全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1641·
1 000、2000／xs脉冲时间进行电致孔试验2rnin，60
次／min，共120个脉冲，10min取样，测定青藤碱的
质量浓度，计算青藤碱的累积透过量，结果见表3。
可以看出，电致孔脉冲宽度因素对青藤碱累积透过
量亦有影响，并且电致孔脉冲宽度对累积透过量的
影响很大，500弘s条件下10min末的累积透过量为
被动扩散1h末累积透过量的13倍，并且随着脉冲
宽度的延长，累积透过量下降很快，超过1ms以后
累积透过量几乎已经不再增加。根据趋势来看，如果
脉冲时间更短，累积透过量应该还有增大的趋势，进
一步的实验有待于进行。
表3不同脉冲宽度10min末累积透过量
Table3 Accumulativepermeationofsi omenine
invariousp lsewidthsat10min
脉冲宽度／Ps 累{{}{透过塌／pg脉冲宽度／肛s 累积透过鲢／pg
500 792．25() 80() 625．522
6()0 696．575 1 0()0 33．395
700 698．25l 2(1f)() ll8．374
2．8 脉冲次数的影响：固定波形为方波、脉冲宽度1
ms、电压200V，分别使用60、120、180、240、300、
360、420、480脉冲次数进行电致孔试验2min，10
min后取样，测定青藤碱的质量浓度，计算青藤碱的
累积透过量，结果见表4。由结果可知，电致孔脉冲次
数因素对青藤碱累积透过量的影响很大。青藤碱累积
透过量没有随着脉冲次数的增加而增加，而是达到一
定的次数之后累积透过量下降。最佳脉冲次数为240
个脉冲，该脉冲条件下10min末青藤碱的累积透过
量约是被动扩散1h末累积透过量的91．4倍。，
裹4不同脉冲次数10rain末累积透过量
Table4 Accumulativepermeationofsi omenine
invariousn mbersofpulsesat10min
脉冲次数／个 累积透过量／,g 脉冲次数／个 累积透过量／pg
60 l 049．000 300 4 007．115
120 4 700．993 360 3 490．995
180 4 447．5l 420 3 000．000
240 5 220．682 48() 2725．236
3讨论
电致孔条件下的电学参数因素对青藤碱透皮给
药量有很大影响，各种参数影响程度各有不同，脉冲
宽度和脉冲波形影响最大，脉冲时间和脉冲电压影
响次之。本实验初步说明优化的电致孑L条件应用于
中药透皮给药将会有良好的前景。当然目前只进行
了体外实验，活体动物实验还未进行，体外实验是否
和体内实验密切相关，还有待于进一步的证实。
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仙人掌多糖的分离、纯化及性质研究
陶美华“2，曾富华1‘”，章卫民2，梁伊丽1，卢向阳3
(1．湛江师范学院生物系，广东湛江524048；2．广东省微生物研究所，广东广州510070；
3．湖南农业大学生物技术系，湖南长沙410128)
摘要：目的分离、纯化具有降血糖作用的仙人掌多糖组分。方法经热水提取、乙醇沉淀、DEAESepharosefast
flow离子交换色谱和SephadexG系列凝胶滤过色谱纯化得到5种仙人掌多糖组分。醋酸纤维薄膜电泳检测多糖
纯度，凝胶色谱测定相对分子质量，高效液相色谱测定糖的组成。结果5种多糖都已达到电泳纯。它们的相对分子
质量依次为2．0×103、1．0×106、4．0×103、9．2×105、5．0×103。ODPI由鼠李糖组成，ODP2可能由鼠李糖和葡萄糖
组成，ODP4可能由鼠李糖和D一半乳糖组成。ODP3和ODP5分别由鼠李糖和一未知糖组分组成。结论仙人掌多
糖的提取没有必要采用脱蛋白、脱色素步骤．本实验所提取的仙人掌多糖是均一的。
关键词：仙人掌；多糖；纯化；性质
摹全塑阜：亡巷宣高校自然科学基金资助项目(Z03062)；湛江市科技招标计划项目(湛财企[2004198号)
作者简介：堕美华(1978一)，女，湖南长沙人，硕士，从事天然产物开发与利用研究，现在广东省微生物研究所工作。
Tel：(020)31319860E—mail：taomeihua@yahoo．corn．ca
