全 文 ：中草吗 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12,El·1813·
RP—HPLC法测定山茱萸生品和酒制品中没食子酸、
5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素
杜伟锋1，蔡 皓1，丁 霞1’2，蔡宝昌1．
(1．南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室，江苏南京210029；2．南京农业大学，江苏南京210095)
摘要：目的 建立用RP—HPI，C法同时测定llJ茱萸生品和酒制品中没食子酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素的
方法，同时进行比较。方法分别用水煎煮和甲醇超声两种方法提取山茱萸生、制品，用RP—HPI，C法测定4种成分
并进行比较。结果 甲醇超声提取液中没食子酸、5一羟甲基糠醛的量分别上升了250％、1200％，莫诺苷、马钱索的
量分别下降了27．7％、9．9％；水煎提取液中没食子酸、5一羟甲基糠醛的量分别上升了222％、250％，莫诺苷、马钱素
的量分别下降了24．5％、11．7％。结论该方法可用于同时测定山茱萸生品和酒制品中没食子酸、5一羟甲基糠醛、
莫诺苷和马钱素的量；山茱萸经酒蒸制后，4种有效成分的变化很大。
关键词：山茱萸；炮制；没食子酸；5-羟甲基糠醛；莫诺苷；马钱素；高效液相色谱
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1813一03
山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus
珊cinalisS eb．etZucc．的干燥成熟果肉。临床上
多用山萸肉、酒山萸肉。山萸肉长于敛汗固脱，用于
自汗或大汗不止，阴虚盗汗；经酒蒸制后。补益肝肾
作用增强，多人滋补方剂，常用于治疗眩晕耳鸣、阳
痿遗精、遗尿、尿频、月经过多或崩漏、腰部酸痛等
症r】]。目前普遍认为莫诺苷、马钱素、没食子酸、熊果
酸、齐墩果酸、多糖等是山茱萸的主要有效成分。本
实验室前期研究发现，被认为有一定副作用的5一羟
甲基糠醛在山茱萸炮制前后变化很大，而且药理实
验证实其具有保护肝肾、抗氧化等良好的药理活性，
因此被本实验选为测定指标之一。本实验采用RP—
HPLC法对山茱萸生品和制品的不同溶媒提取液中
的没食子酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素进行了
分析比较，旨在为制定山茱萸炮制工艺标准和阐明
其炮制机制提供依据。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，MettlerAG285
电子天平(O．01mg)，BuchiV800旋转蒸发仪，KQ一
500E型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
山茱萸药材购自河南省西峡县山茱萸医药公
司，经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为山茱萸C．
officinalisSieb．etZucc．的干燥成熟果肉；山茱萸
酒制品，由南京中药饮片厂按《中国药典>>2005年版
加工制得；将以上药物粉碎，过筛，取60目以下粉末
放人真空干燥箱内于50，C下干燥24h，取出后放入
干燥器内，备用。
5一羟甲基糠醛对照品(质量分数≥99％)购自上
海有思生物技术有限公司；莫诺苷、马钱素对照品
(质量分数≥99．5％)，实验室自制；没食子酸对照品
为分析纯，购自中国医药集团上海化学试剂公司；甲
醇、磷酸为分析纯，乙腈为色谱纯，水为重蒸水。
2方法与结果
2．1供试品溶液的制备
2．1．1水煎样品供试品溶液的制备：称取山茱萸生
品和制品粉末各2g，精密称定，分别置50mI。烧杯
中，加20mL蒸馏水，水浴煮沸30min，滤过，药渣再
加20mI。蒸馏水，煮沸20min，滤过，合并滤液，浓缩
至40mL，加乙醇至含醇量为80％，4℃冷藏过夜，滤
过，滤液减压回收溶剂，残留物加甲醇溶解，滤过，滤
液用甲醇定容至50mL，即得。
2．1．2甲醇提取样品供试品溶液的制备：称取山茱
萸生、制品粉末各1g，精密称定，分别置50mI。锥形
瓶中，加25mL80％甲醇，密塞，称定质量，超声提取
45min，再次称定质量，用甲醇补充丢失的质量，即得。
2．2对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品
适量，用甲醇溶解并定容，得质量浓度为618gg／mL
的对照品母液。精密吸取一定量母液，加甲醇定容配
制成质量浓度为30．9、61．8、123．6、185．4、247．2、
309ttg／mL系列对照品溶液，备用。
收稿日期：2008—04—01
基金项目：国家“十五”科技攻关课题(2001BA701A11)
作者简介；杜伟锋(1984)．男，河北任县人。硕士，从事中药复方研究和新药开发。
Tel：(025)86798281E—mail：duweifeng200158@sohu．tom
