全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1239·
继代周期对霍山石斛试管苗生长及培养基成分的影响
贾书华，王娣，高橼，蔡永萍+，林毅
(安徽农业大学生命科学学院，安徽合肥230036)
摘要：目的研究继代周期对霍山石斛试管苗长势及培养基成分的影响，确定最佳的继代周期时间。方法测定
不同继代周期试管苗的株高、分蘖数、鲜质量、叶绿素量及培养基pH、含水量、含糖量的变化，并计算石斛试管苗生
长所需的培养基和其他的成本。结果继代周期为40d，试管苗的株高比继代前增加了282．86％，分蘖数比继代
前增加了3．5倍，试管苗的鲜质量最大，叶绿素的量趋于最大值；培养基的含水量、可溶性糖的量最低；pH<4，75，
已不适合石斛试管苗的生长，石斛苗生长所需成本较低。结论40d为霍山石斛试管苗生长的最佳继代周期。
关键词：霍山石斛；继代周期；试管苗；培养基
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)08—1239—04
InfluenceofsubculturecycleontubeplantletgrowthofDendrobiumhuoshanense
andmediumco position
JIAShu—hua，WANGDi，GAOYuan，CAIYong—ping，LINYi
(SchoolfLifeSciences，AnhuiAgricultureUniv rsity，Hefei230036，China)
Abstract：ObjectiveTooptimizeth bestsubculturecyclethroughstudyingtheinfluenceof
subcultureimontubeplantletgrowthofDendrobiumhuoshanenseandthechangeofmedium
composition．MethodsHeight，tiller，freshweight，andchlorophyllcontentofthetubeplantletandpH
value，watercontent，andsugarcontentofthemediumweremeasuredafterdifferentcyclesofthe
subculture，thecosofculturemediumforsubculturewascalculatedasw ll．ResultsTheheightof he
tubeplantletincrease282．86％，thetillerincreaseby3．5times，freshw ightreachesitsmaximum，
chlorophyllcontentofthetubeplantletalmostreachesitsmaximumafter40dsubculture：whilewater
contenta dsugarcontentofthemediumaredecreasedtothelowestpoint，pHvalueofmedium(<4．75)
couldnotbesuitabletothegrowthofplantlet．CostforculturingD．huoshanensepla tletsiSverylow．
Conclusion40diSthebestsubculturecycltimeforthetubeplantletcultureofD．huoshanense．
Keywords：DendrobiurnhuoshanenseC．Z．TangetS．J．Cheng；subculturecyc e；plantlet；medium
霍山石斛是安徽省的名贵中药材，国家重点保
护的名贵药用植物[1’2]，为兰科多年生常绿草本植
物，对生态环境要求十分严格，多为附生或丛生。野
生多分布在300～700m的低山区，生长在河边山
谷旁的悬崖上，以及阴凉湿润透风的环境中，常与苔
藓、石苇等植物生长在一起。由于对生长条件的特殊
要求，生长繁殖困难[3]，自1984年，徐云鹃和于力
文首次获得了霍山石斛试管苗[4]，许多学者致力于
研究石斛组织培养技术的研究，长期以来，对石斛组
织培养的研究主要集中在外植体、培养基和培养条
件等方面D]，但有关石斛试管苗生长的最佳继代周
期尚未见报道。本实验研究了继代周期对霍山石斛
试管苗形态指标、生理生化特性以及培养基成分的
变化的影响，以期找到既能保证石斛试管苗处于最
佳的生长状态，又充分经济地利用培养基的最佳继
代时间，为霍山石斛工厂化生产提供理论依据和技
术支持。
1材料与方法
1．1 材料培养与处理：供试材料为霍山石斛
DendrobiumhuoshanenseC．Z．TangetS．J．
Cheng试管苗。取大小长势均一的石斛试管苗接种
于Kundson+NAA1．0mg／L+6一BA2．5mg／L，
pH为5．8的培养基中，分别以10、20、30、40、50、60
d作为继代周期，每个处理重复3瓶，每瓶5株石斛
试管苗。培养120d后，对每个处理各15株石斛试
管苗进行形态、生理指标的测定；同时对培养基成分
收稿日期：2006—12一Ol
基金项目：安徽省教育厅重点项目(2006KJ054A)和安徽省教育厅“十五”学术带头人基金资助(2002年度)
作者简介：贾书华(1978一)，女，山东嘉祥县人，硕士研究生，研究方向为中药材组织培养及遗传育种。
*通讯作者蔡永萍E—mailswkxl2@ahau。edu．cn
万方数据
