全 文 ：·654· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
1H—NMR(Methanol—d。)：2．75(1H，dd，J一17，3
Hz，H一3，cis)，3．00(1H，dd，J一17，13Hz H一3，
trans)，5．00(1H，d，J一7．6Hz，葡萄糖H一1)，5．44
(1H，dd，J一13，3Hz H一2)，5．46(1H，bs，芹菜糖
H一1)，6．35(1H，d，J一2Hz，H一8)，6．50(1H，dd，
J一8．7，2Hz，H一6)，7．11(2H，d，J一8．7Hz，H 3’，
57)，7．43(2H，d，J一8．7Hz，H一2’，67)，7．72(1H，d，
L厂一8．7Hz，H一5)。根据以上数据，鉴定化合物Ⅸ为
甘草素一4’一芹糖苷[5]。
化合物x：黄色结晶。质谱m／z：418(M+)。
1H—NMR(Methanol—dR)：5．06(1H，d，J一7．4Hz，
葡萄糖H一1)，5．46(1H，d，L厂一1．6Hz，芹糖H一1)，
6．30(1H，d，J一2．3Hz，H一37)，6．42(1H，dd，J一
8．7，2．2Hz，H一57)，7．13(2H，d，J一8．7Hz，H一3，
5)，7．68(1H，d，J一15．6Hz，H—a)，7．71(2H，d，J一
8．7Hz，H一2，6)，7．80(1H，d，J一15．4Hz，H _13)，
7．97(1H，d，，一8．9Hz，H一67)。根据以上数据，鉴定
化合物x为异甘草素一葡萄糖芹菜糖苷。
References：
r1]KinoshitaT，SaitohT，ShibataS，et1．Theoccurrenceof
anisoflaveneandthecorrespondingisoflavoneinlicoriceroot
EJ]．ChemPharmBull，1976，24(5)：991—994．
[2]XuQH，ZhuDY，SongGQ，eta1．Isolationndchemical
structureofliconeolignan[J]．ActaPharmSin(药学学报)，
1983，18(1)：45—49．
[3]YangSL，LiuYL．ChemicalconstituentsofGlycyrrhizain-
flataB t[J]．ActaBotSin(植物学报)，1988，30(2)：176—
182．
[4]KitagawaI，ChenWA，HoriK，eta1．Chemicalstudiesof
Chineselicorice—rootsI．Elucidationoff ve ewflavonoid
constituentsfromtherootofGlycyrrhizaglabraL．colected
inXinjiang[J]．ChemPharmBull，1994，42(5)：1056—
1062．
[5]YaharaS，NishiokaI．Flavonoidglycosidefromlicorice口]．
Phytochemistry，1984，23(9)：2108—2109．
白毛藤多糖的分离、纯化和鉴定
毛建山1，吴亚林2，黄静2，潘远江2+
(1．浙江大学医学院附属二院消化内科，浙江杭州 310009；2．浙江大学化学系，浙江杭州310027)
摘要：目的分离、纯化和鉴定白毛藤Solanumlyratum中的多糖的成分。方法经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、
酶一Sevag法脱蛋白得到的粗多糖，再经DEAE—Sepharosefastflow阴离子交换和SephadexG一200葡聚糖凝胶柱色
谱分离得到纯化的白毛藤多糖(SLPS)，用红外光谱和紫外光谱分析鉴定该多糖，凝胶渗透色谱(GPC)法测定其相
对分子质量，运用薄板色谱(TLC)和纸色谱(PC)法初步测其结构组成。结果红外光谱分析具有典型的多糖特征
吸收峰，紫外光谱分析未见蛋白质(280nm)与核酸(260nm)的特征吸收峰。结论本实验所提取的白毛藤多糖为
单一组分的多糖。
关键词：白毛藤；多糖；白毛藤多糖
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)05—0654一03
Isolation，purification，andident fic tionofpolysaccharideofSolanumlyratum
MAOJian—shan，WUYa—lin，HUANGJing，PANYuan—jiang
(1．DepartmentofGastroenterology，SecondAffiliatedHospital，SchoolofMedicine，ZhejiangUniversity，Hangzhou
310009，China；2．DepartmentofChemistry，ZhejiangUniversity，Hangzhou310027，China)