*通讯作者曾富华Tel：(0759)3183622E—mail：zengfuhua@tom．coITI
万方数据
·1642· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
中图分类号：284．2；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)11—1641—05
Isolationandpurificationofpolysaccharidesfromuntiadilleniiandtheirp operties
TAOMei—hual·2，ZENGFu—hual·3，ZHANGWei—rain2，LIANGYi—lil，LUXiang—yan93
(1．DepartmentofBiology．ZhanjiangNorm lCo lege，Zhanjiang524048，China；2-GuangdongInstitute
ofMicrobiology，Guangzhou510070，C ina；3．DepartmentofBiotech ology，
HunanAgriculturalUniversity，Changsha410128，China)
Abstract：ObjectiveToisolate，purify，andidentifytheOpuntiad lleniipolysaccharide(ODP)．
MethodsFreshcactuswasextractedbyhotwater，precipitatedbye hanol，fractionatedbyDEAE
Sepharosefa tflow，separatedbySephadexGseries，andtreatedbyfreeze—drying．Aftertheabovepu ifi—
cation，fivepolysaccharideswereobtained．Purityofthemwasexaminedbyelectrophoresis，relative
molecularweightofthemwasmeasuredbygelchromatography，andchemicalcompositionwasdetermined
byHPI．C．ResultsA lofODPwereprovedtobehomogenous，relativemolecularweightof hemwere
2．0×103，1．0×106，4．0×103，9．2×105，and5．0×103．ODPIwascomposedofrhamnoseonly，ODP2
wasmadeupofrhamnoseandD—glucose，ODP4containedrhamnoseandD—galaetose，()DP3andO 5
consistedofrhamnoseandanotherunidentifiedmonosaccharide。respectively．ConclusionThdepro—
teinizedordecolorizedprocedureiSnotnecessaryforthepurificationofODP，andallof()DPareidentified
tObehomogenous．
Keywords：OpuntiadilleniiH w．；polysaccharide；purification；property
仙人掌OpuntiadilleniiHaw．为仙人掌科石竹
目双子叶植物，有抗炎、免疫、降血糖、抗溃疡等作
用。仙人掌中的多糖(Opuntiadilleniipolysaccha—
ride，ODP)是仙人掌具有多种功效的原因之一。关
于仙人掌药理作用的报道很多[1“]，但鲜有具有药
理作用的化学成分分离、纯化的报道[7“]。本实验室
已从仙人掌中提取出粗多糖，经动物实验证明其具
有降血糖作用卟]。现对仙人掌粗多糖分离纯化，拟进
一步探讨化学成分与降血糖活性之间的关系。
l材料和仪器
新鲜仙人掌采自湛江东海岛附近，经湛江师范
学院陈燕鉴定。阿拉伯糖、半乳糖、木糖、鼠李糖、葡
萄糖、考马斯亮蓝G一250、DEAE—Sepharosefast
flow、SephadexG一75、SephadexG一200、蓝色葡聚糖
