的生物
活性外，大分子化学成分如黄芪多糖(Astragalus
Polysaccharide，APS)也具有增强免疫功能、抗肿瘤、
降血糖等多种生物活性[2’3]，已广泛用于保健和医学
领域。本实验对不同生长年限的栽植黄芪中黄芪多糖
进行量和相对分子质量的测定，并观察对人外周血T
细胞增殖的影响，为黄芪的栽培、采集提供依据。
1仪器与材料
1．1仪器：LC—IOAT高效液相色谱仪(日本岛津)；
RID—IOA示差检测器(日本岛津)；GPCW32．6．11
色谱数据处理工作站(北京龙智达公司)；SB一804
hQ凝胶色谱柱(日本岛津)；RT一2100C型酶标仪
(美国Rayto公司)；TC一2323型C02培养箱(美国
SheldonMa ufacturing公司)；LDZ5—2型离心机
(北京医用离心机厂)。
1．2材料：不同生长年限栽植黄芪，均在2003年
lo月末采集于吉林省和龙市，由吉林省延边大学医
学院生药学教研室吕惠子副教授鉴定为膜荚黄芪
Astragalusmembraneaceus(Fiseh．)；葡聚糖(Dex—
tran)系列对照品购于中国药品生物制品检定所；四
甲基偶氮唑盐(MTT，华美生物工程公司北京分公
司)；植物血凝素(PHA，广州市医药工业研究所)；
二甲基亚砜(DMSO)等其他试剂均为分析纯。
2 实验方法
2．1黄芪多糖提取：分别称取干燥粉碎的不同生长
年限(一年生、二年生、三年生)黄芪药材100g，加水
收稿日期：2006—01—06
作者简介：张善玉(1959一)，吉林省和龙市人，高级工程师，从事中药研究与开发。
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1145·
(20倍、10倍、10倍)，80℃下提取3次(2、1、1h)，
滤过，滤液浓缩至约200mL，加95％乙醇至醇度达
80％，放置过夜，沉淀加水溶解，滤过，经Sevag法[4]
除蛋白7次，用氨水调pH至8，加3_％过氧化氢后
放置37℃水浴12h，滤过，滤液置透析袋中流水透
析12h，液体浓缩再醇沉，放置过夜，沉淀用无水乙
醇和丙酮洗涤，干燥，得到3种类白色的黄芪多糖，
即一年生黄芪中提取的黄芪多糖(APS一1)、二年生
黄芪中提取的黄芪多糖(APS一2)和三年生黄芪中提
取的黄芪多糖(APS一3)。，
2．2 黄芪多糖测定：采用硫酸一苯酚法[5]测定APS一
1、APS一2和APS一3多糖的量，并计算干燥药材含多
糖的量(mg／g)。
2．3黄芪多糖相对分子质量测定
2．3．1GPC色谱条件：色谱柱：凝胶色谱柱；工作
站：龙智达GPCW32．6．11；流动相：0．7％硫酸钠溶
液；体积流量：0．5mL／min；柱温：36uC；进样体积：
20肚L。
●
2．3．2 柱的标定：将相对分子质量为10000、
21400、41100、84400和133800的葡聚糖分别配制
成0．5％溶液；照2．3．1项色谱条件，由小分子到大
分子依次进样，每个样品平行进样3次，正确记录各
样品的相应保留时间t。和色谱图。
2．3．3黄芪多糖相对分子质量及其分布测定：分别
称取APS一1、APS一2和APS一3各20mg，加2mL流
动相溶解，放置过夜，滤过；照2．3．1项色谱条件，进
样测定。
2．4 对人外周T细胞增殖反应的影响(MTT
法)[6]：取正常人抗凝外周血30mL，按常规分离淋
巴细胞，用完全培养液调整细胞的密度为1×106／
mL，台盼蓝染色检测细胞存活率>95％。取100弘L
加入96孔细胞培养板中，加入终质量浓度为10弘g／
mLPHA，并按实验分组加入APS一1、APS一2和
APS一3溶液或生理盐水(同时每组分别以培养液代
替细胞液作为空白对照)，每组设3个复孔，置37
℃ 5％Co。培养箱中培养。48h后，每孔加入MTT
溶液(5g／L)10肛L，继续培养4h，离心，弃上清液，
加入DMSO150肛L，充分振荡后静止20rain，用酶
标仪于波长49012m处测定吸光度(A)值，结果以3
个复孔的平均A值和细胞增殖百分率表示。(细胞
增殖率=实验组A／对照组A×100％)。
3结果
3．1不同生长年限黄芪中黄芪多糖的量：不同生长
年限黄芪中黄芪多糖的量分别为：一年生32．13
mg／g，二年生23．42mg／g和三年生16．86mg／g。
3．2标样与保留时间：各标样的相对分子质量与
HPLC的保留时间综合见表1。以tR为横坐标，标样
相对分子质量的常用对数(109Mw)为纵坐标，得回
归方程：logMw=～0．3441tR+10．1423(r一
0．9998)。
表1各标祥的保留时间(万一3)
Table1 RetentionmefstandardSUbstances(万一3)
3．3 不同生长年限黄芪中黄芪多糖的相对分子质
量及其分布：对APS一1、APS一2和APS一3进行GPC
测定，所得相对分子质量分布图谱，如图1，分别以
A区+B区和B区为计算区间计算得到的相对分子
质量如表2；对不同生长年限黄芪中黄芪多糖的
GPC图谱进行综合解析，如表3。
GPC色谱图所示，APS一1、APS一2和APS一3主
表2不同生长年限黄芪中黄芪多糖相对分子质量
Table2 MolecularweightsofGPCfromA．membran—
eaceusgrowingforvariousyears
样品
重均相对分子质量(M西)
A区+B区 B区
I II ／j III j l
，77、 ，／’! ，‘
‘-
——阜坚』j ，．。＆二．』 ．一一一一△==：：，二!!!．
