全 文 ：·362· 中草喃ChineseTraditioaalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
裙带菜多糖的研究
门晓媛，王一飞。，朱艳梅，康琰琰，朱 良
(暨南大学药学院生物医药研究开发基地，广东广州 510632)
摘要：目的研究从裙带菜中提取的多糖组分。方法采用乙醇分级沉淀法提取粗多糖，采用DEAE--CelluIose
离子交换柱色谱法和凝胶柱色谱法对粗多糖进行分离纯化，对纯多糖C11进行理化性质、结构及单糖组成分析。结
果C11的产率为61，97“，其多糖、硫酸基、葡萄糖醛酸质量分数分别为43．20％、12．70％和9．78％，多错C11的
硫酸根连接在糖的c2或C3处于平伏键位置．且C11为以p一糖苷键为主的吡喃糖。其单糖组成皿质量分数比为鼠
李糖，岩藻糖：术糖：葡萄糖：半乳糖=1．50：570，00z 220．00；257．00，8．32。结论C11为单一纯净的酸性
杂多糖。
关键词：裙带莱；多糖；分离纯化
中圉分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253一Z670(2006)030362— 4
PoJysaccharjdesfromUndariap nnatifida
MENXiao—yuan，WANGYi—fei，ZHUYan—mei，KANGYan—yan，ZHUI．iang
(BiomedicineResearchandDevelopmentCenter，CollegefPharmacy，JinanUn versity．Guangzhou510633，China)
Abstract：ObjectiveTos udyp01ysaccharidesfromUndariap nnatifida．MethodsCrudepoly—
saccharideswerextractedwithgrade—precipitationbyalc h01．DEAE—Celluloseandgelfiltration
chromatographywereusedtoisolatendpurifythepolysaccharides，andinve tigatethephysicochemical
properties，structures，andcompositionof hepurepolysaccharidesC11．ResultsTheOutputra eofCll
was61．97％，contentsofpolysaccharide8，sulfate，andGlcAwere43．20％，12．70％，and9．78％，
respectively．TheSulfatelinkedpolysaccharidesonC2orC3equatorially，C11 waspyranosefp
glycosidesmainly．Cllconsistedofrhamnose，fueose，xylose，glucose，andgalactose，theratis：1．50：
570．00j 220．00：257．00：8．32．ConclusionCl1 iS showedtobea homogeneousacidic
heterosaccharides．
Keywords：UndaHapinnatifida(Harv．)Sur．；polysaccharide8；isolationandpurification
裙带菜是大型经济海藻中的一种，属褐藻门，在
我国人工栽培裙带菜相当普及，产量也相当可观，裙
带菜中多糖是其重要组成部分，具有很多生物活性，
笔者从裙带菜中提取的多糖，已证明其具有良好的
抗病毒活性，有广阔的药用前景。本文将报道多糖的
分离纯化、理化性质及组成分析结果。
l材料与仪器、试剂