BlueDextran一2000等为进口或进口分装试剂，其他
试剂均为国产分析纯。KDM型调温电热套(鄄城华
鲁电热仪器有限公司)；RE一52A旋转蒸发器(上海
亚荣生化仪器厂)；Bio—Rad低压色谱系统、Labo—
conco冷冻干燥机。
2方法与结果
2．I仙人掌粗多糖的提取：颏鲜仙人掌(挖除刺状
叶)称质量，固定捣碎，浸提，滤过，减压浓缩，以乙醇
沉淀，离心分离，干燥，洗涤，并真空干燥，称质量，即
得粗多糖。
2．2仙人掌粗多糖的组成分析：采用苯酚一硫酸法，
以半乳糖、阿拉伯糖按质量比3：1作标准曲线，测
定总糖；DNS法测定还原糖；考马斯亮蓝法测定蛋
白质；定磷法测定核酸。结果含多糖、还原糖，蛋白
质、核酸的量分别为48．98％、3．38％、9．86％和
7．35％。用碘化铋钾试剂、硅钨酸试剂、苦味酸试剂、
碘一碘化钾试剂鉴定生物碱，用醋酐一浓硫酸试剂、三
氯化锑试剂、lo％三氯醋酸试剂鉴定甾体类化合物。
结果棕色环试验、蒽酮一硫酸法检测呈阳性，淀粉试
、
验呈阴性，双缩脲试验稍微变红，茚三酮试验颜色稍
微变化。
2．3粗多糖的分离纯化
2．3．1离子交换色谱结果：采用DEAESepharose
fastflow离子交换柱(30cm×2．5em)进行色谱分
离，用含有0．02、0．1、0．3mol／LNaCl的Tris—HCl
缓冲溶液(pH8．0)以0．6mL／min依次洗脱，6
mE／管分部收集。再采用SephadexG系列凝胶滤过
柱(75cm×1．5cm)进行色谱分离，用0．05mol／I。
NaCl溶液以0．15mL／min洗脱，3mL／管分部收
集，冷冻干燥得多糖样品。
苯酚一硫酸法测定各收集管在490nm处吸光
度，作多糖洗脱曲线，合并主峰部分；低压色谱系统
紫外检测仪记录280nm(蛋白质)紫外吸收曲线。各
峰百分比一各组分多糖量／各组分多糖量之和×
万方数据
中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月‘1643。
100％，回收率=各组分多糖量之和／进样多糖量×
100％。
由图1和表1可知，仙人掌多糖至少存在3个
主要组分峰，各组分中都含有少量的蛋白质组分。按
出峰顺序，将此3个洗脱峰组分分别命名为组分I、
组分1I、组分难。经计算，离子交换色谱回收率达
85．04％，分离效果好。
管数
图l 仙人掌粗多糖过DEAESepharosefast
flow离子交换色谱的洗脱曲线
Fig．1ElutionprofileofODPonDEAESepharosefast
flowcolumnio —exchangechromatography
表1仙人掌粗多糖的DEAESepharosefastflow
离子交换色谱
Table1 DEAESepharosefastflowion—exchange
chromatographyofODP
2．3．2分子筛色谱结果：根据“当被分离物质的
K。值约为0．5时，其凝胶滤过的分离效率最高”[9]
的原理，来判断分离效果。
(1)SephadexG一75分离仙人掌多糖组分I：通
过反复试验，确定采用SephadexG一75对组分I洗
脱。柱床体积y。为120rnI。，蓝色葡聚糖BlueDex—
tran一2000柱色谱测得y。为37mI。。从洗脱曲线得
知，洗脱到第28管出现最高峰，即y。为84mI。，根
据K。，=(y。一V。，)／(y。～y。)，计算得K。。一0．57，凝
胶分离效率高(图2)。结合蛋白质洗脱曲线可知分
离过程除去了微量蛋白质组分。收集多糖峰组分，并
命名为()DPI。
(2)SephadexG一200分离仙人掌多糖组分Ⅱ：
采用SephadexG一200对组分Ⅱ进行洗脱(图3)。测
得y。为44mL，柱床体积U为125mI，。洗脱过程
得到了两个组分峰，按洗脱顺序分别命名为ODP2、
ODP3。第一峰不含有蛋白质组分，洗脱到第15管出
峰，即玑，为45mL，第二峰含有蛋白组分，洗脱到第
37管出峰，即y。：为111mL，经计算得K。，。=0．01、
管数
图2仙人掌多糖组分1的SephadexG一75洗脱曲线
Fig．2ElutionprofileofODPpartI
onSephadexG一75column
臀数
图3仙人掌多糖组分ⅡSephadexG一200洗脱曲线
