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Chemical constituents of Stenoloma chusanum

乌韭的化学成分研究



全 文 :·20· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月
表2化合物I、IV~Ⅶ糖基部分”C—NMR数据
(C5DsN,125Hz)
Table2 13C-NMRDataformoietiesofcompoundsI
andⅣ一Ⅶ(C5D5N,125Hz)
在CateniF等[23的报道中提到化合物Ⅱ对鼻咽
鳞癌(KB)细胞具有很好的抑制性,并且当药物质量
浓度在20tLg/rnL时,其对KB细胞的抑制率就已
经达到了30%。另外,HuangyC7】认为该类化合物既
可抑制肿瘤细胞的侵袭,也可以诱导一些肿瘤细胞
的凋亡和分化,还可以防止细胞衰老等等。这些结果
都表明重楼中抗肿瘤的活性成分除了以往报道的薯
蓣或偏诺皂苷类化合物以外,可能还存在其他类型
的化学成分。.对此,还有待进一步地研究。
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乌韭的化学成分研究
任冰如1’2,夏冰2,李维林2,吴菊兰2,张涵庆2
(1.南京农业大学生命科学学院,江苏南京210095;2.江苏省中国科学院植物研究所江苏省
迁地保护重点实验室,江苏南京 210014)
摘要:目的 研究乌韭Stenolomachusanum全草的化学成分。方法用硅胶、聚酰胺、LichroprepRP一18、
SephadexLHzo等对乌韭的乙醇提取物进行分离,根据化学方法和波谱数据(ESI—MS、1H—NMR、”C—NMR、DEPT、
HSQC、HMBC)对分离所得的化合物进行结构鉴定。结果分离并鉴定了7个化合物,分别为荭草苷(orientin,
I)、荭草苷一2-0一pD一吡喃葡萄糖苷(orientin一2-0一pD—glucopyranoside,I)、牡荆素(vitexin,I)、芹菜素(api—
genin,N)、丁香酸(syringicacid,V)、香草酸(vanillicc d,V1)和龙胆酸(gentisicacid,Ⅶ)。结论化合物I、I、
Ⅳ、Vl、Ⅶ为首次从该植物中分离得到。
关键词:乌韭f化学成分,荭草苷,龙胆酸
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章缩号:0253—2670(2006)11—0020—04
收稿日期:2006—04—12
作者简介:任冰如(1964一),女,江苏宜兴人,研究员,在读博士,主要从事植物资源的研究。
Tel:(025)84347081E—mail:renbingru@263.net
万方数据
中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·21·
CheroicalconstituentsofStenolomachusanum
RENBing—rul”,XIABin92,LIWei—lin2,WUJu—lan2,ZHANGHan—qin92
(1.CollegeofLifeSciences,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China;2.ProvincialKeyLaboratory
forPlantExSituConservation,InstituteofBotany,JiangsuProvinceandChineseAcademyofSciences,
Nanjing210014,China)
Keywords:Stenolomachusanum(Linn.)ChinginSinens g;components;orientin;gentisicacid
乌韭Stenolomachusanum(Linn.)Chingin
Sinensia为陵齿蕨科乌蕨属植物,又称大叶金花草,
全草或根状茎可作药用,味微苦,性凉,无毒,具清
热、解毒、利湿、止血的功效。Ueno等[13从乌韭叶分
离得到牡荆素(vitexin)、丁香酸(syringicacid)、原
儿茶醛(protocatechualdehyde)和原儿茶酸(proto—
catechuicac d),为了进一步研究和发掘该植物的生
物活性,本实验对乌韭的化学成分进行了分离,得到
7个化合物,用化学方法和波谱数据对各化合物进
行了结构鉴定,即荭草苷(orientin,I)、荭草苷一2,,-
0一p-D一吡喃葡萄糖苷(orientin一-0一pD—glucopyra—
noside,Ⅱ)、牡荆素(vitexin,Ⅲ)、芹菜素(apigenin,
1V)、丁香酸(syringicacid,V)、香草酸(vanillic