裙带菜Undariap nnatlfida(Harv．)Sur．采
自大连渤海，经中国科学院南海海洋研究所张洋博
士鉴定。
DEAECellulose52离子交换树脂(Whatman
公司进口分装)，SephadexG一200葡聚糖凝胶
(Pharmacia公司)，台式冷冻离心机(D一78532
Tuttlingen，universal32R)，冷冻干燥机(cHRIST
ALPHAI一2LD)，红外光谱仪(德国EQUINOX55
型)，元素分析仪(德国ElementalA alyzerCHN—
o—RAPID)，(德国一瑞士DRX400型400MHz超
导核磁共振诺仪，气相色谱质谱(美国Thermo
FinniganTrance型)。
2方法与结果
2．1提取与分离：取裙带菜干粉适量，20倍纯水煎
煮1h，共煎煮3次，合并滤液，离心，滤渣弃掉，滤液
减压浓缩，加95％乙醇至乙醇体积分数为75％，
4 C静置过夜，抽滤，沉淀用丙酮、乙醚、无水乙醇洗
涤，冷冻干燥得粗多糖(A)，纯水复溶，加95％乙醇
至乙醇体积分数为20％，4℃静置过夜，离心，沉淀
用丙酮、乙醚、无水乙醇洗涤，冷冻干燥得褐藻胶
(B)，滤液中继续加95％乙醇至乙醇体积数为
警銎是謦：芦紧筝占蠡科学基金用队硬目(粤科基办[2。03]11号)；广东省工业攻关计划项目(2。。5Al。904。。1)。广州市科技攻关计划
项目(200523E0411)
譬翥纂器喜1屯墨笔77h女’天津’在读硬士，研究方向：海洋药物。Fax=(020)85220504。3∞E。m出1：menxiaoyuan@sina,corn
万方数据
中革嚆ChineseTraditionalandHerbalDr gs第37卷第3期2006年3月·363·
60％，4℃静置过夜，离心，沉淀用丙酮、乙醚、无永
乙醇洗涤，冷冻干燥得褐藻糖胶(C)。乙醇分级沉淀
法制得3个多糖样品A、B、c，产率分别为19．1％、
1．0％、9．2％。A和B为黄褐色，c为灰白色。通过
考马斯亮蓝一G250法测得A、B、C的蛋白质质量分
数分别为1．19％、0．70％、0．25％。说明3个多糖样
品的蛋白质质量分数很低，鉴于现有的除蛋白方法
如Sevage法除蛋白的同时多糖损失率高，而本多糖
样品的蛋白质量分数低，故在多糖提取过程中不做
除蛋白处理。
2．2对多糖样品C的纯化：采用DEAE--Cellulose
离子交换柱色谱法纯化多糖样品C。取样品C203．8
mg溶于40mL纯水中，上样，依次用蒸馏水和0．1、
0．3、0．5、1．0mol／I。NaCI洗脱，控制流量约1mL／
rain，自动样品收集器收集洗脱液，每管10mI，左
右，蒸馏水洗脱样收集15管，其余各浓度梯度各收
集40管。苯酚一硫酸法显色，洗脱曲线见图l。蒸馏
水洗脱部分无明显显色，0．1mol／LNaCI洗脱部分
为l～40管，无明显显色，0．3mol／LNaCI洗脱部
分为4l～80管。由图1可以看出。出现较强吸收峰，
合并47～70管，经减压浓缩，透析，滤过，再浓缩，冷
冻干燥，得初步纯化多糖C1：151．6mg，得率为
74．39％；0．5mol／LNaCI洗脱部分为8l～120管。
由图1可以看出，出现较弱吸收峰，合并85～93管，
经减压浓缩，透析，冷冻干燥得C2：4．7mg，得率为
2．31％。由于C2得率很低，接下来只对C1做进一
步的纯化。采用SephadexG一200凝胶柱色谱法对C1
进一步纯化。取30mg样品C1溶于1．5mL水中，
上样，用0．05mol／LNacl洗脱，用恒流泵控制流量
约0．1mL／min，用自动收集器收集洗脱液，每管收
集2ml，左右，共收集60管，苯酚一硫酸法检测，洗脱
曲线见图2，合并17～42管，经浓缩，透析，冷冻干
燥，得进一步纯化的多糖样品C1l25mg，相对于
C1的产率为83．3％。
0 20 a0 60 80】00120140 160
