全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1143·
9|3)，3。48(1H，s，H一58)，4．74(1H，dd，歹一5．0，10．0
Hz，D。O交换后呈d，J一10．0Hz，H一19)，5．28(1H，
d，J一3．0Hz，H一30【)，5．55(IH，dd，J一3．0，10．0
Hz，H一2a)，6．85(IH，t，J一4．0Hz，H一11a)，7．32
(IH，d，J一5．0Hz，D20交换后消失，1a—OH)。MS
(m／z)：492(M+)，449EM～AC]+，431EM—ACOH—
H]+，414[M—ACOH—H：O]+，404，388，372[M一
2×ACOH]+，344[372一CO]+，329[344～CH3]+，
313，284rM一3×ACOH—CO]+，271，255，218，
”C—NMR值见表1。
二氢化水解产物IV：185mgⅡ溶于40mL乙
醇中，加入40mL2mol／LNaOH，回流水解14h，
蒸去乙醇，用醋酸乙酯萃取5次，萃取液水洗，无水
硫酸钠干燥，滤过，蒸去醋酸乙酯，得106mg白色
残留物，甲醇结晶得粒晶，mp168～170℃；IRv⋯KBr
(cm_1)：3400(br．s，OH)，1720(五元环酮)。
1H—NMR8：1．34(3H，s，H3—19)，1．59(3H，s，H3—
18)，1．64(3H，d，J一7．0Hz，H3—169)，2。05(3H，s，
H3—20)，3．13(1H，s，H一5B)，3．28(2H，s，H一99)，3．85
(1H，m D20交换后呈d，L厂一3．0Hz，H一3a)，4．16，
4．40(2H，m，H一19，2a)，4．85(1H，dd，J一4．0，8．3
Hz，H一6o【)，5．01～5．50(4H，br，s，la一，2B，38，11p
OH)，6．65(1H，d，，一4．0Hz，D。O交换消失，6B—
OH)，6．06(1H，t，J一4．0Hz，H一1la)。MS(m／z)：
368(M+)，350[M—H。O]+，332[M一2×H。0]+，
314[M一XH20]+，299[314一CH3]+，281[M一4×
H20—CH3]+，272，259，241[259一H20]+，234，
1 ，317，185，13C—NMR值见表1。
齐墩果酸用甲醇重结晶得白色针晶，mp306～
308℃。MS(re／z)：456(M+)，C。。H。。03，其裂解规律
与齐墩果酸相同，红外光谱与齐墩果酸对照品的完
全一致[2’3]，混合熔点不下降，证明为齐墩果酸。
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板蓝根多糖分离纯化及其性质的研究
马 莉1’2，唐健元3，李祖伦4，刘毅4，金城1，赵艳玲1，肖小河¨
(1．解放军302医院解放军中药研究所，北京100039；2．首都医科大学中医药学院，北京100069；3．国家食品药品
监督管理局药品审评中心，北京 100038；4．成都中医药大学，四jf|成都610075)
摘要：目的从板蓝根中提取分离水溶性多糖，并分析其理化性质，为板蓝根质量控制与进一步开发利用提供参
考。方法主要采用DEAE纤维素离子交换色谱柱，SephadexG75凝胶色谱柱分离纯化，应用高效凝胶渗透色谱
法(HPGPC)、IR、TLC、UV等方法对板蓝根多糖进行组成结构分析及理化性质研究。结果从板蓝根水溶性多糖
中分离纯化得到4种不同的均一多糖组分PSI、PS2、PS3、PS4，色谱分析表明均由单一木糖组成。其中PSI、PS2、
PS3、PS4相对分子质量分别为1．2×104、2．6X104、4．2X103、2．5X103。结论4种均一多糖首次从板蓝根中分离
得到。
关键词：板蓝根；多糖；分离纯化；性质
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)08—1143一04
IsolationandpurificationofpolysaccharidesfromRadixlsatidisandtheirp operties
MALih2，TANGJian—yuan3，LIZu—lun4，LIUYi4，JINChen91，ZHAOYan—lin91，XIAOXiao—hel
(1．InstituteofChineseMateriaMedica，302HospitalofPLA，Beijing100039，China；2．SchoolofTraditional
ChineseMedicine，CapitalMed cUniversity，Beijing100069，China；3．CenterforDrugEvaluation，
