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黑木耳多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的影响



全 文 :皮下沉积, 促进动脉粥样硬化的形成。因此, 通过饮
食或药物调节脂质代谢, 对于防治心脑血管疾病的
发生与发展有重要意义。本实验表明鲜姜有效部位
能明显降低高脂血症大鼠的 T G 和 LDL 2C, 升高
HDL 2C, 说明其对动脉粥样硬化有防治作用。NO 为
血管内皮细胞合成释放的内皮舒张因子 (EDR F ) ,
能舒张血管, 抗血小板聚集, 阻止血 (白)细胞之间及
其与血管内皮细胞之间的黏附, 抑制血管平滑肌细
胞增殖和迁移, 抑制内皮素的生成, 并能清除氧自由
基, 抑制氧化型低密度脂蛋白 (ox2LDL ) 的形成和
细胞膜脂质过氧化。这些作用对于维持血管功能的
完整性和血管通透性, 防止动脉粥样硬化形成有重
要意义[5 ]。当血管内皮细胞受损伤时,NO 合成与释
放减少, 上述作用减弱, ox2LDL 生成增加, 易致动
脉粥样硬化的发生[6 ]。此外, 增加的 ox2LDL 还可通
过干扰受体介导的细胞内NO 的前体物质 L 2精氨
酸的储备, 抑制 L 2精氨酸的合成及释放, 使一氧化
氮合酶 (NO S) 表达下调等, 进一步减少 NO 的合
成, 这就造成了动脉粥样硬化发生发展的恶性循环。
本实验发现, 采用免疫损伤加高脂饲料喂养的方法
可显著降低大鼠血清NO 水平, 表明血管内皮细胞
受损伤, 其分泌 NO 的功能受到抑制, 内源性保护
作用减弱。鲜姜有效部位能升高血清中NO , 提示其
可能对血管内皮细胞具有保护作用。有报道鲜姜能
不同程度地抑制或清除体内的自由基, 减少LDL 2C
氧化[4, 7 ] , 其内皮保护作用可能与此有关, 相关机制
尚需进一步探讨。
鲜姜有效部位较完整的保留了鲜姜的主要有效
成分, 且为固体物质, 开发应用更加方便。本实验证
实了其对动脉粥样硬化的有益作用, 具有较好的开
发前景。
References:
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44324501
黑木耳多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的影响
张秀娟1, 2, 耿 丹2, 于慧茹2, 季宇彬1Ξ
(11 哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学发展中心生物安全评价研究所, 黑龙江 哈尔滨 150076;
21 哈尔滨商业大学药学院, 黑龙江 哈尔滨 150076)
  黑木耳 A u ricu la ria au ricu la (L. ex Hook. )
U nderw. , 为我国珍贵药用及食用保健补品 , 具有
活血和扶正固本的功效。黑木耳多糖作为其中的有
效成分之一, 具有多种生物活性, 如抗肿瘤、促进机
体免疫功能, 并有抗衰老和保护细胞作用。本实验研
究黑木耳多糖对 S180和 H 22荷瘤小鼠红细胞膜流动
性和免疫黏附能力的影响。
1 材料
111 实验动物及瘤株: 昆明种小鼠, 雌雄各半, 体重
18~ 22 g, 由哈尔滨市汉方实验鼠类养殖所提供。瘤
株: S180及 H 22荷瘤小鼠购自哈尔滨医科大学附属市
肿瘤医院肿瘤研究所。
112 药品与试剂: 精制黑木耳多糖为酶解法提取,
含多糖 9115% , 由哈尔滨商业大学食品工程学院马
永强教授提供。1, 62二苯21, 3, 52己三烯 (D PH ) 为
Sigm a 产品, 溶解在四氢呋喃中配成 2×10- 3 mo lö
·49· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2005203227