管数
图1 多糖样品c经DEAE—Cellulose离子交换柱
洗脱曲线
Fig-1ElationcurveofsampleCbyDEAE—Cellulose
2．3多糖样品CII纯度检验
2
l 5
《
x 05
O
0 10 20 30 40 50 60 70
管数
囤2多糖样品c1经SephadexG一200凝胶柱色谱
洗脱曲线
Fig·2ElutioncurveofsampleC1bySephadexG一200
2．3．1纸色谱法o]：展开剂为醋酸乙酯一冰醋酸一水
(4—1；”，显色剂为苯胺一邻苯二甲酸，样品C11为
单一圆形斑点，直径约2mull，Rf为0。37。
2．3．2SephadexG一200凝胶柱色谱法：取2mg样
品C11溶于0．5mL水中，用0．05mol／LNaCI洗
脱，用恒流泵控制流量约0．1mL／min，用自动收集
器收集洗脱液，每管收集1mL左右，共收集60管，
苯酚一硫酸法跟踪显色，其洗脱曲线未出现分裂和托
尾现象．峰形单一对称，可认为C11相对分子质量
分布较为集中，为纯多糖。
2．4 Cll理化性质研究：采用苯酚一硫酸法口3进行
总糖的测定，采用明胶一氯化钡法03进行硫酸基测
定，采用硫酸一咔唑法口3进行葡萄糖醛酸的测定，并
对样品进行c、H、N元素分析。C11的理化性质见
表1。
衰1纯多糖Cll理化性质
Table1 PhysleochemicalpropertiesofC11
2．5结构分析
2．5．1红外光谱分析：KBr压片法。由多糖C11的
红外光谱图(图3)可知：在3600～3200cm_1出现
的宽峰为O—H的伸缩振动引起，2925cm_1左右出
现1个比较弱的吸收峰，为c—H伸缩振动引起，
1410cm1附近处出现的吸收峰为c—H变角振动引
起，此3组吸收峰足糖类物质的特征峰。1600～
l 630cm“出现的吸收峰是由C一0非对称伸缩振
动引起，说明多糖中含有羰基，1250cnll附近出现
的吸收峰是由S—o伸缩振动引起，810～850cm_1
处的吸收峰由cO—s伸缩振动引起，它的位置与硫
酸根在糖上的位置有关。连接在c。位处于直立键位
置的硫酸根在850cm|1处有吸收，连接在c。或c。
位处于平伏键位置的硫酸根在820cml处有吸收，
多糖样品的c—O—s伸缩振动峰出现在820cm_1左
右，表明它们的硫酸根连接在糖的C。或c。位上。
万方数据
·364· 中革蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
950～1250cml的一组强峰，是吡喃糖环的醚键
(CO—C)和羟基的吸收峰，p糖苷键在895em_1左
右有特征吸收峰，a一糖苷键在835em_1左右有特征
吸收峰，多糖样品在890cm“左右有吸收峰，说明
为p糖苷键。
40C,O35叫j￡j【)c】25002{)()【，I500】0005(J(J
渡数／cm1
瞳3多糖C11的红外光谱圈
Fig·3lRSpectrumofCll
2．5．21HNMR分析：D：o为溶剂，DSS为外标，室
温测定。1H—NMR主要解决多糖结构中糖苷键的构
型问题。一般说a型毗喃糖苷cl上质子的d值超过
5．0，而p型则小于5．0。1H—NMR图谱多糖C1l的
C1上质子的8值为4．93，小于5．o，推断为p糖苷
键，此结论与红外光谱的分析结果相符。
2．6单糖组成分析：
2．6．1薄层色谱法“]：以2mol／L硫酸lmL溶解
lo．2mg样品C11，封管，100℃水解8h，冷却后加
碳酸钡中和至中性，离心，除去硫酸钡沉淀，上清液
经浓缩，即获得多糖水解物。展开剂为正丁醇醋酸
乙酯一异丙醇一醋酸一水(7：20：12：7：6)，显色
剂为苯胺一邻苯二甲酸。10种单糖对照品的薄层色
谱Rf值分别为半乳糖0．33、葡萄糖0．35、鼠李糖
0．60、山梨糖0．40、甘露糖0．38、木糖0．32、果糖