StateFoodandDrugAdministration，Beijing100038，China；4．ChengduUniv rsity
ofTraditionalChineseMedicine，Chengdu610075，China)
收稿日期：2006—10—11
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39970911)
作者简介：马莉(1977一)，女，在读博士，研究方向为中药学。E—mail：mary666@hotmail．corn
*通讯作者肖小河Tel：(010)66933322E—mail：pharmacy302@126．com
万方数据
·1144· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
Abstract：ObjectiveTostudythphysico—chemicalpropertiesofextractedhydrophilicpo ysaccha—
ridesinRadixIsatidisandgivesomesuggestionsforthequalitycontrolandfurtherd velopmentofRadix
Isatidis．MethodsP01ysaccharidesinRa ixI atidiswerefractionatedbyDEAEcellulosei nexchange
chromatographyandSe adexG75gelchromatography．HPGPC，IR，TLC，andUVwereusedtoinves—
tigatehestructuralandphysico—chemicalpropertiesofthehomogeneouspolysaccharideparts．Results
Fourdifferenthomogeneoushydrophilicconstituents，PSl，PS2，PS3，andPS4，werextractedandisolat—
edfromRadixIsatidis．AllofthemwerecomposedofXyl．TherelativemolecularweightsofPSl，PS2，
PS3，andPS4were1．2×104，2．6×104，4．2×103，and2．5×103，respectively．ConclusionItisthefirst
timetogethefourhomogeneouspolysaccharidesfromRadixIsatidis．
Keywords：RadixIsatidis；polysaccharides；isolationanpurification；property
板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatisindigotica
Fort．的根，具有清热解毒、凉血利咽的功能。据报
道板蓝根多糖具有免疫调节作用u矗]，对特异性免疫
和非特异性免疫均有一定的促进作用，是较理想的
免疫增强剂；同时板蓝根多糖能降低细菌脂多糖
(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株引起的NF—KB与DNA
的结合活性升高，对于抑制炎症反应相关基因的表
达，减少炎性因子的产生，防治炎症性疾病有一定的
疗效[3]。多糖为板蓝根主要活性成分之一。
目前，板蓝根多糖大多采取水提醇沉法制备[4]。
多糖的种类和结构至今尚未完全明确，提取的粗多
糖溶液多为胶体溶液，黏度大且不稳定，所含组分的
相对分子质量差别悬殊，不同相对分子质量的组分
之间药理活性差异大[5]，为多糖的质量控制与进一
步开发利用造成困难。本实验采用DEAE纤维素离
子交换色谱柱，SephadexG75凝胶色谱柱分离纯
化板蓝根多糖，并结合高效凝胶渗透色谱法(HPG—
PC)、IR、TLC、UV等方法对其进行组成结构分析
及理化性质研究。
1仪器与试剂
HP8452A型紫外分光光度计；傅里叶变换红外
光谱仪；Agilent1100高效液相色谱仪；AEl63型电
子分析天平；DEAE一52纤维素(Fluka)；SephadexG
75(Sigma)；标准葡聚糖M2500(140638—2000—01)、
M7100(140640—2000—01)、M21400(140642—2000—
01)、M41100(140643—2000—01)、M84400(140644—