acid,VI)和龙胆酸(gentisicacid,Ⅶ)。并对化合物I
的碳、氢信号进行了归属。化合物I、Ⅱ、IV、VI、Ⅶ为
首次从该植物中分离得到。
1仪器和材料
Reichert型显微熔点测定仪。Packard1100
MSD型质谱仪。VarianInova一400型核磁共振仪
(TMS为内标)。硅胶(200~300、300~400目)青岛
海洋化工厂出品,聚酰胺(100~200目)为青岛海洋
化学厂出品,SephadexLH一20为Pharmacia
Biotech公司产品,LichroprepRP一18(40~63肛m)
为Merck公司产品。
乌韭全草采自浙江省富阳市,原植物由江苏省
中国科学院植物研究所郭荣麟研究员鉴定,标本保
存于江苏省中国科学院植物研究所标本馆。
2提取和分离
乌韭全草干样10kg,用70%工业酒精冷浸2
次,每次7d,滤过,滤液浓缩后,取其中的1/2依次
用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取,所得醋酸乙酯部
分经硅胶柱色谱分离,石油醚一醋酸乙酯反复梯度洗
脱,得到化合物IV、V和Ⅵ:另1/2浓缩液经聚酰胺
柱色谱分离,水一乙醇梯度洗脱,30%乙醇洗脱部分
浓缩后析出黄色粉末,经LichroprepRP一18色谱分
离,水一甲醇洗脱,得化合物I、Ⅱ和Ill;20%乙醇洗
脱部分经SephadexLH一20凝胶滤过,得化合物Ⅶ。
3结构鉴定
化合物I:黄色粉末(甲醇一水),mp264℃,与
AICI。反应产生黄色荧光,初步推断为黄酮类化合
物。ESI—MSm/z:447(M—H)(100),表明该化合物
的相对分子质量为448。利用1H—NMR、13C—NMR、
DEPT谱、HSQC、HMBC等波谱数据(表1),对化
合物I的碳、氢信号进行了归属。DEPT谱数据可
见,艿61.7为CH2的碳信号,艿119.5,115.8,114.2,
102.5,98.3,82.1,78.9,73.5,70.9,70.8为CH的
碳信号,艿182.1,164.2,162.5,160.5,156.1,
149.7,145.9,122.2,104.7,104.2为季碳信号。
1H—NMR(300MHz,DMSO—d。)艿:13.16(1H,S),
10.77(1H,S,br),10.00(1H,S,br),9.03(1H,S,br)
为黄酮苷元上的4个酚羟基质子信号。7.48(1H,d,
,一1.8Hz)为2-H信号,6.86(IH,d,j_--8.3Hz)
为5-H信号;7.53(1H,dd,J=8.3,1.8Hz)为67一H
信号;6.63(1H,s),6.27(1H,S)分别为黄酮苷元上
的另2个H。由HSQC谱数据可见,与27一H(d
7.48)相连的是2p-C(艿114.2),与5’一H(艿6.86)相
连的是5-C(艿115.8),与67一H相连的是6-C(艿
119.5)。5一OH信号(艿13.16)位于最低场,HMBC
谱显示它与3个碳有相关关系,确定3个碳信号归
属:5一C(艿160.5),6一C(艿98.3),10一C(d104.2)。根
据HSQC谱确定6-H(36.27)。HMBC谱显示6一H
与5一C,10—C有相关关系,还与另二个碳信号(艿
162.5),(艿104.7)有相关关系,归属为7一C(8
162.5)和8一C(艿104.7),7一C上有OH相连,8一C则
与糖基相连。显然,(艿182.1)是黄酮苷元上的羰基
碳4一C的信号,HMBC谱显示了4一C与H(艿6.63)
有相关关系,故有3一H(艿6.63),与之相连的是3一C
(艿102.5)。从HSQC谱和HMBC谱看出,艿122.2
为季碳信号,与3一H(艿6.63)和5’一H(艿6.86)相关,
因处于较高场,判断它不与0H相连,因此为1-C(3
122.2)。d145.9、149.7都为季碳信号,无相连的H,
且处于较低场,推测它们与OH连接。假设艿145.9
为3-C信号,艿149.7为4-C信号,HMBC显示,碳
信号艿145.9与5-H(36.86),2-H(37.48)信号相
万方数据
·22· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月
关,分别为3JcH,2JcH,碳信号艿149.7与5-H(艿
6.86),27一H(艿7.48)及6’一H(艿7.53)信号相关,分
别为2JcH,3Jc.和3JcH,这一假设是合理的,即3145.9
为3r-C信号,艿149.7为4r-C信号。
黄酮苷中糖的端基氢信号为1,,-H(艿4.68),与
苷元上的碳信号7一C(艿162.5),8-C(3104.7)相关,
还与另一个苷元碳信号相关,将它归属为9一C(艿
156.1)。3一H(d6.63)与4一C(艿182.1),17一C(艿