中草|sChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
测定，每个处理重复3次。
1．2试管苗株高、分蘖数、鲜质量测定：株高用直尺
测量，单株鲜质量用电子天平称量。分别测15株石
斛苗的株高、鲜质量、分蘖数，取平均值。
1．3试管苗叶绿素量测定：取试管苗第3片叶片
0．05g，用95％乙醇5．0mL提取叶绿素，将TU一
1800SPC紫外可见分光光度计波长分别调至649、
665am处，读取吸光度值，用Arnon公式计算叶绿
素量。
1．4培养基pH的测定：培养基在水浴锅中熔化，
取5．0mL培养基，5000r／min离心10min，取上
清液，用pH计测定pH值。
1．5培养基含水量的测定：准确称取1．0鲜培养
基，于80℃烘箱烘干至恒重，用电子天平称重，重
复3次，计算含水量，含水量(％)一(鲜质量一千质
量)(％)。
1．6培养基可溶性糖量的测定：可溶性总糖量用硫
酸蒽酮法。准确称取1．0g于培养基，热水反复浸
提，用TU一1800SPC紫外一可见分光光度计于620
am比色测定。以葡萄糖对照品作标准曲线。方程
为：y=0．0061 X一0．0115，r=0．9986一。
1．7石斛试管苗生长所用培养基、封口膜及劳务费
的计算：石斛苗所需成本费按120d所需继代次数
计算。培养基成本费=每瓶培养基的成本×继代次
数；封口膜成本费一每个封口膜所需费用×继代次
数；劳务费一转接每瓶试管苗所需费用×继代次数。
2结果与分析
2．1继代时间对石斛试管苗株高的影响：由图1可
以看出，随着继代周期时间的增加，石斛的株高增长
速度逐渐降低。继代周期为10d，石斛株高最高为
2．86cm，比继代前增加308．57％。继代周期为20、
30、40d时，石斛株高增长速度下降幅度较缓，分别
比继代前增加了297。14％、285。71％和282．86％。
继代周期为50、60d时，石斛株高增长速度有较大
幅度的下降，当继代周期为60d时，石斛株高最低
为2．32cm，仅比继代前增加了231．14％。
2．2继代时间对石斛试管苗分蘖数的影响：随着继
代周期时间的增加，石斛的分蘖数逐渐减少(图2)。
其中继代周期为10d，石斛的分蘖数最多，为5．80
蘖／株；分别比继代周期为20、30、40、50、60d高
11．54％、20．83％、21．85％、31．82％、45．oo％。其中
继代周期为30、40d的分蘖数相差不大，继代周期
为40d分蘖数仅比30d时降低了4．90％。
2．3继代时问对石斛试管苗鲜质量的影响：图3表
o
卷
E
0
、
惺
蜷
0 10 20 30 40 50 60
t|d
图1 继代时间对石斛试管苗株高的影响(辟一15)
Fig．1Effectsofsubculturetimontubeplantlet
heightofD．huoshanense(席一15)
o
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0 10 20 30 40 50 60
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图2继代时间对石斛试管苗分蘖数的影响(捍一15)
Fig．2Effectsofsubculturetimontubeplantlet
tillerofD．_Il“Ds_Il口n口捍s口(片一15)
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图3继代时间对石斛试管苗鲜质量的影响(聘=15)
Fig．3Effectsofsubculturetimeontubeplantlet
freshweightofD．huoshanense(n=15)
明，随着继代周期时间的增加，石斛试管苗的鲜质量
先上升再降低。继代周期为40d时，石斛的鲜质量
达到最高值，为172．92rag／株，比继代前增加了25
倍；且明显高于其他继代周期时间，比继代周期为
20d的石斛试管苗质量增加了64．43％，当继代周
期为50、60d时，石斛试管苗的鲜质量又逐渐下降。
2．4继代时间对石斛试管苗叶绿素量的影响：从图
4可以看出，随着继代周期时间的增加，石斛试管苗
的叶绿素量逐渐升高，继代周期为20、30d时，石斛
叶绿素的量上升趋势比较缓和，继代周期为40d
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1241·
o
印
∞
E
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摇
骠L
图4继代时间对石斛试管苗叶绿素量的影响(万一15)
Fig．4Effectsofsubculturetimontubeplantletchio—
rophyllcontentofD．huoshanense(n=15)
时，叶绿素的量明显上升，当继代周期为50、60d
时，石斛叶绿素量的上升趋势又趋于缓和，在继代周
期为60d时，叶绿素量达到最高，但和继代周期为
40d时的叶绿素量相比差异不显著。
2．5继代时间对培养基pH的影响：经测定，随着
继代周期时间的增加，培养基的pH逐渐下降(表
1)。当继代周期为50、60d时，培养基的pH下降到
4．5以下，并且观察到培养基有液化现象，试管苗已
不能再生长，这与以上试管苗生长变化一致。
表1继代时间对培养基pH值的影响@一3)
Table1 EffectsofsubculturetimonpHvalue
ofculturemedium(甩一3)
继代时间／d pH值 继代时间／d pH值
O 5．42士0．03 40 4．75±0．03