2000—01)、M133800(140645—2000—01)购自中国药
品生物制品检定所；葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、木
糖、果糖、鼠李糖(北京化学试剂公司)；其他试剂均
为国产分析纯；板蓝根药材及饮片由解放军302医
院中药房提供，经肖小河研究员鉴定为十字花科植
物菘蓝I．indigoticaFort．的根。
2方法
2．1 多糖的提取、分离与纯化：参考有关文献方
法[6’7]，并略有改动。取板蓝根饮片经石油醚回流脱
脂4h，滤过，药渣加10倍量水加热提取2次，每次
2h，合并提取液，减压浓缩至含生药0．5g／mL的
浓缩液。浓缩液加乙醇调整体积分数为60％，冷藏
24h，滤取沉淀，溶解于水，去离子水透析，去除小分
子杂质，分别用Sevag法、TCA法、鞣酸法除蛋
白[8J，以茚三酮试液检识。除去蛋白的多糖加3倍体
积乙醇，冷藏24h，离心，收集沉淀，50℃真空干燥，
得板蓝根粗多糖。
板蓝根粗多糖以少量蒸馏水溶解，除去不溶物，
在预处理好的DEAE一52纤维素柱(1．5cm×40
cm；柱高30cm)分离，以0．01mol／L硼砂缓冲溶
液，0．05、0．1、0．25、0．5、1mol／L氯化钠溶液依次
分步洗脱，体积流量20mL／h，分段收集，每管2
mL，用苯酚一硫酸法跟踪检测收集管中多糖的量。按
洗脱峰分段收集合并洗脱液，浓缩后加人4倍量乙
醇，冷藏24h，离心，收集沉淀，50℃真空干燥，得到
白色或褐色表面有光泽多糖粉末。进一步用
SephadexG75(1．2cm×30cm)凝胶色谱柱分离纯
化，以磷酸缓冲溶液为洗脱流动相，分离得到4种板
蓝根均一多糖：PSl、PS2、PS3、PS4。
2．2 多糖纯度和相对分子质量测定：参考有关文献
方法[9]，并略有改动。待测定样品溶于超纯水中，使
其质量浓度为5g／L，用高效凝胶过滤色谱法确定
纯度。色谱条件为：Ultrahydrogel凝胶色谱柱，示差
折光检测器(Waters410)，流动相0．2mol／L
NaNO。，体积流量0．5mL／min，柱温45℃，进样量
lo肛L。用标准葡萄糖(Dextran)、系统标准葡聚糖
M2500、M7100、M21400、M41100、M84400、
M133800制备标准曲线，根据样品的保留时间计算
相对分子质量。结果PSl、PS2、PS3、PS4的相对分
子质量分别为1．2×104、2．6×104、4．2×103、
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1145·
2．5×103。
2．3糖组成分析
2．3．1 多糖的单糖组成：分别取板蓝根PSl、PS2、
PS3、PS4多糖样品5mg，用1mol／L硫酸5mL溶
解，于120℃封管水解2h，用BaCO。中和至中性。
硅胶薄层色谱检识；正丁醇一丙酮一水(4：5：1)为展
开剂，苯胺一邻苯二甲酸显色，105℃加热至斑点显
色清晰。对照品为葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、阿拉
伯糖(Ara)、木糖(Xyl)、乳糖(Gal)和鼠李糖(Rha)，
以上述标准单糖的Rf值及颜色作为定性依据。
2．3．2红外光谱分析：分别取板蓝根PSl、PS2、
PS3、PS4多糖样品2mg，加入200mg经干燥的
KBr晶体，研磨混合后压片，采用傅里叶变换红外光
谱仪，于4000500cm_1红外区扫描测定。
3结果和分析
3．1多糖不同方法除蛋白效果的比较：Sevag法反
应温和，但除蛋白的效率较低；鞣酸法引入色素，容
易导致除蛋白后的多糖污染；TCA法不仅能有效除
去蛋白，还能除去部分色素，故选用TCA法除去板
蓝根多糖中的蛋白。
3．2 多糖的柱色谱分离：板蓝根多糖经DEAE一52
纤维素色谱，分离到4个亚级；ISPl、ISP2、ISP3、
ISP4，其中ISPl的量最多，约占上样粗多糖量的
60％，其次分别为ISP4、ISP2和ISP3，见图1。可以
比较清晰地看出盐洗脱部分的3个洗脱峰，3个洗
脱峰中第4峰相对较高。这4种多糖经SephadexG
75凝胶柱色谱分离，得到PSl、PS2、PS3、PS4等4
种均一多糖。
蜊
米
餐
流份
图1板蓝根多糖的DEAE纤维素柱色谱分离
Fig．1ElutioncurveofpoIysaccharidesinRadix
lsatidisfractionatedbyDEAEcellulose
ionexchangechromatography
3．3 多糖薄层色谱分析：板蓝根各多糖组分薄层分
析结果可以看出，PSl、PS2、PS3、PS4均由单一木糖
组成。