O 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25 0 5 lO 15 20 25
t／min
图1一年生(I)，二年生(Ⅱ)、三年生(Ⅲ)黄芪中提取的黄芪多糖GPC色谱图
Fig·1GPChromatogramofAPSfromA．membraneaceusgrowing
forannual(I)，biennial(Ⅱ)，andtriennial(n1)
万方数据
·1146· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
表3不同生长年限黄芪中黄芪多糖GPC图谱综合解析
Table3 SyntheticalanalysisofGPCofAPSfromA．
membraneaceusgrowingforvariousyears
要由3．0×105以上相对分子质量范围的多糖(A
区)和1×104～1×105相对分子质量范围的多糖(B
区)组成，而B区面积远远大于A区。结果表明，随
着生长年限的增加多糖相对分子质量降低，三年生
的较一年生和二年生将近减少50％。
3．4不同生长年限黄芪中黄芪多糖对人外周T细
胞增殖反应的影响：用MTT法测定结果，正常人外
周T细胞在PHA激活的条件下，APS一1、APS一2和
APS一3各组的淋巴细胞4值与增殖率均较生理盐
水组有增高的趋势，其中APS～1的25和100ug／
mL组、APS一2的50和100p．g／mL组及APS一3的
100／-g／mL组的A值显著高于生理盐水组，而且
APS一1、APS一2和APS一3的增殖率较高的组分别为
25、50、100／坚g／mL组，表明生长年限越少质量浓度
越低。
4讨论
不同产地、不同生境和不同生长年限均是影响
黄芪化学成分的因素[7]，本研究中不同生长年限栽
植黄芪中黄芪多糖量差异很大，一年生中含的量较
三年生高1倍多；另外，生长年限对黄芪多糖的相对
分子质量也有非常大的影响，随着生长年限的增长
相对分子质量降低，一年生中3×104～8×104的多
糖偏多，三年生中1万左右的多糖占80％以上。
多糖的活性与其相对分子质量有一定关系，不
同的多糖产生生物活性有其最佳相对分子质量范
围[8’9]。本研究结果来看，各年生黄芪中黄芪多糖对
人淋巴细胞的增殖均有促进作用，但有一定的差异，
各年生黄芪中的黄芪多糖增殖率高低依次为APS一
1(144．56％)>APS一2(139．14％)>APS一3
(133．43％)，产生最高效率的质量浓度为APS一1
(25／19／mL)／-g／mL)。提示一年生黄芪中的黄芪多糖免疫活性成
分可能较高，由相对分子质量分布情况分析时，相对
分子质量在3×104～8×104的黄芪多糖可能是最
重要的免疫活性成分。
近年来，国内外学者在对黄芪扶正固本的医药
研究过程中，发现黄芪多糖具有显著增强机体免疫、
扩张冠状动脉、改善心肌功能、增强抗氧化能力、防
止脂质过氧化、改善肾脏功能、防止肝糖原减少、抗
衰老等多种功能[3]，黄芪多糖具有调节机体免疫功
．能及抗肿瘤作用已得到学术界的普遍认可。21世纪
的医学模式将从治疗型向预防型转变，天然药物免
疫促进剂和调节剂的研究和应用越来越受到重视，
黄芪多糖将具有广泛的应用前景。在进行实验时，也
测定了不同生长年限黄苠的根平均质量(一年生、二
年生和三年生分别为4．55、11．77和18．80g／根)，
并按相同栽植密度(33．3万株／hm2)[1们估算了6年
内可获得的多糖产量(多糖产量一多糖的质量×平
均根质量×栽植密度×采集次数)，结果，一年生、二
年生和三年生中可获得的多糖分别为292．1、275．4
和208．8kg／hm2，如果再考虑一年生和／或二年生
平均根质量和粗细时，完全可以增加栽植密度并提
高产量。认为以黄芪多糖的利用为主要目的时可考
虑利用一年生和／或二年生的黄芪，尤其是保健食品
的开发中一年生和／或二年生黄芪的利用也许会带
来更好的经济和社会效益。
References：
ChP(中国药典)[s]．V01．I．2000．
ZhangXM．Theprogressinthestudyonimmunoloregulate
effectandanti—tumorofAstragaliPolysecharide[J]．J
DalianUniv(大连大学学报)，2003，24(6)：101—104．
ChenQ，LiuJC．Theprogressinthestudyonginseng，As—
tragalindLyciumbarbarumpolysaccharideI-J]．JHuainan
TeachCoil(淮南师范学院学报)，2001，3(2)：39—41．
YangYJ，JiangDZ，ChenHY，eta1．Studyonchemical
compositionofHericiumerinaceuspolysaccharideHEP一2
[J]．NatProdResDev(天然产物研究与开发)，2004，16
(3)：194197．
MaL，MaQ，HeYL，ela1．Determinationofpolysaccha—
rideinGanodermalucidum，Lentinusdodea，Astragaliand
LuciumbarbarumextractsEJ]．ChinTraditHerbDrugs(中
草药)，2004，35(2)：167—168．
LinZN，DungSZ，DungSY，eta1．Methodologicalstudy
ondetectingproliferationofTlymphocytesb MTTassay