10 5．22±0．02 50 4．47土0．03
20 5．01土0．04 60 4．23士0．05
30 4．92土0．02
2．6 继代时间对培养基含水量的影响：图5表明，
随着继代周期时间的增加，培养基的含水量呈先下
降后上升的趋势。继代前培养基含水量为鲜质量的
96．60％；继代周期为40d，培养基含水量达到最低
为鲜质量的95．27％，比继代前下降1．33％。继代
周期为50、60d时，培养基的含水量又有所上升，这
和培养基pH下降到4．50以下，且培养基有液化现
象一致。
2．7继代时间对培养基可溶性糖量的影响：从图6
可知，随着继代周期时间的增加，继代周期为20、
30、40d时，培养基可溶性糖的量呈显著下降趋势，
继代周期为40d时，培养基可溶性糖的量最低，为
82．23％；比继代前培养基的可溶性糖量降低了
15．27％。继代周期为50、60d时，培养基可溶性糖
量又呈上升趋势，这可能是培养基琼脂液化所致[6]，
有待于进一步研究。
摹＼
跚
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图5继代时间对培养基含水量的影响(咒一3)
Fig．5Effectsofsubculturetimonwatercontent
ofculturemedium(一=3)
耋蓬
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当，。0
J．tL-o
蜘岛
图6继代时间对培养基可溶性糖量的影响(万=3)
Fig．6Effectsofsubculturetimeonsolublesugar
contentofculturemedium(n一3)
2．8继代时间对培养基及其他成本的影响：表2表
明，在石斛试管苗生长的一定时间内，随着继代周期
时间的增加，继代次数减少，石斛苗试管生长所需培
养基、封口膜以及劳务费逐渐降低，继代时间为
10～40d，下降幅度较大；继代时间为40～60d时，
下降幅度缓慢。当继代时间为10、20、30d时，所用
总成本分别比40d高300％、100Yo、33％，而当继
代时间为50、60d时所用总成本分别比40d低
20％、33％。虽然继代时间为50、60d时所用的成本
低，但以上结果表明其培养基营养已消耗，pH下
降，培养基液化；试管苗生长缓慢，已不适合试管苗
的生长。石斛苗所需成本费用按120d中所需继代
次数计算。
3讨论
3．1 继代时间对石斛试管苗的影响：随着继代周期
时间的增加，霍山石斛试管苗的株高、分蘖数逐渐降
低，在继代周期为50d时，下降幅度较大；鲜重呈现
先上升后下降的趋势，在继代周期为40d达到最
大；叶绿素量随着继代周期时间的增加逐渐升高，在
继代周期为40d时有明显的上升，随后上升趋势又
趋于缓和。这可能是由于继代周期越短，培养基中激
万方数据
·1242· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
表2继代时间对石斛试管苗所需成本费用的影响
Table2 Effectofsubculturetimeoncostofmedia
ontubeplantletofD．huoshanense
素(NAA、6一BA)的量越高，相对高的激素量，利于
生长点细胞的分裂与非生长点细胞的伸长，表现为
试管苗株高较高和繁殖能力较强，分蘖较多；随着继
代周期时间的增加，培养基内的激素和营养成分因
不断被吸收利用而减少，对试管苗生长分化的促进
作用逐渐减弱，培养基中的各种营养元素，如碳源、
氮源、维生素等都被大量消耗而不能满足试管苗生
长需要。当继代周期时间为40d时，试管苗株高比
继代前增加了282．86oA，分蘖数比继代前增加了
3．5倍，鲜重比继代前增加了25倍，叶绿素量已趋
于最大值。从石斛试管苗的株高、鲜质量及叶绿素量
等形态生理指标来看，继代周期为40d时，石斛试
管苗长势趋于最好。
3．2继代时间对培养基的影响：随着继代周期时间
的增加，培养基的含水量、可溶性糖量呈现先下降后
上升的趋势，均在40d降到最低值。培养基pH随
着继代周期时间的增加逐渐降低。这是因为随着继
代周期时间的增加，培养基中水分、可溶性糖被石斛
试管苗吸收利用而大量减少，在继代周期时间为40
d时，培养基含水量、可溶性糖量降到最低值。当继
代周期时间大于40d时，培养基的含水量、可溶性
糖量又有所上升，这可能是由于石斛试管苗在生长
过程中吸收培养基中的成分或向培养基中释放了次
生代谢物质使培养基pH降低[7]、琼脂液化所致r6]。
综合不同继代周期培养基含水量、可溶性糖量以及
pH的变化，当继代周期时问大于40d时，培养基的
水分、碳源已经不能满足试管苗生长的需要，过低的
pH不利于石斛试管苗生长[8]。继代时间40d为石
斛试管苗的最佳继代周期。
4讨论
通过以上的研究结果表明：当继代时间为40d
时，试管苗的株高比继代前增加了282．86％，分蘖
数比继代前增加了3．5倍，鲜质量达到最高值为
172．92mg，比继代前增加了25倍，叶绿素量已趋
于最大值，此时石斛试管苗的长势最佳；培养基的含
水量、可溶性糖量在继代周期时间为40d时均降低
到最低值，过酸的培养基也已经不适合石斛试管苗
的生长。另外，结合不同继代时间石斛苗生长所需培
养基、封口膜及劳务费等计算表明继代周期40d所
需的成本较低。所以，继代周期40d为霍山石斛试
管苗生长的最佳继代周期。
References：
[1]CaiYP，YuLW，ZhangHY，eta1．Determinationofsome
resistant—oxideenzymesandactivatedsubstancesofthree