3．4 多糖红外特征峰分析：PSl在3357．81、
2916．73、1666．57、1347．61、1007．78cml的吸
收峰为多糖特征吸收峰，850cm叫附近的吸收峰是
0【～吡喃糖苷键的特征吸收峰；PS2在945．65、
826．44、707．63cm叫以及PS3在947．47、828．20
Cm_1是D一吡喃糖类化合物的特征吸收峰；PS4在
3 345．66、2917．52、16 5．68、14 6．07、1331．64、
1 143．54cmJ1的吸收峰为多糖特征吸收峰，955．37
ClTI_1为毗喃环的非对称环伸缩振动。
4讨论
4．1 多糖进行完全水解的目的是获得多糖的单糖
成分信息，多糖水解的难易与单糖的性质、单糖环的
形状和糖苷键的构型有关，水解的条件必须严格控
制，否则发生不必要的降解反应。本实验中对可能影
响酸水解的水解时间、水解方式、水解温度、硫酸浓
度、中和试剂进行考察，结果以1mol／L硫酸5mL
于120C封管水解2h，用BaCO。中和至中性，水解
条件最好，色谱斑点圆整清晰。
4．2离子交换色谱对除去多糖提取物中的酸、碱性
成分和无机离子十分有效，留下中性糖可作进一步
分离。由于强碱性的树脂能与还原糖结合，用水不能
洗脱；而强酸性树脂易使不稳定的糖苷键裂解，所以
在分离多糖时宜采用弱酸弱碱的离子交换树脂。
DEAE纤维素(二乙氨乙基纤维素，Dicthy—
laminoethyl)在纤维素上结合了DEAE，含有带正电
荷的阳离子纤维素一0一C。H，。N+H，它的反离子为阴
离子，可与带负电荷的阴离子进行交换。在离子交换
色谱中，交换剂对多糖和无机盐离子都具有交换吸
附的能力，两者同时存在于～个色谱过程中，一般采
用两种方法达到分离多糖的目的。一种是增加洗脱
液的离子强度，一种是改变洗脱液的pH值。试验采
用不同离子强度NaCl进行洗脱，分离效果好。
4．3 多糖溶液作为胶体溶液，黏度不但随浓度的增
大而升高，而且与相对分子质量的大小有关系∽]。多
糖的相对分子质量分布一般比较分散，所以一般所
称的相对分子质量是大小分子的平均数，即平均相
对分子质量。常用于多糖相对分子质量的测定方法
有：渗透压法、蒸气压渗透计法、端基法、黏度法、光
散射法、凝胶色谱法和超滤法等。用不同性质的测定
方法，所得结果往往存在差异，因此在说明多糖的相
对分子质量时，应当把测定方法的性质说明。本实验
用高效凝胶渗透色谱法测定板蓝根多糖相对分子质
量，其中PSI、PS2、PS3、PS4相对分子质量分别为
1．2×104、2．6×104、4．2×103、2．5×103。
4．4多糖为生物大分子，存在一、二、三、四级结构
的概念[1⋯。研究表明多糖的活性与相对分子质量、
万方数据
·1146· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
溶解度、黏度和糖链结构有关。本实验对板蓝根中的
多糖进行了初步分离纯化，得到4个均一多糖。全水
解产物的分析表明，它们的糖组成均为单一木糖。有
关板蓝根多糖的溶解度和黏度、多糖13C—NMR和质
谱的测定以推断糖绝对构型、连接位置和端基碳相
对构型的分析工作[11’123将做后续报道。
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金不换的化学成分研究
李创军，张东明+，庾石山
(中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所，北京100050)
金不换PolygalaglomerataLour．为远志科远
志属植物，主要分布于福建、广东、四川和云南，以全
草入药。具有止咳、消积和活血散瘀的功效，是广西
民间常用药，主要用于治疗咳嗽胸痛、咽喉痛、肺痨、
顿咳、小儿疳积、黄疸、痢疾、小儿麻痹后遗症、目赤、
痈疽疖肿、跌打损伤等[1’2]。已从本植物中分离得到
了皂苷、寡糖多酯类成分[3“]，为了更好的开发和利
用我国远志属的资源，本实验对其全草的化学成分
进行了研究，从其全草的乙醇提取物的醋酸乙酯和
丙酮部分中，采用硅胶、ODSC。。、SephadexLH一20
和大孑L吸附树脂柱色谱，分离得到8个化合物。根据
光谱数据和理化性质鉴定其结构，分别为：芦丁
(I)、芒果苷(11)、山柰酚一3一O一芸香糖苷(Ⅲ)、紫云
英苷(IV)、山柰酚(V)、槲皮素一3一O一葡萄糖苷(VI)、
胡萝卜苷(Ⅶ)和远志醇(Ⅷ)。化合物I～Ⅶ均为首
次从该植物中分离得到。
1仪器与材料
XT。一100显微熔点测定仪。质谱为Agilent
1100seriesLC／MSDTrapSL质谱仪。核磁共振谱
用Inova一300，500型核磁共振仪测定。实验所用薄
