全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·673·
制剂与质量
主动载药法制备盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体
杜松，邓英杰，张威
(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016)
摘要：目的制备高包封率的盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体。方法处方前研究测定了药物在不同pH值缓冲液中的
溶解度和表观油水分配系数；采用pH梯度进行主动载药。超滤法分离脂质体与游离药物，测定包封率，考察了外水
相pH值、孵育温度、药脂比对包封率的影响。结果 随pH值的增大，盐酸去氢骆驼蓬碱的溶解度降低，表观油水
分配系数增大；采用主动载药法，包封率随脂质体内外相pH梯度的减少而降低，受孵育温度的影响不大，在药脂比
小于1：5时脂质体包封率达到80％以上。结论主动载药法可制得包封率较高的去氢骆驼蓬碱脂质体。
关键词：盐酸去氢骆驼蓬碱；脂质体；包封率；pH梯度；主动载药
中图分类号：R283．6；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)05—0673—04
Preparationofharminehydrochlorideiposomebyactiveloadingmethod
DUSong，DENGYing—jie，ZHANGWei
(SchoolfPharmacy，ShenyangP arm ceuticalUniversity，Shenyang110016，China)
Abstract：ObjectiveTopreparea harminehydrochlorideliposomeformulationwithigh
encapsulationeff ciency．MethodsPref rmulationinvestigationwascarriedouttoobtainthedrug
physicochemicalpropertiessuchassolubilityandlgDinbuffersofdifferentpHvalue．Harmine
hydrochloridewasencapsulatedintoliposomesbyactiveloadingmethod．Encapsulationefficiencyof
liposomeswasdeterminedaft rthefreedrugwaseparatedfromliposomebyultrafiltration．Theinfluence
factorsnthencapsulationefficiencyincludingru —lipidwe ghtratio，incubationtemperature，pHvalue
ofexternalw terphasew reinvestigated．ResultsAsthepHvalueincreasing，thesolubilityofharmine
hydrochloridewasdecreased，whiletheapparentoil—waterdistributioncoefficientwasincreased．Byactive
loadingmethod，theencapsulationefficiencycouldbeover80％whenthedrugtolipidweightra iowas
under1：5．ThepHgradientbe weenintervesicleandintravesicleobviouslyinfluencedthencapsulation
efficiency，whileincubationtemperaturehadlittleeffectonencapsulatione
loadingissuitableforpreparingharminehydrochlorideiposomewithhigh
Keywords：harminehydrochloride；liposome；encapsulationefficiency
去氢骆驼蓬碱(harmine)是骆驼蓬Peganum
harmalaLinn．种子中分离的一种p一咔保啉类生物
碱。去氢骆驼蓬碱具有中枢神经系统和单胺氧化酶
的抑制作用、辐射防护作用、抗包虫作用和广泛的抗
肿瘤活性，用于治疗肝癌等癌症[1]。近年来对去氢骆
驼蓬碱开展了许多新剂型研究，主要有脂质体[z]、乳
剂‘3|、脉冲释放胶囊Ⅲ、微球嘲等。脂质体具有被动
靶向的作用，可使药物较多的分布在肝、脾等巨噬细
胞丰富的器官，从而提高这些器官的血药浓度，降低
全身的药物浓度，对提高去氢骆驼蓬碱抗寄生虫和
抗肝癌疗效、降低药物不良反应等方面起到很好的
作用。
fficiency．ConclusionActive
encapsulationefficiency．
；pHgradient；activeloading
采用乙醚注入法制备去氢骆驼蓬碱脂质体，包
封率仅有30％口]。采用添加双十六烷基磷酸脂
(DCP)负电荷脂类制成去氢骆驼蓬碱多层脂质体，
包封率有所提高，达到65％[6]，但DCP为合成磷脂，