122.2),10一C(艿104.2)相关,还与另一个苷元碳信
号相关,将该信号归属为2一C(艿164.2)。在糖基信号
中,端基氢信号为1”一H(艿4.68,d,J一9.7Hz),表
明是p一糖苷键,与端基氢相接的是1-C(373.5),判
断苷元的8一H与糖基的1,,-OH脱水形成C苷。由
DEPT谱可,(艿61.7)是CH:的碳信号,即6-C(艿
61.7),与-C相连的二个质子为6,『-H(d3.55,
3.81)。1,『-H(艿4.68)与糖基碳信号(艿70.8),(艿
78.9)相关,分别为-C和3-C,这两个碳分别连接
2,,-H(艿3.35)和3,,IH(艿3。26),另外2个碳信号分
别是4-C(370.9)和5-C(d82.1),HMQC谱显示
4,,-H信号为艿3.85。
综上所述,化合物I的化学结构为3’,47,5,7一
四羟基黄酮一8一C—pD一吡喃葡萄糖苷,即荭草苷,见
文献£2~4],化合物I的碳和氢信号的归属见表1。
表1化合物I的”C—NMR、1H—NMR、HSQC、HMBC和
DEPT(DMSO-d。)数据(5)
Table1”C—NMR,1H—NMR,HSQC,HMBC。and
DEPT(DMSO-d6)(艿)DataofcompoundI
化合物Ⅱ:黄色粉末(甲醇一水),与A1C1s反应
产生黄色荧光,初步推断为黄酮类化合物。ESI—MS
m/z611.2(M+H)表示相对分子质量为610,m/z
449(M+H一162)为脱掉一个葡萄糖基的碎片离
子,具有与化合物I相同的相对分子质量。1H—NMR
(300MHz,DMSO—d。)艿:13.14(1H,S),11.7(1H,S,
br),9.8(1H,S,br),8.9(1H,S,br)为该黄酮类化合
物上的4个OH的质子信号,6.23(1H,S,H一6),
6.59(1H,S,H一3),7.45(1H,d,J=2.1Hz,H一2’),
6.87(1H,d,J=8.9Hz,H一57),7.50(1H,dd,‘,=
8.2,2.2Hz,H一67),2.7~5.4(m)为葡萄糖基上的
质子信号。”C—NMR(75.0MHz,DMSO—d6)8:
182.00(C一4),163.97(C一2),162.62(C一7),160.67
(C一5),156.28(C一9),149.59(C一47),145.90(C一3’>,
122.22(C一17), 19.31(C一6’),115.80(C一5’),
114.12(C一2’),105.24(C一8),104.00(C一10),102.71
(C一3),98.21(C一6),81.74(C一5”)为黄酮苷元上的碳
信号,与化合物I的13C—NMR信号相比较,化合物
Ⅱ与化合物I有相同的苷元。参照文献报道[5],化合
物Ⅱ中与苷元直接相连的糖基,其碳谱信号(艿)可归
属为71.6(C一1”),81.3(C一2”),78.6(C一3”),70.4(C一
4”),82(C一5”),61.46(C一6”);另一个糖基碳谱信号
(艿)归属为103.7(C一1”),74.4(C一2肘),76.0(C一3”),
69.6( 一4”),76.3(C~5胛),60.5(C一6”)。以上分析结
果表明,苷元的C一8与葡萄糖的C一1”相连,葡萄糖
基的C一2”通过O与另一个葡萄糖的C一1”相连,将化
合物Ⅱ命名为3’,4’,5,7一四羟基黄酮一8一C—pD一毗哺
葡萄糖基一(2—1)一O—p—D一吡喃葡萄糖苷,即荭草苷一
2-0一pD一吡喃葡萄糖苷。
化合物Ⅲ:黄色粉末(甲醇一水),mp258~260
℃。MS、1H—NMR、13C—NMR光谱数据经与文献报
道[63谱学数据对照,确定化合物Ⅲ为4’,5,7一三羟基
黄酮一8一C—pD一葡萄糖苷,即牡荆素。
化合物Ⅳ:淡黄色粉末(石油醚一丙酮),mp>
300℃。MS、1H—NMR、13C—NMR光谱数据对照文献
数据[引,确定化合物Ⅳ为47,5,7一三羟基黄酮,即芹
菜素。
化合物V:白色粉末(石油醚一醋酸乙酯),mp
200201℃。MS、,H—NMR、13C—NMR光谱数据与
文献数据‘83对照,确定化合物V为3,5一二甲氧基一4一
羟基一苯甲酸,即丁香酸。
化合物Ⅵ:白色粉末(石油醚一丙酮),mp195~
198℃。MS、1H—NMR、珀C—NMR光谱数据对照文献
数据‘引,确定化合物V/为3一甲氧基一4一羟基苯甲酸,
万方数据
中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·23·
即香草酸。
化合物Ⅶ:淡黄色粉末(甲醇一水),mp199℃。
1H—NMR、”C—NMR光谱对照文献数据[1⋯,确定化
合物Ⅶ为2,5一二羟基苯甲酸,即龙胆酸。
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GPC’法测定仙人掌多糖相对分子质量以及HPLC—ELSD法