层色谱硅胶GF：。。和柱色谱硅胶(100～200目，
200～300目)均为青岛海洋化工厂产品。大孔树脂
D101为天津海光化工有限公司产品，C，。反相硅胶
为日本YMC公司产品，SephadexLH一20(粒度18～
111Urn)为瑞士PharmaciaBiotech公司产品。药材
采自广西，经龙光日工程师鉴定为远志科远志属植
物华南远志P。glomerataLour的全草，标本保存
在中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所。
2提取分离
金不换全草5kg，用95％乙醇回流提取3次(2
h／次)，浓缩得总浸膏1700g，通过硅胶柱色谱分
离，分为石油醚、氯仿、醋酸乙酯、醋酸乙酯一丙酮
收稿日期：2006—11-05
基金项目：国家自然科学基金项目(20372087，20432030)
作者简介：李创军(1980一)，甘肃省甘谷人，博士研究生，研究方向为天然产物化学。E—mail：lichuangjun@sina．corn
*通讯作者张东明Tel：(010)63165227Fax：(010)63017757E—mail：zhangdm@imm。ac．cn
万方数据
板蓝根多糖分离纯化及其性质的研究
作者： 马莉， 唐健元， 李祖伦， 刘毅， 金城， 赵艳玲， 肖小河， MA Li， TANG Jian-yuan
， LI Zu-lun， LIU Yi， JIN Cheng， ZHAO Yan-ling， XIAO Xiao-he
作者单位： 马莉,MA Li(解放军302医院,解放军中药研究所,北京,100039;首都医科大学中医药学院,北
京,100069)， 唐健元,TANG Jian-yuan(国家食品药品监督管理局药品审评中心,北京
,100038)， 李祖伦,刘毅,LI Zu-lun,LIU Yi(成都中医药大学,四川,成都,610075)， 金城
,赵艳玲,肖小河,JIN Cheng,ZHAO Yan-ling,XIAO Xiao-he(解放军302医院,解放军中药研究
所,北京,100039)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(8)
被引用次数： 12次

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3. 李红梅.曹静.张凤巧.客绍英.王树桐.LI Hong-mei.CAO Jing.ZHANG Feng-qiao.KE Shao-ying.WANG Shu-tong
中草药提取物对板蓝根根腐病菌抑制作用研究[期刊论文]-河南农业科学2009(6)
4. 谭周进.谢达平.王征.肖启明.李立恒 蜜环菌多糖分离纯化及性质的研究[期刊论文]-食品科学2002,23(9)

引证文献(13条)
1.刘俊玲.张元元.崔保安.张红英.王学兵 板蓝根多糖对体外培养鸡脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响[期刊论文]
-中国农学通报 2011(11)
2.张明 均匀设计法优选中药免疫复方的试验[期刊论文]-动物医学进展 2010(6)
3.张明 均匀设计法优选中草药免疫活性成分工艺研究[期刊论文]-山东大学学报（医学版） 2009(12)
4.郭怀忠.张斌.徐相涛.张硕敏 板蓝根多糖的降解和单糖组成的毛细管区带电泳测定研究[期刊论文]-中草药
2010(5)
5.刘志明.孙清瑞.王雯.吴海舟 板蓝根多糖保健酒的研制[期刊论文]-农产品加工·学刊 2010(11)
6.申湘忠 粽叶中多糖的提取分离和光谱分析[期刊论文]-湖南农业科学 2011(1)
7.张体祥.刘捷.张萍.马丽.卢奎 板蓝根多糖的提取和纯化工艺研究[期刊论文]-时珍国医国药 2009(8)
8.孙静.严建业.张玉波 板蓝根提取物中核苷类成分的纯化工艺研究[期刊论文]-中南药学 2010(2)
9.傅鹏.朱华.张可锋.廖儒佳 狗肝菜中多糖提取工艺的比较研究[期刊论文]-南京中医药大学学报 2011(5)
10.冯慎.陈爽.李妍.李晓光 植物多糖的纯化工艺研究进展[期刊论文]-天津化工 2010(6)
11.冯慎.陈爽.李妍.李晓光 植物多糖的纯化工艺研究进展[期刊论文]-天津化工 2010(6)
12.张民.郭志红.周鸿立 多糖类物质脱蛋白方法的概况[期刊论文]-吉林化工学院学报 2013(5)
13.张锦雀.黄丽英.苏聪枚 中草药多糖提取分离纯化研究进展[期刊论文]-中药材 2008(11)


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