价格较贵，且在体内不能被代谢。为了更好的发挥药
效，需要寻找较高包封率的脂质体的制备方法。pH
梯度法已经成功的将许多弱碱性的药物包封入脂质
体E73，如抗癌药物阿霉素、长春新碱、拓扑替康等，可
以达到很高的包封率。本实验进行了去氢骆驼蓬碱
pH梯度法主动载药研究，以期制得较高包封率的
脂质体。
1仪器和试药
收稿日期：2004—07—01
作者简介：杜松(1975一)，男，黑龙江省佳木斯市人，博士研究生，从事药物新剂型科研工作。
Tel：(024)23917603E—mail：duson975@yahoo．com．cn
万方数据
·674· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
UV一9100型紫外分光光度计(北京瑞利分析
仪器公司)；ZFQ85A型旋转蒸发器(Jk海医械专机
厂)；Lipex挤出仪(Im拿大Northernlipids)；微孔滤
膜(上海新亚净化器厂)；HPLC高效液相色谱仪：
SPD一10AVP紫外可见检测器，LC一10ATVP泵
(日本岛津)。
盐酸去氢骆驼蓬碱(质量分数98％)由新疆医
科大学孙殿甲教授赠送；大豆磷脂(EPIKURON
200，PC质量分数>93％，德国Degussa)；胆固醇
(沈阳市医药公司，进口分装)；甲醇为色谱纯，其他
试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1盐酸去氢骆驼蓬碱的测定
2．1．1色谱条件：色谱柱：KromasilC18(150mm×
4．6mm，5_um)；流动相：甲醇一50mmol／L磷酸(三
乙胺调pH至3)(50：50)；体积流量：0．8mL／
min；柱温：室温；检测波长：320nm；进样量：20肛L。
2．1．2标准曲线的制备：精密称取盐酸去氢骆驼蓬
碱对照品25．0mg，置25mL量瓶中，加水溶解并稀
释至刻度，制得1．0mg／mL对照品溶液。分别精密
吸取该溶液适量，用蒸馏水稀释制成0．1、0．5、3．0、
5．0、10．0、15．0、20．0ptg／mL的系列溶液，按上述
色谱条件进行测定。以峰面积积分值(A)为横坐标，
质量浓度(c)为纵坐标进行线性回归，得回归方程：
C=225144A一1460，r一0．9995，表明盐酸去氢
骆驼蓬碱在0．1～20．0tug／mL与峰面积积分值有
良好的线性关系。
2．2处方前研究
2．2．1不同pH条件下盐酸去氢骆驼蓬碱溶解度
的测定：50mmol／L柠檬酸溶液和150mmol／L碳
酸钠溶液按不同比例混合，配制成pH值分别为
3．62、5．73、6．60、8．16、8．37的缓冲溶液。分别精密
称取去氢骆驼蓬碱对照品适量，置10mL量瓶中，
加不同pH值的缓冲溶液至刻度，超声，制成不同
pH值盐酸去氢骆驼蓬碱过饱和溶液，放置24h，吸
取上清液，0．45肛m微孔滤膜滤过，滤液稀释至线性
范围，按上述色谱条件进行测定，标准曲线法计算去
氢骆驼蓬碱的质量浓度，得去氢骆驼蓬碱不同pH
值下的溶解度，结果见表1。
2．2．2不同pH条件下盐酸去氢骆驼蓬碱表观油
水分配系数的测定：精密吸取不同pH值去氢骆驼
蓬碱溶液5mL，置三角瓶中，分别与水饱和正辛醇
5mL混合，25℃水浴中振摇2h，取出静置，2000
r／min离心10min，取水相适量，用水将其质量浓度
稀释至线性范围，按上述色谱条件进行测定。以初始
水相的药物质量浓度与正辛醇萃取后水相药物质量
浓度差作为正辛醇相质量浓度，计算表观油水分配
系数D=C正辛醇／c水，计算lgD，结果见表1。
表1不同pH缓冲液中盐酸去氢骆驼蓬碱
溶解度和表观油水分配系数
Table1 Solubilityandapparentoil—waterdistribution
coefficientofharminehydrochlOrideinbuff rs
withdifferentpHvalues
2．3盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体的制备
2．3．1空白脂质体的制备：按质量比4：1称取磷
脂和胆固醇，用适量的氯仿溶解，减压蒸发，得磷脂
膜。加入50mmol／L柠檬酸溶液(pH2．O)水化，制
备空白脂质体。将所得的脂质体依次通过0．80、
0．45、0．22tzm微孔滤膜，不同孔径滤膜各滤过5
次，进行整粒，制得粒径均匀的空白脂质体。
2．3．2主动载药工艺：吸取lmL整粒后的空白脂
质体，加入适量10mg／mL盐酸去氢骆驼蓬碱溶液，
并用150mmol／L碳酸钠溶液将外相pH值调至近
中性，置50℃水浴中温育10rain，然后用5％葡萄
糖溶液定容至10mL量瓶中，即得盐酸去氢骆驼蓬
碱脂质体。
2．4影响包封率的因素考察
2．4．1包封率的测定方法：对于含有生物碱的脂质
体来说，阳离子交换树脂可以吸附游离未包封的生
物碱药物，而不吸附含药的脂质体，可以较方便的测
定其包封率。实验中发现盐酸去氢骆驼蓬碱不能被
阳离子交换树脂完全吸附，不宜用此法测定脂质体
的包封率。最终选用超滤法分离游离药物和脂质体，
并采用紫外分光光度法测定包封率。
因不同pH值下药物的紫外吸收值不同，制定
了不同pH值下测定药物的标准曲线。精密称取适
量盐酸去氢骆驼蓬碱对照品，用蒸馏水制成10rag／
mL盐酸去氢骆驼蓬碱溶液。分别取50mmol／L柠