Fig．3EhtionprofileofODPpartⅡ
onSephadexG一200column
K。：一0．83，两个峰组分的分离效率都不高。ODP3
在收集后采用孔径更小的凝胶进一步分离，发现它
仍为单一组分(实验结果未列出)。
(3)SephadexG一200分离仙人掌多糖组分m：
采用SephadexG一200对组分Ⅲ洗脱(图4)。测得E，
为40mI。，柱床体积矿。为125ml。。第一峰为洗脱到
第15管出峰，即V。．为45mI。，第二峰为洗脱到第
29管出峰，即y。：为87mI。，经计算得K圳一0．06、
K州一0．55，第二峰分离效率高。但组分m的第一峰
和第二峰有重叠，总分离效率不高。结合蛋白质洗脱
曲线可知，第一峰、第二峰为多糖峰，在第二峰洗脱
出来后约120rain，分离除去一微量蛋白质峰。收集
多糖峰组分，按洗脱顺序，分别命名为ODP4、
ODP5。
通过上述分析和实验结果分析(表2)可知，离
子交换色谱所得组分I、组分Ⅱ、组分Ⅲ经浓缩处理
后，上柱SephadexG一75、SephadexG一200、
SephadexG一200，分离得到ODPI、ODP2和ODP3、
ODP4和0DP5，其回收率分别为93．25％、
88．30％、78．90％，分离效果较好。
2．4仙人掌多糖的纯度鉴定：采用醋酸纤维薄膜电
泳法。电极液为0．05mol／L、pH8．0硼砂缓冲液，
电压110V，电流11mA／em2，时间30min，1％甲苯
万方数据
·1644· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
管数
图4仙人掌多糖组分皿SephadexG-200洗脱曲线
Fig．4ElutionprofileofoDPpartⅢ
onSephadexG一200column
表2 SephadexG系列分子筛色谱洗脱结果
Table2 ResultofSephadexGseriesmolecular
sievechromatography
分析 多糖质 各组分多糖 进样量／ 各峰比 回收率
指标 毓／rag 之合／rag mg 例／％ ／％
()I)Pl2．90 2．90
()I)P23．13
【)I)P3 ()．72 3．85
()I)P13．15 ，1．：{(J
()I)P51．15
3．11 100 ()3．25
81．30
4．36 18．7() 88．3()
5．15 73．26
26．74 78．90
胺蓝染色，90％乙醇脱色，冰醋酸一乙醇(15：85)混
合液透明，观察电泳区带。5种多糖样品电泳结果都
为单一区带。表明它们为电泳纯。
2．5 多糖的相对分子质量测定：采用SephadexG一
200凝胶色谱柱，用不同相对分子质量的标准葡聚
糖洗脱体积对其相对分子质量对数作回归分析，制
作回归直线及方程，将()DPI、()DP2、ODP3、ODP4、
()DP55种多糖组分的洗脱体积代入方程，求得5
种多糖组分的相对分子质量分别为2．0×103、
1．0×106、4．0×103、9．2×105、5．0×103。
2．6 多糖的组成分析：取样品多糖40mg，加入4
mol／l。H：SO。4ml。，安瓿管封管，100℃水解8h，冷
却；用BaCO。中和，滤过得上清液，于45C下减压
浓缩至干，加入双蒸水定容至1．0mI。。再将20
mg／ml。单糖对照品和仙人掌多糖酸水解样品进行
高效液相色谱分析单糖组成。高效液相色谱条件为：
30C柱温的Agilentcarbohydrate柱，体积流量
1．5mI。／rain，乙腈一水(75：25)的流动相，示差折光
检测器检测。
对单糖对照品在HPI。C上的保留时间和仙人
掌多糖酸水解样品在HPI，C上的保留时间比较(表
3)，考虑到实验误差，认为ODPI由鼠李糖组成，
ODP2可能由鼠李糖和葡萄糖组成，oDP4可能由
鼠李糖和D一半乳糖组成，ODP3和ODP5组成成分
中含有鼠李糖，但由于缺少单糖对照品，它们的第二
峰都不能确定是何种糖类。其具体组成有待进一步
表3多糖的组成分析
Tab3 Analysisofp0Iysaccharides
研究。
3讨论
考虑到工业化大规模生产需要，仙人掌多糖的
分离纯化采用了廉价的水提一醇沉法。虽然此法所需
的乙醇较多，但可以对旋转蒸发出来的废液重蒸，回
收乙醇，工艺总成本低。