0．18、核糖0．33、岩藻糖0．39、葡醛酸0．06。多糖样
品C11水解后，薄层色谱得3个斑点，Rf值分别为
0．06、o．32和0．38。与单糖对照品的Rf值比较：
C11中含葡醛酸，由于半乳糖、葡萄糖、木糖和核糖
的RI值均为0．32左右，所以，样品Rf值0．32处的
斑点只能说明样品Cll中含有半乳糖、葡萄糖、木
糖和核糖中的一种或几种。同样，山梨糖、甘露糖和
岩藻糖的Rf值均为0．38左右，样品Rf值0．38处
的斑点只能说明样品Cll中含有山梨糖、甘露糖和
岩藻糖中的一种或几种。
2．6；2GC—MS法o』：称取多糖样品Cll2．5mg，
溶于1．5mL4mol／L三氟乙酸，充氮气封口，90℃
水解lh，60℃减压蒸干，用1．0mL甲醇洗3遍，用
氮气吹干。加1mL蒸馏水，24h后，冷冻干燥得多
糖水解物。在蒸干的多糖水解样中加入10mg盐酸
羟胺、0．5mL吡啶，90℃水解30min，振荡，取出后
冷却至室温，加入0．5mL醋酸酐，盖塞，90℃下继
续水解30min，使转变成楮睛乙酸酯衍生物，反应
产物直接取样进行GCMS分析。单糖对照品的衍
生物制备同上。色谱条件：气相色谱仪用DB一5柱
(35m×0．2mm，液膜厚0．25pm)，采用高纯氦气
为载气，采用程序升温，初始温度为60℃，保持2
min后以30℃／min升至120C，保持1min，再以
2．5℃／min升至250℃，保持10min，进样口温度
280℃，采用不分流模式进样，柱流量为2mL／min。
质谱条件：采用电子轰击(E1)离子源，离子能量70
eV。测定单糖组成的衍生物的制备方法有多种·三
甲基硅醚化是最简单方法之一，操作简单，衍生物易
于气化，但由于单糖三甲基硅衍生物的异构体的存
在，使每种糖会出现多峰现象，同样乙酰化衍生化法
也易出现上述问题。因此采用糖睛乙酸酯街生物，并
且采用平衡稳定异构体的处理方法，避免了多峰现
象，使各种单糖达到了较好的分离效果。通过与单糖
对照品的保留时间和质谱碎片的质子离子峰的质核
比相比较，确定多糖样品cll的单糖组成及质量分
数比为鼠李糖：岩藻糖；木糖：葡萄糖：半乳糖一
1．50：570．00：220．00：257．00：8．32。说明岩藻
糖、木糖、葡萄糖质量分数较大，鼠李糖和半乳糖质
量分数甚微。所以在薄层色谱中未见鼠李糖斑点，结
合GC—MS结果分析，样品Rf值在0．32处的斑点
应为葡萄糖和木糖的斑点，因为半乳糖的质量分数
太小，不会在薄层中履斑；Rf值在0．38处的斑点应
为岩藻糖的斑点。GC—MS法未做葡萄糖醛酸对照
品。但从薄层色谱的结果可以判断样品含有葡醛酸，
通过硫酸咔唑法进一步确定样品多糖中葡醛酸的
质量分数为9．78％。各种单糖对照品及样品气相色
谱峰的保留时间分别为：鼠李糖16．39、阿拉伯糖
16．67、岩藻糖16．79、木糖17．00、甘露糖19．60、葡
萄糖19．72、半乳糖20．04min，多糖样品C11分别
为16．39、16．79、16．88、19．77、20．02rain。
3结论
．1 经DEAE—Cellulose离子交换柱色谱法和
SephadexG一200凝胶柱色谱法可得到较纯多糖，产
率可达61．97％。
3．2纯多糖cll的多糖、硫酸基、葡萄糖醛酸质量
分数分别为43．20％、12．70％和9．78％，元素分析
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
未检测出N元素的存在。
3．3红外光谱显示C11有糖的特征峰，硫酸基特
征峰且硫酸根连接在糖的C2或C3处于平状键位
置，C1l为以}糖苷键为主的吡喃糖。此结论与
1H—NMR分析结果相符。
3．4通过薄层色谱法和GC—MS法综合分析，多糖
样品C11的单糖组成及质量分数比为鼠李糖t岩
藻糖：木糖：葡萄糖：半乳糖一1．50：570．00：