檬酸溶液(pH2．o)0．8mL置10mL量瓶中，加入
150mmol／L碳酸钠溶液0．5mL，加入10mg／mL
盐酸去氢骆驼蓬碱溶液适量，用5％葡萄糖溶液稀
释，分别制成10．0、12．5、15．0、17．5、20．0／19／mL
盐酸去氢骆驼蓬碱对照品溶液，于301nm测吸光
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·675‘
度值(A)。以A为横坐标，质量浓度(c)为纵坐标，
进行线性回归，得回归方程C一0．035A一0．024，
r一0．999(pH6．8)，表明盐酸去氢骆驼蓬碱在
10．o～20．0pg／mL与A具有良好的线性关系。
另外以50mmol／L柠檬酸溶液(pH2．0)0．8
mL，分别加入150mmol／L碳酸钠溶液0．4、0．3
mL，同法制得pH5．9和pH5．3盐酸去氢骆驼蓬碱
溶液，回归方程分别为c一0．050A一0．1236，r一
0．999(pH5．9)和C一0．050A一0．111，r一
0．9998(pH5．3)，表明盐酸去氢骆驼蓬碱在
10．O～20．0弘g／mL(pH5．9)和7．7～23．06_ug／
mL(pH5．3)与吸光度具有良好的线性关系。
吸取盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体适量，用5％葡
萄糖溶液稀释，超滤，滤液用蒸馏水将其质量浓度稀
释到线性范围，在301nm测A，代入标准曲线方程
计算相应的质量浓度，按下式计算包封率。
E一(CT--CH)／cT×100％
E为包封率；C，为加入脂质体中药物总质量浓度；C一为超
滤后的游离药物的质量浓度
2．4．2 不同pH梯度的影响：吸取空白脂质体1
mL各3份，分别加入不同量的150mmol／L碳酸钠
溶液调外相的pH值，用pH梯度法载药。在不同的
pH梯度下，药物的包封率不同，包封率随外水相
pH值的减小而降低，结果见表2。
表2外水相不同pH下药物的包封率
Table2 Encapsulationefficiencyofharminehydrochloride
invariousintravesiclew thdifferentpHvalues
2．4。3温度对包封率的影响：吸取空白脂质体1
mL，加入150mmol／L碳酸钠溶液调节外相pH
6．8，然后加入盐酸去氢骆驼蓬碱6mg，按主动载药
工艺进行载药。孵育温度分别为20、55。C，孵育10
rain。包封率结果见表3。可见温度对脂质体包封率
几乎没有影响，说明药物较容易穿过磷脂膜，达到很
高的包封率。
表3孵育温度对脂质体包封率的影响
Table3 Influenceofincubationtemperature
onencapulationeff ciency
2．4．4 药脂比对包封率的影响：取空白脂质体1
mL3份，各加入150mmol／L碳酸溶液调节外相
pH6．8，按药物与磷脂的质量比为1：20、1：10、
1：5，按主动载药工艺进行载药。脂质体的包封率见
表4。表明药脂比小于1：5时，脂质体的包封率可
达80％以上。
表4药脂比对脂质体包封率的影响
Table4 Influenceofdrug-lipidweightratio
onencapulationefficiency
药脂比／(g·g_1) 包封率／％
3讨论
文献报道去氢骆驼蓬碱的解离常数pKa为
7．70[8|。处方前实验研究表明，在pH值高于6．6时
去氢骆驼蓬碱的溶解度较低，容易析出。而在pH值
低于6．6时，则有较高的溶解度。实验中选择pH值
6．8左右，此时药物具有较高的溶解度和较高的油
水分配系数，可增大脂质体的载药量。
实验中发现孵育温度对药物的包封率影响不
大，与文献报道凹3的小檗碱脂质体主动载药受温度
影响较大的结论不同，可能与药物的理化性质有关。
通常而言，将药物装载于脂质体之中有被动载
药法和主动载药法两大类方法。被动载药法是指药
物的装载和脂质体的形成同时完成。对于水溶性药
物，如果与磷脂没有相互作用，一般被动载药包封率
都不同。这也是以往采用乙醚注入法的包封率不到
30％的原因。引入负电荷脂质双十六烷基磷酸脂
(DCP)制备的多层脂质体，可在pH7．2时与带正电
药物产生相互作用，因而包封率得到一定的提高。
pH梯度主动载药法通常包含两个步骤：即先形成
空白脂质体，随后在脂质体膜内外形成pH梯度，使
加入的药物穿越脂质体膜，主动载人脂质体中。选择
好合适的条件，可以达到较高的包封率。
中药中有众多的生物碱有效成分，采用pH梯
度主动载药法制得高包封率的生物碱脂质体制剂，
可以降低药物不良反应，提高疗效，更好地发挥药物
的作用。
感谢新疆医科大学孙殿甲教授、李岩博士赠送
盐酸去氢骆驼蓬碱。Degussa(德固赛)公司赠送大
豆磷脂。 ·
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知母微粉的溶出及活性研究
张陆军1，王 伟1，邢东明1，盖国胜2，苏慧1，何希辉3，杜力军1
(1．清华大学生物科学与技术系，北京100084；2．清华大学材料系，北京100084；
3．中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京100094)
摘要：目的 观察知母微粉体外成分溶出以及体内活性，对微细化工艺在中药中的应用进行评价。方法采用