Keywords：SolanumlyratumThunb．；p01ysaccharide；Solanumlyratumpolysaccharide(SLPS)
白毛藤，又名白英，多年生草质藤本，茎及叶密
生有节长柔毛。叶互生，多为琴形[1]。产于黄河以南
各地，是我国的一种名贵中药材，具有清热解毒，利
湿、祛风、抗肿瘤、调节身体免疫力之功效，并对金黄
色葡萄球菌、绿脓杆菌有明显的抑菌作用[2~4]。其主
要成分为生物碱(含口一羟基甾体)，并有糖反应[5]。本
实验主要进行了白毛藤多糖的提取，并进一步纯化
和鉴定了该多糖。
1材料和仪器
白毛藤SolanumlyratumThunb．，浙江产，购
自杭州华东医药股份有限公司中药材分公司，经浙
江大学生命科学院倪世峰博士鉴定。DEAE一
收稿日期：2004—08—10
*通讯作者Fax：(0571)87951264E—mail：panyuanjiang@CSS．zju．edu．cn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·655·
Sepharosefastflow、SephadexG一200为Pharmacia
公司产品，乙醇(医用级)，其他试剂均为国产分析纯
WaterR一401示差折光检测器，JASCOV一530
UV／VIs分光光度计，ThermaNicoletn xus470
红外分光计Water一208和岛津LC一4A高效液相
色谱，日立SCR20BC高速冷冻离心机，冷冻干燥机
(北京博医康技术公司)。
2方法
2．1 白毛藤多糖(SLPS)的提取：干燥的自毛藤全
草1．8kg，粉碎，以95％乙醇室温浸泡，至浸出液接
近无色。残渣于通风处自然阴干，晾干后的药材加水
10L，100℃提取4h，重复提取多次，用苯酚一硫酸
法跟踪检测，至无明显颜色反应为止。合并提取液，
浓缩，离心除去不溶物。上清液在不断搅拌下，缓缓
加入3倍量左右的95％乙醇沉淀，4。c静止24h，次
日，于4℃、6000r／min，离心30min，收集沉淀。合
并上清液，减压回收乙醇，重复以上操作，依次加入
90％、85％、80％、75％乙醇再沉淀，收集合并沉淀，
经水复溶、脱蛋白、透析、冷冻干燥后获粗多糖，得率
为22％。
2．2酶一Sevag法除蛋白：称取链酶蛋白酶、木瓜蛋
白酶各100mg溶于100mL蒸馏水中，两者混匀后
以1：100体积比加入多糖水溶液中，于37。C水浴
中恒温6h，再用Sevag法[61按1：1的体积加Sevag
液(氯仿与正丁醇体积比5：1)，反复振荡，静置24
h以上直至清晰分层，保留水相，反复除蛋白5次以
上直至无蛋白层。
2．3 DEAE—Sepharosef stflow阴离子交换：纤维
素阴离子交换剂DEAE—Sepharosefastflow经0．5
mol／LNa0H、HCl和蒸馏水依次处理至中性，重复
处理3次后用蒸馏水洗至中性，抽气装柱，用pH一
7．6PBS溶液平衡48h。称取粗多糖1g，溶于少量
蒸馏水中，离心除去不溶物，上清液过DEAE—
Sepharosefastflow阴离子交换柱进行分离，用
0．1～2．0mol／LNaCl一PBS溶液梯洗脱，控制体积
流量为1mL／min，每管收集5mL，以苯酚一硫酸法
测吸光度值(A㈣)，作洗脱曲线，合并主峰部分，冻
干，获得两个粗多糖SLPS一1(331mg)和SLPS一2
(286rag)。
2．4标准曲线制作及粗多糖测定：按文献方法制作
标准葡聚糖曲线[7]。同法吸取粗多糖SLPS一1和
SLPS一2的4％水溶液2．0mL在490nm处测A490，
以标准曲线计算多糖含量。
2．5 SephadexG一200葡聚糖凝胶滤过色谱：
SephadexG一200葡聚糖凝胶用适量蒸馏水浸泡12
h，再以100℃溶胀4h后，抽气装柱，用0．1mol／L
NaCl溶液平衡48h。称取200mg粗多糖SLPS一1，
溶于少量蒸馏水中，上样。以0．1mol／LNaCl溶液
洗脱，控制体积流量为1rnL／min，每管收集5mL，
以苯酚一硫酸法测A。。。，作洗脱曲线，合并主峰，冻
干，得精多糖SLPS一1(21．3rag)，得率为0．78％。同
法对粗多糖SLPS一2进行分离，得精多糖SLPS一2
(18．7MG)，得率为0．59％。接着再将精多糖
SLPS一1、SLPS一2依照上述步骤分别进行Sephadex
G一200葡聚糖凝胶柱色谱分离，作出洗脱曲线。
2．6精多糖的测定：按2．4所述方法。同法吸取精
多糖SLPS一1和SLPS一2的4％水溶液2．0mL，在
490nm处测A。。。，计算多糖含量。
2．7紫外光谱检测：取精多糖1．5mg，以适量蒸馏
水溶解，用波长200400nm进行紫外扫描，以蒸
馏水为对照。
2．8红外光谱检测：取干燥精多糖1mg，与适量干
燥KBr粉末混后在研钵中研磨至极细，经压片后，
测定红外光谱。
2．9 多糖相对分子质量的测量：采用凝胶渗透色谱
(GPC)法[7]。色谱条件：色谱柱为肛一Bondagel—Elin—
ear(7．8mm×30cm，相对分子质量范围2×103～