基金项目: 黑龙江省自然科学基金资助项目 (D 0221) ; 哈尔滨市科技局学科后备带头人基金资助项目 (2002A FXXJ029)
作者简介: 张秀娟 (1962—) , 女, 吉林人, 教授, 博士研究生, 研究方向为抗肿瘤药物研究。
Tel: (0451) 86329239 E2m ail: zx j1717@yahoo. com. cn
L , 保存在棕色瓶中, 实验前用等渗 PBS 稀释成 2×
10- 6 mo löL。黄芪多糖由黑龙江省生物制品一厂提
供 (批号 200111)。肝素钠由上海旭东海普药业有限
公司提供。52氟脲嘧啶 (52Fu) , 上海旭东海普药业
有限公司, 批号 031002。生理盐水由哈药六厂提供。
豚鼠血清由哈尔滨医科大学提供。
2 方法与结果
211 黑木耳多糖对 S180荷瘤小鼠瘤质量的影响: 将
昆明种小鼠随机分为 6 组, 每组 10 只。分别为黑木
耳多糖高、中、低剂量 (200、100、50 m gökg) 组及模
型对照 (生理盐水) 组, 黄芪多糖 (100 m gökg) 组和
52Fu (25 m gökg) 阳性对照组。无菌条件下抽取接
种 7 d、生长良好的 S180荷瘤小鼠腹水, 用无菌生理
盐水 1∶4 稀释, 按每只 012 mL , 腋下接种。接瘤
24 h 后各组 ip 给药, 连续给药 7 d。停药次日将小
鼠处死, 取瘤称质量, 计算抑瘤率。结果见表 1。表明
低剂量黑木耳多糖对 S180小鼠仅表现出较弱的抑瘤
作用, 中剂量对 S180小鼠表现较好的抑瘤作用, 且不
良反应较轻, 高剂量抑瘤作用最好, 但不良反应较
重。与阳性对照组相比, 黑木耳多糖作用弱于 52Fu,
但是中、高剂量组与黄芪多糖组结果比较差异均无
显著性 (P > 0105)。
表 1 黑木耳多糖对 S180小鼠的抑瘤作用 (x±s, n= 10)
Table 1 Inh ibition of A. aur icu la polysacchar ide on
tumor growth of S180 m ice (x±s, n= 10)
组 别 剂量ö(m g·kg- 1) 瘤质量ög 抑瘤率ö%
模型 - 0176±0120 -
黄芪多糖 100 0140±01163 3 47114
52Fu 25 0128±01113 3 63151
黑木耳多糖 50 0156±01123 3 26107
100 0148±01123 3 36118
200 0139±01123 3 47181
  与模型组比较: 3 3 P < 0101
  3 3 P < 0101 vs model group
212 对红细胞膜脂流动性的影响: 昆明种小鼠随机
分为 11 组, 其中一组为正常组, 另 10 组分别接种以
无菌生理盐水 1∶4 稀释的 S180 (5 组) 或 H 22 (5 组)
荷瘤小鼠腹水, 每只 012 mL , S180采用腋下接种 (实
体) , H 22 为腹腔接种 (腹水) , 按 211 项各组 (无
52Fu 组) 剂量连续 ip 给药 7 d, 正常组不给药。停
药后次日, 小鼠摘眼球取血, 滴入预先加有肝素的试
管内, 加 2 mL 生理盐水混匀, 3 000 röm in 离心 10
m in。将沉淀于底部的红细胞先用生理盐水洗涤两
次, 离心 (2 000 röm in) 5 m in, 弃去上清, 再用等渗
PBS 洗涤 3 次, 作红细胞计数, 根据计数值, 配成
4×107ömL 红细胞悬液。将配好的红细胞悬液
4 mL 中取出 2 mL 加入一试管作为空白管, 余下的
2 mL 作为标准管。在标准管中加入 2 mL D PH 标
记液, 空白管中加入等量、等渗的 PBS, 混匀后于
25 ℃ 温育 30 m in, 3 000 röm in 离心 10 m in, 弃去
残留 D PH 标记液, 用等渗 PBS 洗涤 2 次, 再用等