*通讯作者 蔡宝昌 Tel：(025)51995100E—mail：bccai@hotmail．tom
万方数据
·1814· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12,El
精密称取5一羟甲基糠醛对照品适量，用甲醇溶
解并定容，得质量浓度为500yg／mI。的对照品母液。
精密吸取一定量母液，加甲醇定容配制成质量浓度
为25、50、100、125、200、250弘g／mL系列对照品溶
液，备用。
精密称取莫诺苷对照品适量，用甲醇溶解并定
容，得质量浓度为474pg／mL的对照品母液。精密吸
取一定量母液，加甲醇定容配制成质量浓度为23．7、
59．2、119、237、356、474pg／mL的系列对照品溶
液，备用。
精密称取马钱素对照品适量，用甲醇溶解并定
容，得质量浓度为146肛g／mL的对照品母液。精密吸
取一定量母液，加甲醇定容配制成质量浓度为7．3、
18．3、36．5、73、110、146弘g／mL系列对照品溶液，
备用。
2．3色谱条件：LichrospherC18色谱柱(250mm×
4．6mm，5pm)；流动相为乙腈一0．1％磷酸水溶液，
梯度洗脱，o～5min，2％乙腈，5～10min，5％乙腈，
10～30rain，10％乙腈；30～50rain，15％乙腈，50～
60min，45％乙腈，60～70min，65％乙腈，70～80
rain，85％乙腈，80～90min，100％乙腈；检测波长：
218nm(没食子酸)、284nm(5一羟甲基糠醛)、240
nm(莫诺苷和马钱素)；柱温：30℃；体积流量：
1 mL／min。色谱图见图1。
C
I
A
b
靠
i
B
p．J．．^
，t／min
a一没食子酸b一5一羟甲基糠醛c一莫诺苷d一马钱素
a-gallicacidb一5一hydroxymethylfurfuralc—morroniside
d-Ioganin
图1混合对照品(A)和山茱萸生品(B)、制品(C)
甲醇超声提取的HPLC图谱(240nm)
Fig．1HPLCChromatogramsfmirturereference
substance(A)andsamples(BandC)(240nm)
ultrasonicallyextractedbymethanol
2．4方法学考察
2．4．1标准曲线的绘制：精密吸取没食子酸和5一羟
甲基糠醛系列对照品溶液各进样10弘L，测定，以质
量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计
算得没食子酸回归方程为Y=76．237X一27．215，
r一0．9995，线性范围为30．9～309肛g／mL；5一羟甲
基糠醛的回归方程为Y=72．933X～41．15，r=
0．9998，线性范围为25～250yg／mL。
精密吸取莫诺苷和马钱素系列对照品溶液各进
样20pL，测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐
标绘制标准曲线，计算得莫诺苷回归方程为Y=
29．645X+56．656，，．一0．9999，线性范围为47．4～
948弘g／mL；马钱素的回归方程为Y一46．201X+
62．875，r=0．9991，线性范围为14．6～2929 ／mL。
2．4．2精密度试验：分别精密吸取制品的甲醇提取
供试液、水煎液10肛L，各连续进样6次，测得没食子
酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素峰面积的RSD
分别为0．99％、1．58％；0．72％、0．62％；0．71％、
1．15％；0．90％、1．05％。
2．4．3 重复性试验：称取制品粉末1g，精密称定，
共5份，制备甲醇提取供试品溶液，进样10肛L测定，
测得没食子酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素峰面
积的RSD分别为1．73％、3．31％、1．54％、0．69％；
同法，再称5份，提取方法同水煎样品的制备，进样
1 肛L测定，测得没食子酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷
和马钱素峰面积的RSD分别为2．01％、3．33％、
1．49％、1．98％。
2．4．4稳定性试验：分别取山茱萸制品的甲醇提取
供试液、水煎液，分别于0、2、4、8、12h进样10肛L测
定，测得没食子酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素
峰面积的RSD分别为1．27％、2．04％；0．74％、
0．57％；1．53％、2．14％；0．99％、1．22％，可见两种
供试品溶液在12h内都较稳定。
2．4．5加样回收率试验：称取制品粉末1g，精密称
定，共5份，分别加入2．75mg没食子酸、8．20mg5一
羟甲基糠醛、13．60mg莫诺苷和11．60mg马钱素
对照品，提取方法同甲醇提取样品的制备，进样测