2×106)，样品质量浓度为0．6％，进样量为60弘L，
洗脱剂为双蒸馏水，温度为环境温度，体积流量0．5
mL／min，检测仪器为示差折光检测器。
2．10薄层色谱(TLC)和纸色谱(PC)初步结构鉴
定：精多糖SLPS一1、SLPS一2各2mg加入2mol／L
三氟乙酸(TFA)2mL，封管，于110℃水解1．5h，
减压蒸干后加少量水溶解，展开剂为醋酸乙酯一吡
啶一醋酸一水(5：5：1：3)，苯胺一邻苯二甲酸显色，
进行硅胶薄层色谱和中华滤纸纸色谱分离。对照单
糖为葡萄糖、甘露糖、果糖、岩藻糖、鼠李糖、木糖、阿
拉伯糖。
3结果与讨论
3．1 白毛藤多糖的物理性质：白毛藤多糖为白色粉
末，易溶于水，不溶于有机溶剂，无味，其溶液呈中性。
3．2酶一Sevag法除蛋白：与单纯的Sevag法相比，
中性酶结合Sevag法，除蛋白的处理次数明显减少。
本实验仅用Sevag法处理了6次，即无蛋白层，大大
节省了时间，但是所需蛋白酶价格较高，不易保存，
且使用条件较为苛刻，需要恒温。不过由于所需酶量
极少，且节约了有机溶剂的用量，因此从功效和成本
上来说，酶一Sevag法要适用一些。
万方数据
·656· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
3．3 DEAE—Sepharosefastflow阴离子交换色谱：
由洗脱曲线(图1)可知，DEAE—Sepharosefastflow
阴离子交换柱的分离效果较好，两个组分也达到了
满意的分离效果，且峰形比较对称。
。：
耋；
蚕：
0
洗脱体积／mL
图1 DEAE—Sepharosefastflow阴离子交换图谱
Fig．1ChromatogramofDEAE—Sepharosefastflow
3．4 粗多糖的测定：根据制作的标准曲线，测得粗多糖
SLPS一1及SLPS一2钓质量分数分别为89％和93％。
3．5 SephadexG一200葡聚糖凝胶滤过色谱：粗多
糖SLPS一1、SLPS一2的洗脱曲线见图2。由精多糖
SLPS一1、SLPS一2洗脱曲线(图3)可知，两个精多糖
SLPS一1、SLPS一2的洗脱曲线显示单一对称峰，说明
精多糖SLPS一1、SLPS一2已是单一组分。
O6
0．5
04
03
02
01
0
霉
飞
蜊
芸
餐
洗脱体积／m
A—SLPS—lB—SLPS一2
图2粗多糖的SephadexG一200凝胶柱色谱分析洗脱曲线
Fig．2AnalyticelutioncurveonSephadexG-200
forcrudep0Iysaccharide
黧
毒05
型0．4
毂
01
0
昌
飞
世
莱
螫
洗脱体积／mL
A—SLPS一1B—SLPS一2
图3精多糖的SephadexG一200凝胶柱
色谱鉴定洗脱曲线
Fig．3IdentificationelutioncurveonSephadexG-200
forpurifiedp0Iysaccharide
3．6精多糖含量测定：根据葡聚糖标准曲线，测得
精多糖SLPS一1及SLPA一2的质量分数分别为97％
和99％。
3．7 紫外光谱检测：精多糖SLPS一1、SLPS一2在
200～400nm紫外扫描图谱均显示为末端吸收，
280、260nm处无紫外吸收，表明多糖中无蛋白、
多肽及核酸。
3．8红外光谱检测：红外光谱图表明精多糖SLPS一
1、SI。PS～2具有典型的多糖特征吸收峰，见表1。
表1 白毛藤多糖的红外光谱数据
Table1 DataofIRspectrumofSLPS
3．9 多糖相对分子质量检测：凝胶渗透色谱(GPC)
法测定精多糖SLPS一1、SLPS一2的平均相对分子质
量分别为2．0×105，1．3×105。
3．10薄板色谱(TLC)和纸色谱(PC)初步鉴定多
糖结构：通过精多糖SLPS一1、SLPS一2三氟乙酸水解
产物与单糖对照品的比较发现，两者均含有葡萄糖，
另外，SLPS一1还含有木糖，SLPS一2还含有果糖和阿
拉伯糖。
References：
[1]EditorialOff ceofNationalChineseHerbalMedicineCotlee—
tion，CollectionofNationalChineseHerbalMedicine(全国中
草药汇编)[M]．Beijing：People’SMedicalPublishing
House，1975．
[23ZhangGG．HandbookNewUseofCommonChineseHerbal
Medicine(常用中草药新用途手册)[M]．Beijing：China
Medico—PharmaceuticalS ienceandTechnologyPublishing
House(中国中医药出版社)，1994．
1-33Lee’KB，HongEH，LeeI，eta1．Abolitionofanaphylactic
shockbySolanumlyratumThunb．口]．Intd mmunophar-