渗 PBS 稀释成 4 mL 细胞混悬液, 立好进行荧光偏
振度测定。用 R F—540 荧光分光光度计, 采用氙灯
光源, 荧光激发波长为 362 nm , 发射波长为 432
nm , 在 25 ℃ 下分别测定与激发偏振光振动方向平
行、垂直时的荧光偏振光强度 (P ) , 计算微黏度 Γ=
2P ö(0. 46- P ) 及膜脂流动性 L FU = ( 015 - P ö
P 2 [1 ]。结果见表 2。S180荷瘤小鼠与正常组比较, 红细
胞膜脂流动性显著增加。经黑木耳多糖处理后, 膜脂
流动性均有不同程度的降低, 其中以黑木耳多糖低
剂量组对 S180荷瘤小鼠效果最显著 (P < 0101) ; H 22
荷瘤小鼠红细胞膜脂流动性降低, 黑木耳多糖低、中
剂量组显著提高 H 22荷瘤小鼠红细胞膜脂流动性
(P < 0105)。
213 红细胞对肿瘤细胞免疫黏附能力的测定[2 ]: 将
按 212 项方法取得的小鼠新鲜血液, 离心洗涤成红
细胞悬液 (1×108ömL ) 待用。小鼠 S180和 H 22细胞
分别接种于小鼠腹腔连续传代, 实验时无菌抽取
7 d 龄荷瘤小鼠腹腔肿瘤细胞, 经生理盐水洗涤
1 次 , 1 0 0 0 r öm in离心1 0m in , 配成1×1 06 ömL 悬
表 2 黑木耳多糖对荷瘤小鼠红细胞膜脂流动性的影响 (x±s, n= 10)
Table 2 Effect of A. aur icu la polysacchar ide on red cell membrane l ip id f luid ity of tumor-bear ing m ice (x±s, n= 10)
组 别
剂量ö
(m g·kg- 1)
S180荷瘤小鼠Γ L FU H 22荷瘤小鼠Γ L FU
正常 - 11602 4±01119 8 71108 1±01779 8 11602 4±01119 8 71108 1±01779 8△
模型 - 11328 0±01369 8 91398 9±01406 0△ 11923 9±01209 9△ 51490 7±01790 5
黄芪多糖 100 11714 1±01133 73 61576 2±11330 83 3 11632 7±01252 83 71107 9±11799 83
黑木耳多糖 50 11602 4±01119 83 61433 9±01724 33 3 11626 9±01157 53 71011 7±11062 13
100 11594 8±01123 8 71160 2±01783 53 11669 2±01168 83 3 61762 5±11068 23
200 11445 3±01129 8 81359 8±11263 7 11754 2±01183 3 61282 8±01967 9
   与正常组比较: △P < 0105;  与模型组比较: 3 P < 0105 3 3 P < 0101
   △P < 0105 vs no rm al group; 3 P < 0105 3 3 P < 0101 vs model group
·59·中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
液。取此悬液 100 ΛL 加等体积豚鼠血清混匀, 放
37 ℃ 水浴 30 m in, 洗涤 1 次, 2 000 röm in 水平离
心 5 m in 后, 加待测红细胞悬液 50 ΛL 混匀, 37 ℃
水浴 30 m in, 取出加 100 ΛL 生理盐水混匀, 再加
0125% 戊二醛 50 ΛL 混匀, 水平涂片, 瑞氏染色。肿
瘤细胞呈蓝色, 红细胞呈红色, 在显微镜高倍镜下观
察肿瘤细胞黏附 3 个或 3 个以上红细胞为花环, 计
数 100 个肿瘤细胞, 算出花环率。结果见表 3。与正
常组比较, 荷瘤小鼠红细胞黏附肿瘤细胞的能力下