实验中未采用脱蛋白、脱色素步骤，既减少了仙
人掌多糖提取工艺所需消耗的时间，也有利于对仙
人掌多糖进行药理学实验研究。从实验结果可以看
出，利用物质之间的物理吸附、离子交换力和相对分
子质量的不同，可以将多糖和未与多糖结合的蛋白
质分离开来。如在组分I、组分Ⅲ的分子筛柱色谱过
程中，各自分离出一个蛋白质组分。
本实验发现仙人掌5种多糖样品中都含有鼠李
糖组分，据文献报道[1”。2]，仙人掌粘液质是一种阿
拉伯半乳聚糖，主链为(1—4)连接的半乳糖。本实验
结果和文献报道不一致。分析原因，可能与多糖的分
离纯化工艺不同有关，亦可能是发现了仙人掌多糖
新的化学成分，这有待进一步证实。
笔者发现，仙人掌多糖对糖尿病小鼠模型有明
显的降血糖作用，推测可能与调节免疫机能有关‘引。
但是，分离所得的5种仙人掌多糖与仙人掌降血糖
作用的关系，还有待进一步研究。
致谢：高效液相色谱实验得到了余炳生教授的
大力帮助。
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苦荞茎叶粉中总黄酮酶法提取工艺研究
王敏‘，高锦明2
(1．西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西杨陵
，王 军I，王丽云‘
712100；2．西北农林科技大学理学院，陕西杨陵712100)
摘 要：目的 研究苦荞茎叶粉中总黄酮酶法提取工艺。方法 苦荞茎叶粉经纤维素酶处理后用水提取总黄酮，研
究酶加酶量、解温度、酶解时间和pH值对总黄酮得率的影响。结果 酶法提取的最佳工艺条件为：酶解温度55(、，
加酶量3．0肛L，pH值6．5．酶解90rain，再在90(、下提取3次．每次30rain，总黄酮得率可达、1．47％。结论纤维
素酶适用于苦养茎叶粉中总黄酮的辅助提取。
关键词：苦荞茎叶粉；总黄酮；纤维素酶；正交试验
中图分类号：R28，1．2，R284．06文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)11—16 5一04
Extractingtechnologyoftotalf avonesi powderofFagopyrumtataricum
stemandleafbyenzymatictreatment
WANGMin‘，GA()Jin—min92，WANGJunl。WANI．i—yun
(1．CollegeofFoodScienceandEngineering．NorthwestAgricultureandForestryUniversity·Yangling712100，
China；2．CollegefScience，NorthwestAgricul ureandForestryUniversity，Yangling712100，China)
Abstract：ObjectiveToop mizethextractingtechnologyoftotalf avonesinpowderofFagopyrum
tataricttms eandleafbyenzymatictreatment．MethodsThepowderwastreatedbycellulasebeforeex—
tractedusingwater，theeff ctsofenzymedosage，treatmenttemp rature，treatmenttime，andpHvalue
onthextractra eoftotalf avonesweretudied．ResultsTheoptimumextractingtechnologywasasfol—
lows：enzymatictreatmentt mperature：55C， nzymedosage：3．0tA，，pHvalue：6．5，treatmenttime：
90min，extracting3timesat：90Cfor30minonce．Theextractra eoftotalf avoneswa1．47％bythis
technology．ConclusionCel lasecouldbeappliedntheassisstantextractionoft talf avonesinpowder
ofF．tataricumsteandleaf．