220．00：257．00：8．32。
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膜法分级纯化姬松茸子实体多糖的研究
韩永萍，刘扬平
(北京联合大学生物化工学院，北京100023)
摘要：目的通过微滤和超滤对姬松茸子实体粗多糖分级纯化，获得最佳试验操作条件，考察各级相对分子质量
范围内的多糖分布情况及所得制品的纯度。方法使用微滤和不同截留相对分子质量的超滤串联工艺。结果试
验按相对分子质量将其分成>3×105、3X105～8×101，8×104～1×104以及<1×1044个级别，所得多糖质量分布
比例约为5：1：3：1。试验确定操作条件为室温，操作压力0．08～O．1Mh，微滤和各级超滤分别将各级多糖最高
浓缩至45、35和25g／L。在低温下干燥制备的姬松茸多糖制品，质量分数高于70％，多糖总回收率高达83．7％。结
论该工艺简单可行，姬松茸子实体多糖相对分子质量主要分布于>3×105和8×104～l×105。
关键词：姬松茸多糖f微滤}超滤
中围分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)03—0365—04
Applicationofmembranetechniquetoseparatingandpurifying
polysaccharidesfromfruitbodiesofAgaricusblazei
HANYong—ping，LIUYang—ping
(SchoolfBiochemicalEnginerring，BeijingUnionUn versity，Beijing100023，China)
Keywords：AgaricusblazeiMurrillpo ysaccharide；microfiltration(MF)；ultrafiltration(UF)
姬松茸AgaricusblazeiMurrill又名巴西蘑菇，
是一种珍稀的药食兼用真菌，不但味道鲜美，而且含
有丰富的多糖、蛋白质、不饱和脂肪酸、甾醇类以及
锌、硒、锗等重要的微量元素，在预防和抑制肿瘤、降
低血脂、血糖以及修复受损肝细胞、促进造血干细胞
增殖等方面显示出奇特的功效“]。在日本有“神奇的
蘑菇”和“地球上最后的食品”的美誉。多糖的药效活
性与其分子结构和相对分子质量水平密切相关。免
疫应答对单糖的化学结构是非特异性的，而是由分
子大小决定。国内外大量研究表明，对肿瘤抑制率超
过90％的姬松茸多糖为相对分子量分布在2×106
左右的p半乳糖葡糖、n一葡聚糖和1×104～5×104
处蛋白质葡聚糖、木糖葡聚糖；另外，相对分子质量
在2×105左右的p葡聚糖对肿瘤抑制效果也在
70％以上[1]。因此，将姬松茸多糖分级纯化，并了解
各级相对分子质量的质量分布，对其大规模开发生
产有着非常大的参考价值。
近年来，关于姬松茸子实体多糖提取方法的研
究已有一些文献报道，主要为热水浸提法、酸提法、
酶提法等。膜法作为一种新型的分离技术，不但具有
器薯品羿：嚣巢嚣；笛1一)，女，黑龙江省双鸭山人．讲师，工学硕士，主要从事膜处理技术、饮用水消毒技术方面的教学与研究。
E—mail：yue—yun—tao@sohucom
万方数据
裙带菜多糖的研究
作者： 门晓媛， 王一飞， 朱艳梅， 康琰琰， 朱良， MEN Xiao-yuan， WANG Yi-fei， ZHU
Yan-mei， KANG Yan-yan， ZHU Liang
作者单位： 暨南大学药学院,生物医药研究开发基地,广东,广州,510632
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(3)
被引用次数： 4次

参考文献(5条)
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