降, 经过黑木耳多糖治疗后均有不同程度地提高, 其
中以中剂量组提高程度最为显著。
表 3 黑木耳多糖对荷瘤小鼠红细胞黏附肿瘤细胞能力
的影响 (x±s, n= 10)
Table 3 Effect of A. aur icu la polysacchar ide on abil ity
of red cell adher ing to tumor cells of
tumor-bear ing m ice (x±s, n= 10)
组 别
剂量ö
(m g·kg- 1)
花环率ö%
S180荷瘤小鼠 H 22荷瘤小鼠
正常 - 38175±2150 38175±2150
模型 - 10109±2131△ 9113±2123△
黄芪多糖 100 25140±11573 3 26120±51363 3
黑木耳多糖 50 24183±41123 3 25114±41413 3
100 32140±11143 3 31157±41653 3
200 27180±21383 3 27143±21233 3
  与正常组比较: △P < 0105;  与模型组比较: 3 3 P < 0101
  △P < 0105 vs no rm al group; 3 3 P < 0101 vs model group
3 讨论
  研究发现黑木耳的主要成分黑木耳多糖有抗肿
瘤作用, 本实验研究黑木耳多糖对红细胞膜流动性
和免疫黏附作用的影响。结果表明黑木耳多糖具有
一定的抗肿瘤作用。对于 S180荷瘤小鼠的抑瘤作用,
中、高剂量效果最好, 与模型对照组相比差异显著
(P < 0101)。高剂量虽然表现出较好的抗肿瘤作用,
但受试动物表现出较明显的泄泻、自主活动减少等
毒性表现, 但低、中剂量组没有明显毒性反应。
研究发现, 许多疾病除实质性器官的细胞膜病
变外, 常伴有红细胞膜的异常[3 ]。本实验表明, S180荷
瘤小鼠红细胞膜的流动性增加, 经药物治疗可使其
流动性降低; 而 H 22小鼠红细胞膜流动性降低, 经药
物治疗可使其流动性增加。表明肿瘤的发生与黑木
耳多糖的治疗对小鼠红细胞膜组分、分布及膜中胆
固醇与磷脂的比值都有一定的影响, 提示对于不同
的恶性肿瘤以及肿瘤发生的不同阶段, 红细胞膜流
动性的改变均会有所不同。
肿瘤细胞可通过旁路途径激活并黏附补体, 与
红细胞 CR 1结合。红细胞还可能通过 CR 1等机制识
别肿瘤抗原与肿瘤细胞黏附, 同时红细胞中的氧化
酶与补体可共同杀伤肿瘤细胞, 攻击癌细胞, 并形成
花环[4 ]。在实验中发现荷瘤小鼠的红细胞免疫黏附
H 22肿瘤细胞的能力较正常小鼠显著下降, 经黑木耳
多糖治疗后, 这项指标得到了显著提高。
综上所述, 黑木耳多糖具有一定的抗肿瘤作用,
其作用机制可能与影响红细胞膜流动性、改善肿瘤
造成的免疫抑制、增强红细胞膜的活性有关。但其具
体的作用机制有待于进一步探讨。
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舒心贴膏对急性心肌缺血犬心外膜电图及心肌病理形态学的影响
金 辉1, 吕文伟2, 温富春3, 石 卓2Ξ
(11 吉林省计划生育科学技术研究所, 吉林 长春 130021; 21 吉林大学基础医学院 药理教研室,
吉林 长春 130021; 31 吉林省中医中药研究院, 吉林 长春 130021)
  舒心贴膏是由血竭、丹参、没药、冰片等 8 味名
贵中药材研制而成的复方新制剂, 具有活血化瘀、通
脉止痛、养血安神之功效[1 ]。临床研究表明舒心贴膏
对冠心病、心绞痛具有良好的疗效。本课题组曾对麻
·69· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2005203215
作者简介: 金 辉 (1962—) , 男, 吉林省长春市人, 主治医师, 从事电诊工作。3 通讯作者 石 卓 Tel: (0431) 5619799