Keywords：thepowderofFagopyrumtataricum(I。．)Gaerthstemandleaf；totalfl vones；cellulase；
orthogonaltest
荞麦为蓼科双子叶药食兼用植物，主要有两个
栽培种：一是鞑靼荞麦Fagopyrumtataricum(L．)
Gaertn．，也称为苦养(tartarybuckwheat)，一是普
通荞麦F．esculentumMoench，也称为甜荞(buck一
收稿日期：2006—03—17
基金项目：科技部攻关计划重大项目(2003BA901A19)；西安市2003年农业科技攻关计划项目(NG200317)
作者简介：王敏(1967一)，女，河南堰城人，副教授，博士，主要从事食品营养与功能食品研究。
Tel：(029)87092816E—mail：wangmin20050606@163．com
万方数据
仙人掌多糖的分离、纯化及性质研究
作者： 陶美华， 曾富华， 章卫民， 梁伊丽， 卢向阳， TAO Mei-hua， ZENG Fu-hua， ZHANG
Wei-min， LIANG Yi-li， LU Xiang-yang
作者单位： 陶美华,TAO Mei-hua(湛江师范学院,生物系,广东湛江,524048;广东省微生物研究所,广东
,广州,510070)， 曾富华,ZENG Fu-hua(湛江师范学院,生物系,广东湛江,524048;湖南农业
大学,生物技术系,湖南,长沙,410128)， 章卫民,ZHANG Wei-min(广东省微生物研究所,广东
,广州,510070)， 梁伊丽,LIANG Yi-li(湛江师范学院,生物系,广东湛江,524048)， 卢向阳
,LU Xiang-yang(湖南农业大学,生物技术系,湖南,长沙,410128)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 6次

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本文读者也读过(8条)
1. 兰琦杰.曾富华.张松莲.LAN Qi-jie.ZENG Fu-hua.ZHANG Song-lian 仙人掌粗多糖提取条件的优化[期刊论文]-
湛江师范学院学报2006,27(6)
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3. 黄漫青.陈湘宁 仙人掌多糖的研究进展[期刊论文]-粮油加工与食品机械2004(1)
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5. 王素芳.黄娇.WANG Su-fang.HUANG Jiao 仙人掌多糖的分离纯化研究进展[期刊论文]-浙江万里学院学报
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7. 曹敏.卢汝梅 仙人掌多糖的研究进展[期刊论文]-中外健康文摘2009,6(15)
8. 倪沁颜.陈丹红 鸡腿菇多糖的分离纯化与结构的初步研究[期刊论文]-福建轻纺2011(1)

引证文献(6条)
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2.杨小舟.黄卫.曾富华.饶力群 仙人掌多糖对高脂血症大鼠体内抗氧化作用的研究[期刊论文]-时珍国医国药
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3.黄卫.曾富华.杨小舟.饶力群.康亚丽.卢建岳.李建华 仙人掌多糖对高脂血症大鼠血脂的影响[期刊论文]-中医研
究 2008(6)
4.赵龙岩.张松莲.袁清霞.程杰.陈晓慧.吴艺华.曾富华 仙人掌多糖主要组分成分分析及其对体外培养免疫细胞的
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5.曾富华.赵龙岩.饶力群 仙人掌多糖研究进展与开发利用前景[期刊论文]-中国生化药物杂志 2011(5)
6.曹敏.卢汝梅 仙人掌多糖的研究进展[期刊论文]-中外健康文摘 2009(15)


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