macol，1998，19(11～12)：729—734．
[4]KimHM，KimMJ，LiE，eta1．Thenitricoxide—producing
propertiesofSolanumlyratum[J]．JEthnopharmacol，
1999，67(2)：163—169．
[53PuJ C．StudyonSolanumlyratumThunb．ofChinese
medicine口]．JJiangsuTeachersAcad(江苏师范学院学
报)，1996，8(2)：3．
[6]StaubAM．MethodsincarbohydrEJ]．Phytochemistry，
1965，15(5)：5．
[7]ZhangWJ．InvestigativeTechnologyfBiochemistryonGly-
coconjugat(糖复合物生化研究技术)[M]．2nded．
Hangzhou：ZhejiangUniversityPress，1994．
§弋越皋督
万方数据
白毛藤多糖的分离、纯化和鉴定
作者： 毛建山， 吴亚林， 黄静， 潘远江， MAO Jian-Shan， WU Ya-lin， HUANG Jing， PAN
Yuan-jiang
作者单位： 毛建山,MAO Jian-Shan(浙江大学医学院附属二院消化内科,浙江,杭州,310009)， 吴亚林
,黄静,潘远江,WU Ya-lin,HUANG Jing,PAN Yuan-jiang(浙江大学,化学系,浙江,杭州
,310027)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(5)
被引用次数： 16次

参考文献(7条)
1.Editorial Office of National Chinese Herbal Medicine Collection 全国中草药汇编 1975
2.Zhang G G 常用中草药新用途手册 1994
3.LeeK B;Hong E H;Lee I Abolition of anaphylactic shock by Solanum lyratum Thunb[外文期刊] 1998
4.Kim H M;Kim M J;Li E The nitric oxide-producing properties of Solanum lyratum[外文期刊] 1999(02)
5.Pu J C Study on Solanum lyratum Thunb. of Chinese medicine 1996
6.Staub A M Methods in carbohydr 1965(05)
7.Zhang W J 糖复合物生化研究技术 1994

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3. 俞远志.吴亚林.潘远江.YU Yuan-zhi.WU Ya-lin.PAN Yuan-jiang 莲子心多糖的提取、分离和抗氧化活性研究
[期刊论文]-浙江大学学报（理学版）2008,35(1)

引证文献(16条)
1.张燕.孙志良 白毛藤的研究进展[期刊论文]-中兽医医药杂志 2006(1)
2.马洪波.宋春梅.张岚.葛红娟 桑叶多糖的碱性提取及含量测定[期刊论文]-安徽农业科学 2011(3)
3.王林江.雷倩.马双良.汪晓敏.徐顺 不同产地白英中多糖含量的测定[期刊论文]-时珍国医国药 2010(9)
4.张万秋.朱大勇.林治华 生物多糖的研究进展[期刊论文]-重庆工学院学报（自然科学版） 2008(2)
5.梁军.王迪.杨琦.夏永刚.杨炳友.匡海学 植物多糖分析方法研究进展[期刊论文]-中医药学报 2012(6)
6.徐琴.徐增莱.沈振国.史云云 淮山药多糖的研究[期刊论文]-中药材 2006(9)
7.董锐.仇农学.金晓辉 沙苑子粗多糖的提取和脱蛋白方法的比较研究[期刊论文]-农产品加工·学刊 2009(3)
8.杨悦.石森林.葛卫红 多糖的化学研究概况[期刊论文]-中国药师 2008(1)
9.任丽靖.张静.刘志存.孙润广 党参多糖的分离纯化及其结构研究[期刊论文]-中草药 2008(7)
10.朱晓霞.罗学刚 多糖提取与纯化技术应用进展[期刊论文]-食品研究与开发 2007(3)
11.李瑞玲.赵艳玲.张敬华 白英化学成分研究现状[期刊论文]-天中学刊 2009(2)
12.王文昌.胡德禹.杨松 白英化学成分及生物活性研究进展[期刊论文]-广州化工 2011(9)
13.许雪燕.周鹏.蒋姗 多糖现代分离纯化技术的应用进展[期刊论文]-海峡药学 2011(4)
14.冯慎.陈爽.李妍.李晓光 植物多糖的纯化工艺研究进展[期刊论文]-天津化工 2010(6)
15.徐翠莲.杜林洳.樊素芳.苏惠.万郑凯 多糖的提取、分离纯化及分析鉴定方法研究[期刊论文]-河南科学
2009(12)
16.徐琴 江苏产淮山药多糖成分的研究[学位论文]硕士 2006


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