定，计算，结果没食子酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马
钱素的回收率和RSD分别为99．50％、2．66％；
100．40％、1．30％；99．78％、1．96％；100．48％、
1．84％。
同法，再称5份，分别加入2．90mg没食子酸、
8．40mg5一羟甲基糠醛、14．20mg莫诺苷和12．80
mg马钱素对照品，方法同水煎样品的制备，计算，
结果没食子酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素的回
收率和RSD分别为102．83％、1．35％，101．79％、
4．32％，95．14％、2．67％，99．98％、1．41％。
2．5测定：吸取山茱萸生、制品供试品溶液，按上述
色谱条件测定，结果见表1。
万方数据
中革黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月· 815·
表l山茱萸炮制前后有效成分的比较(万一3)
Table1 QuantitativeanalysisofactivecompositionsincrudeandprocessedFructusCornis(辟一3)
3讨论
5一羟甲基糠醛主要是由己糖经加热分解产生，
广泛存在于含有糖类物质的植物和食品中，一般在
炮制或加热后其量会增加[2]。本实验发现山茱萸酒
蒸品中5一羟甲基糠醛的量较生品中明显增加，这证
实了蒸制能增加5一羟甲基糠醛的量；另外，还发现生
品水煎煮提取物中5一羟甲基糠醛的量也较甲醇超声
提取物中的高出约3倍，而制品则差别不大，这也证
实了加热对5一羟甲基糠醛的量确有很大的影响。
本实验建立了在同一高效液相色谱条件下测定
山茱萸中没食子酸、5一羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素
峰的分析方法，这为进一步研究山茱萸炮制前后指
纹图谱奠定了基础，也为制定山茱萸炮制工艺标准、
探讨其炮制机制提供了依据。
目前普遍认为5一羟甲基糠醛有一定的毒副作
用，但近几年来研究表明它还具有抗氧化、改善血液
流变学等对人体有利的作用心]。本实验室的研究发
现山茱萸二氯甲烷部位具有特异性体液免疫增强作
用，经分离分析得知其主要成分为5一羟甲基糠醛。此
外，药理实验还表明5一羟甲基糠醛对小鼠急性肝损
伤具有保护作用，对H。O。所致血管内皮细胞SOD
活力减低有逆转作用，可保护血管内皮细胞。因此，
5一羟甲基糠醛可以作为山茱萸的一个重要指标活性
成分，这为制定山茱萸炮制工艺标准，研究山茱萸炮
制机制提供了新的思路。
参考文献：
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代化，2005，7(6)t52—56．
总丹参酮不同纯化工艺的比较
吴婉莹，杨 洲，侯晋军，果德安
(中国科学院上海生命科学研究院药物研究所，上海201203)
摘 要：目的 比较总丹参酮不同的纯化工艺，以期寻找到一种有效部位质量分数大于50％，方便可行，适于大生
产的提取工艺。方法 以总丹参酮和丹参酮Ⅱn的质量分数作为考察指标，对水沉和大孔树脂纯化工艺进行考察。
结果 水沉后上大孑L树脂再纯化及直接上大孑L树脂纯化所得总丹参酮质量分数与直接醇提水沉所得结果没有显
著性差异。结论采用醇提水沉即可得到符合要求的总丹参酮。
关键词：丹参；总丹参酮；醇提水沉；大孔吸附树脂；纯化
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1815一04
丹参为唇形科植物丹参Salviamiltiorrhiza
Bunge的干燥根及根茎，其活性成分为水溶性酚酸
类成分和脂溶性丹参酮类成分，其中脂溶性成分主
要有丹参酮IIA、异丹参酮、隐丹参酮等‘1‘。丹参中脂
溶性成分提取工艺已有相关研究报道‘2’3]，但对于适
于生产的获取高质量分数的丹参酮的研究报道较
少。根据丹参酮的性质，本实验采用95％乙醇提取
后，分别考察了不同的纯化工艺，并以总丹参酮、丹
收稿日期：2008—04．07
基金项目：上海市科委中药现代化专项项目(05DZl9701)
作者简介：吴婉莹(1973一)，女，黑龙江省哈尔滨市人，副研究员，博士。从事新药的研究与开发以及中药制剂及药代动力学的研究，在
该领域已发表论文10余篇。Tel：(021)50805522—2208Fax：(0 1)50272789E—mail：wuwanyin9902@yahoo．com．ca
万方数据
RP-HPLC法测定山茱萸生品和酒制品中没食子酸、5-羟甲基糠
醛、莫诺苷和马钱素
作者： 杜伟锋， 蔡皓， 丁霞， 蔡宝昌
作者单位： 杜伟锋,蔡皓,蔡宝昌(南京中医药大学,江苏省中药炮制重点实验室,江苏,南京,210029)，
丁霞(南京中医药大学,江苏省中药炮制重点实验室,江苏,南京,210029;南京农业大学,江苏
,南京,210095)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(12)
被引用次数： 7次
参考文献(2条)
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