DendrobiuminHuoshancounty[J]．ChinPharmJ(中国药
学杂志)，1996，31(11)：649—651．
E23CaiYP，LiL，LinY，eta1．Effectsofcontentof
endogenersishormonesonstemgrowthofDendrobiumin
Huoshan[J]．ActaLaserBiolSin(激光生物学报)，2004，
13(5)：345—348．
[3]CaiYP，LiHS，LuoBS，eta1．Studyonthegrowing
rhymesofthethreeDendrobiainHuoshananditsrelation
withecologicalfactors[J]．JWuhanBotRes(武汉植物研
究)，2003，21(4)：351—355．
E4]XuYC，YuLW．Seedgerminationndplantletscultureof
Dendrobiumhuoshanense[J]．JAnhuiAgricUniv(安徽农学
院学报)，1984(1)：48—52．
L5]ZhangM，XiaHX，ZhuLQ，eta1．Advancesinstudieson
planttissuecultureofDendrobium[J]．ChinPharmJ(中国
药学杂志)，2000，25(6)：323—326．
[6]DuYG，HaoLZ，WangP，eta1．Theinfluenceofagar
concentrationinplanttissuecultureandpHonconcretion
degreeofculturemedium[J]．PlantPhysiolCommun(植物
生理学通讯)，2005，41(5)：623．
L7]JiangXM，BaiXF，ZhaoJP，eta1．Relationshipbetween
planttissueculturefactorsandpHvalueofmedium[J]．
PlantPhysiolC mmun(植物生理学通讯)，2005，41(6)：
802—804。
[8]FuYL，GuF，HuCM，eta1．Researchonthetissue
cultureandrapidpropagationofDe drotnumhuoshanense
口]．JAnhuiAgricS i(安徽农业科学)，2004，32(3)：522—
523．
万方数据
继代周期对霍山石斛试管苗生长及培养基成分的影响
作者： 贾书华， 王娣， 高橼， 蔡永萍， 林毅， JIA Shu-hua， WANG Di， GAO Yuan， CAI
Yong-ping， LIN Yi
作者单位： 安徽农业大学生命科学学院,安徽,合肥,230036
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(8)
被引用次数： 3次

参考文献(8条)
1.Cai Y P;Yu L W;Zhang H Y Determination of some resistant-oxide enzymes and activated substances of
three Dendrobium in Huoshan county 1996(11)
2.Cai Y P;Li L;Lin Y Effects of content of endogenersis hormones on stemgrowth of Dendrobium in
Huoshan[期刊论文]-Acta Laser Biology Sinica 2004(05)
3.Cai Y P;Li H S;Luo B S Study on the growing rhymes of the three Dendrobia in Huoshan and its
relation with ecological factors[期刊论文]-Journal of Wuhan Botanical Research 2003(04)
4.Xu Y C;Yu L W Seed germination and plantlets culture of Dendrobium huoshanense 1984(01)
5.Zhang M;Xia H X;Zhu L Q Advances in studies on plant tissue culture of Dendrobium 2000(06)
6.Du Y G;Hao L Z;Wang P The influence of agar concentration in plant tissue culture and pH on
concretion degree of culture medium 2005(05)
7.Jiang X M;Bai X F;Zhao J P Relationship between plant tissue culture factors and pH value of
medium[期刊论文]-Plant Phyiol Commun 2005(06)
8.Fu Y L;Gu F;Hu C M Research on the tissue culture and rapid propagation of Dendrobium huoshanense
[期刊论文]-J Anhui Agric Sci 2004(03)

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