HPLC法定量芒果苷，比较知母微粉和知母粉中芒果苷溶出速度及不同时间点溶出百分率；采用小鼠悬尾和强迫
游泳试验，测定最大耐受量，观察知母微粉与知母提取物体内活性和安全性。结果 体外溶出时，知母微粉中芒果
苷的溶出速度较知母粉明显加快，在不同时间点芒果苷的溶出百分率亦有所提高；以相同治疗剂量给药时，知母微
粉与知母提取物表现出相当的作用，知母微粉最大给药剂量为20g／kg。结论知母制成微粉后能在一定程度上改
善体外成分的溶出和体内活性。
关键词：知母；微细化工艺；溶出度
中图分类号：R286．02；R286．1文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)05—0676—04
DissolutionandeffectofAnemarrhenaasphodeloidesmicropowderprepared
bysuperfinecrushingtechnique
ZHANGLu—junl，WANGWeil，XINGDong—min91，GAIGuo～shen92，
SUHuil，HEXi—hui3，DULi—junl
(1．DepartmentofBiologicalSciencesandBiotechnology，TsinghuaUniversity，Beijing100084，China；2．Department
ofMaterials，TsinghuaUn versity，Beijing100084，China；3．InstituteofMed cinalPl nt，Chinese
AcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCo lege，Beijing100094，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheingredientsdissolutionandbioactivitiesofAnemarrhena
asphodeloidesmicropowderpreparedbysuperfinecrushingtechnique．MethodsThedissolutionofthe
markeringredient--mangiferinofthemic opowderwascomparedwiththatofthenormallyprocessed
powderbyHPLCformangiferin；thea ti—depressionffectofthemicropowderanA．asphodeloides
extractwasinvestigatedintailsuspensiontesta dforced-swimmingtest．Meanwhile，toxicitieswere
evaluatedbythedeterminationofthemaximumtolerateddose(MTD)．ResultsThedissolutionvel city
ofmangiferininthemicropowderwasmo eobviouslyimprovedthanthatinthecommonp wderandthe
dissolutionpercentagesatdifferentintervalshadbeenincreasedslightly．Themicropowdershowedas
muchanti—depressioneffectas hatoftheA．asphodeloidesextractwhenadministeredatthesamedosage，
whiletheybothresultedinrelativelyobvioustoxicityreactions(MTDis20kg／g)．ConclusionSuper
finecrushingtechniquecanhelptoimproveth ingredientsdissolutionratea dbioactivitiesofA．
asphodeloidesmicropowderwithoutbringingaboutadditionaltoxicity．
Keywords：AnemarrhenaasphodeloidesBunge；superfincrushingtechnique；dissolution
收稿日期：2004—08—05
基金项目：清华大学基础研究资金资助项目(JC2001050)
作者简介：张陆军(1977一)，男，安徽肥西人，博士研究生，主要从事药动学、心脑血管药理学研究以及中药新产品的研发。
Tel：(OLO)62796270Fax：(010)62773630E—mail：zhanglujuns@163。tom
万方数据
主动载药法制备盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体
作者： 杜松， 邓英杰， 张威， DU Song， DENG Ying-jie， ZHANG Wei
作者单位： 沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(5)
被引用次数： 5次

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