[J]．ChinJHealtLabTechnol(中国卫生检验杂志)，2000，
10(1)：8．
ZhangQZ，WuXJ，LiuD，eta1．Studyonfactorsfaffect—
ingtheamountsofactivecomponentsofAstragaliEJ]．Chin
TraditHerbDrugs(中草药)，2002，33(4)：314—315．
GaoXL，LiuPX．TheProgressinthestudyonstructure—
activityrationshiopofpolysaccharide[J]．ChinTraditHerb
Drugs(中草药)，20 4，35(3)：229—231．
DengJX，LiXB．Theprogressinthestudyonstructure—ac—
tivityrationshiopandanti—tumorofp lysaccharide[J]．Chin
NewMed(中华新医学)，2004，5(2)：141—142．
ZhangDX．EffectofplantingdesityonAstragaliyieldsand
profitEJ3．GansuSciTechnol(甘肃科技)，2003，32(1)：
44．
万方数据
不同生长年限栽植黄芪中黄芪多糖的量、相对分子质量及对
人外周血T细胞增殖的影响
作者： 张善玉， 康东周， 朴惠善
作者单位： 吉林省延边大学医学院,吉林,延吉,133000
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
被引用次数： 3次

参考文献(10条)
1.中华人民共和国药典(一部) 2000
2.Zhang X M The progress in the study on immunoloregulate effect and anti-tumor of Astragali
Polysccharide[期刊论文]-大连大学学报 2003(06)
3.Chen Q;Liu J C The progress in the study on ginseng,Astragali and Lycium barbarum polysaccharide
[期刊论文]-淮南师范学院学报 2001(02)
4.Yang Y J;Jiang D Z;Chen H Y Study on chemical composition of Hericium erinaceus polysaccharide
HEP-2[期刊论文]-天然产物研究与开发 2004(03)
5.Ma L;Ma Q;He Y L Determination of polysaccha-ride in Ganoderma lucidum,Lentinus edodea,Astragali
and Lucium barbarum extracts[期刊论文]-中草药 2004(02)
6.Lin Z N;Dong S Z;Dong S Y Methodological study on detecting proliferation of T lymphocytes by MTT
assay 2000(01)
7.Zhang Q Z;Wu X J;Liu D Study on factors of affecting the amounts of active components of Astragali
[期刊论文]-中草药 2002(04)
8.Gao X L;Liu P X The Progress in the study on structure-activity rationshiop of polysaccharide
2004(03)
9.Deng J X;Li X B The progress in the study on structure-activity rationshiop and anti-tumor of
polysaccharide 2004(02)
10.Zhang D X Effect of planting desity on Astragali yields and profit 2003(01)

本文读者也读过(3条)
1. 张善玉.朴惠顺.申英爱.ZHANG Shanyu.PIAO Huishun.SHEN Yingai 黄芪多糖与人参总皂苷联用的免疫调节作
用初步研究[期刊论文]-中国药房2005,16(21)
2. 单玉兴.施溯筠.张善玉 参芪合剂对衰老小鼠抗氧化功能的影响[期刊论文]-中国老年学杂志2009,29(19)
3. 张善玉.金在久.申英爱.张海玉.ZHANG Shan-yu.JIN Zai-jiu.SHEN Ying-ai.Zhang Hai-yu 芪月降脂片对高脂
血症大鼠血脂代谢的影响[期刊论文]-吉林大学学报（医学版）2005,31(4)

引证文献(3条)
1.安松兰.张善玉.朴惠顺 1年生黄芪中黄芪多糖对小鼠免疫器官指数的影响[期刊论文]-延边大学医学学报
2007(1)
2.王金虎.董娟聪.赵继学.金顺子.张海玉.张善玉 不同相对分子质量一年生膜荚黄芪多糖对RAW264.7细胞炎症相关
因子表达的影响[期刊论文]-吉林大学学报（医学版） 2011(6)
3.张颖丽.刘男.张善玉 1年生黄芪超微粉对环磷酰胺所致小鼠免疫抑制和肾毒效应的影响[期刊论文]-延边大学医
学学报 2010(1)


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