测定其单糖组成
金鑫1’2,赖凤英1
(1.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640;2.圣安娜饼屋(深圳)有限公司,广东深圳518126)
多糖类的活性与其相对分子质量大小、聚合度、
分支度以及溶液中高级构象等都有关,多糖相对分
子质量太大或太小均会引起活性的下降。因此,多糖
的结构是其生物活性的基础,多糖的一级结构和高
级结构与其生物活性间的构效关系是当前糖化学和
糖生物学共同关注的焦点问题。多糖结构研究的主
要内容有相对分子质量测定、多糖的单糖组成、糖苷
键构型、聚合度、分支度等基本结构以及多糖的溶液
构象等口]。本研究用热水提取的仙人掌粗多糖,提取
液经Savag法脱蛋白后,采用SephacrylS一400柱色
谱纯化,得到仙人掌多糖(OP),经过高效凝胶渗透
色谱和常压凝胶柱色谱分析表明,OP为均一多糖。
本实验对纯化后的仙人掌多糖组分OP的理化
性质进行了研究,并利用凝胶渗透色谱法(GPC)测
定仙人掌多糖OP的相对分子质量以及HPLC—
ELSD分析其单糖组成。
1材料与方法
1.1 材料与试剂:米邦塔仙人掌:购于海南省仙科
农业开发有限公司,晒干,磨粉备用。试验所用3,5一
二硝基水杨酸、葡萄糖、苯酚、硫酸、氯仿、正丁醇、磷
酸二氢钾、茚三酮等均为分析纯。各种糖标准品:葡
萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖醛酸
购于Fluka公司。SephacrylS一400HR凝胶填料:
Amersham公司。SephadexG~200凝胶填料:Phar—
macia公司。
1.2试验仪器:旋转蒸发仪,电热恒温水浴锅,Wa—
ters2410示差折光检测器,Waters717plus自动进
样器,Waters1525HPLC泵,柱温箱,Alltech
ELSD2000蒸发光散射检测器,S21—6型电子恒温
水浴锅,80一2型离心机,HL一2A恒流泵,DBSq00电
脑全自动部分收集器,Unico—UV21202PC紫外一可
见分光光度计、WZZ一2A自动旋光仪。
1.3仙人掌多糖OP的理化特性分析:观察仙人掌
多糖OP的外观,测定OP的比旋光度、在不同溶液
中的溶解度以及与不同化学试剂的特异性反应。
1.4凝胶渗透色谱法(GPC)测定多糖相对分子质
量[2]:色谱条件:TSKG一5000PW×L凝胶柱,TSK
G一3000PW×L凝胶柱;流动相为0.02mol/L
KH2P04溶液,pH6.0;体积流量0.6mL/min;柱温
40oC;进样20弘L;标样为已知相对分子质量的葡聚
收稿日期:2006—05—26
作者简介:金鑫(1981一),女,硕士研究生,主要从事天然产物提纯分离及活性研究。
Tel:13751760520E—mail:jxinemail@126.corn
万方数据
乌韭的化学成分研究
作者: 任冰如, 夏冰, 李维林, 吴菊兰, 张涵庆, REN Bing-ru, XIA Bing, LI Wei-lin
, WU Ju-lan, ZHANG Han-qing
作者单位: 任冰如,REN Bing-ru(南京农业大学生命科学学院,江苏,南京,210095;江苏省中国科学院植
物研究所,江苏省迁地保护重点实验室,江苏,南京,210014), 夏冰,李维林,吴菊兰,张涵庆
,XIA Bing,LI Wei-lin,WU Ju-lan,ZHANG Han-qing(江苏省中国科学院植物研究所,江苏省
迁地保护重点实验室,江苏,南京,210014)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2007,38(1)
被引用次数: 4次

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8. 罗娅君.赵正娟.刘思曼.王照丽.LUO Ya-jun.ZHAO Zheng-juan.LIU Si-man.WANG Zhao-li 乌蕨不同提取液对氧
自由基的清除作用[期刊论文]-四川师范大学学报(自然科学版)2010,33(1)

引证文献(4条)
1.吴菊兰.任冰如.李维林.汪洪江.张涵庆 不同产地乌韭地上部分总黄酮含量的比较分析[期刊论文]-植物资源与环
境学报 2007(1)
2.任冰如.夏冰.李维林.吴菊兰.张涵庆 HPLC法测定乌韭的荭草苷和牡荆素含量[期刊论文]-林产化学与工业
2007(5)
3.罗娅君.肖新峰.王照丽 大叶金花草化学成分的研究[期刊论文]-化学研究与应用 2009(1)
4.任冰如.夏冰.李维林.吴菊兰.赵友谊 乌蕨孢子萌发研究[期刊论文]-云南植物研究 2008(6)


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