全 文 ：·1220· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
增生，也表明PCPS对CTX所致的免疫抑制具有拮
抗作用。
PCPS可拮抗CTX所致的免疫抑制，使其免疫
功能恢复正常或接近于正常。因此认为，PCPS可作
为一种新的生物反应调节剂，在肿瘤生物治疗中可
与CTX之类的免疫抑制药物同时使用，以阻遏肿
瘤患者在放疗、化疗中免疫功能的进一步下降。这有
待于进一步深入研究。
由于多糖类化合物对机体的免疫作用具有双向
调节性，且具有剂量效应。不同剂量PCPS激活大鼠
巨噬细胞的作用有差异，以100mg／kg剂量作用最
为明显[11|，因此本实验用100mg／kg剂量的PCPS
处理大鼠。
实验提取制备的蝉拟青霉活性物质是总多糖，
成分复杂，本实验初步研究阐明了总多糖对正常及
CTX所致免疫抑制大鼠巨噬细胞的免疫调节作用。
由于多糖对机体的免疫调节作用具有构效关系，因
此对总多糖进一步进行分离、提取、纯化，以获得各
种单一的多糖组分，深入研究多糖分子结构和生物
活性的关系，从结构与活性两方面论证PCPS的药
理作用，是本实验组继续研究的工作。
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人工发酵虫草茵丝体干粉在糖尿病大鼠肾脏组织中的抗纤维化作用
王战建，王书畅‘
(河北医科大学第三医院内分泌科，河北石家庄050051)
在糖尿病肾病的进展中，转化生长因子一p
(TGF一口)作为关键性的细胞因子，介导糖尿病诱生
的系膜区基质沉积[11；其表达增多与肾小球硬化、肾
动脉玻璃样变性、肾小管间质纤维化密切相关。人工
发酵虫草菌丝体干粉[冬虫夏草Cordycepssinen is
(Berk．)Sate．的人工发酵制品，后文简称cs]作为
祖国传统中药冬虫夏草代用品，在临床治疗糖尿病
肾病中应用较普遍，但其作用机制尚未阐明。本研究
拟通过观察CS对糖尿病大鼠肾脏TGF—B表达的
影响，来探讨其对糖尿病肾病的治疗机制。
1材料
1．1 动物：雄性SD大鼠，8周龄，共60只，体重
180～200g，河北医科大学实验动物中心提供。
1．2药物、试剂与仪器：CS(商品名百令胶囊，主要
成分为总氨基酸不少于300mg／g、甘露醇不少于
70mg／g、腺苷不少于0．80mg／g，杭州中美华东有
限公司提供。)TGF—p抗体、DAB显色剂、PV9001
均购自Sigma公司；尿白蛋白放免分析试剂盒(山
东潍坊三维生物工程集团有限公司)；链脲佐菌素
(STZ，美国Sigma公司)；UV一2550紫外分光光度
收稿日期：2006—11一03
基金项目：河北省中医药管理局科研立项项目(05172)
作者简介：王战建，女，河北保定人，主任医师，教授，硕士，研究方向为糖尿病及其慢性并发症的研究。Tel：(0311)87027951—3036
*通讯作者王书畅E—mail：wang—sy2007@163．corn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1221·
计(日本Shimadzu公司)；全自动生化分析仪(日
本Olympus公司，型号为AU一2700)；罗氏
(Roche)血糖仪[瑞士豪夫迈·罗氏诊断产品(上
海)有限公司，型号Glucotrend2]；CMIAS系列多
功能真彩色病理图像分析系统(北京航空航天大学
图像中心提供，型号2001B)；全自动计数仪(西安
国营2627厂，型号XH一6020)。
2方法
2．1 模型制备与给药：设正常组12只。制备48只
糖尿病模型大鼠：按60mg／kg剂量一次性ip以枸
橼酸钠缓冲液(pH4．5)配制的STZ溶液，正常组
ip等量枸橼酸钠缓冲液(pH4．5)，大鼠自由饮水进
食72h后，尾静脉全血血糖≥16．7mmol／L作为造
模成功的标准。糖尿病大鼠随机分组：模型组，低、
中、高剂量(1．2、2．4、3．6g／kg)组，每组各12只，
每日分别ig给予CS溶液(蒸馏水配制)。正常组及
模型组均ig给予5mL／kg蒸馏水，各组均连续给
药16周。
2．2 标本收集及处理：大鼠每周称体重，检测
8：00一9：00和17：00—18：oo时血糖，至实验结束
CS组大鼠有3只血糖恢复至6～7mmol／L，退出
实验。各组大鼠喂养至第16周，上代谢笼收集24h
尿液，测定24h尿白蛋白排泄率(AER)、尿肌酐
(Ucr)。大鼠麻醉后，迅速股静脉穿刺取血，测定血
糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、尿素氮
(BUN)、血肌酐(Scr)，均以全自动生化分析仪测定
(血清取样量为2mL)，计算24h尿肌酐清除率
(Ccr，Ccr=UCr×每分钟尿量／Scr)。取双肾，去包
膜，称质量，计算双肾质量均值、肾质量与体重的比
值(肾脏肥大指数)。
2．3 肾组织病理学检查：取右肾沿正中剖开，置于
10％中性福尔马林液中固定，用于病理检测。HE染
色及苦味酸一苯胺蓝染色：取右肾组织固定，浸蜡、包
埋、连续切片，厚约3肛m，常规HE染色及苦味酸一
苯胺蓝染色，光镜下观察肾组织病理情况。苦味酸一
苯胺蓝染色病理结果分析：高倍镜下，观察每张切片
5个以上大小相似的肾小球，用CMIAS2001B多功
能真彩色病理图像分析系统分析，记录每个‘肾小球苦
味酸一苯胺蓝染色阳性的基质面积、肾小球总面积，以
求得两者的比值(基质阳性面积／肾小球总面积)。
2．4免疫组化法检测TGF—B表达：采用PV法，结
果中阳性表达呈棕褐色。肾小球TGF—B免疫组化染
色半定量分析：每组镜下观察5张切片，每张切片观
察10个大小相近的肾小球，根据下述计分标准计算
各组每个肾小球免疫组化阳性积分均值。0级：肾小
球内无着色，计分为0；1级：肾小球内呈略淡棕色或
散在的点状／丝状，小于肾小球总面积的25％，计分
为1；2级：肾小球内呈节段性团块状／线状棕色，约
占肾小球总面积的25％～50％，计分为2；3级：。肾
小球内呈广泛深棕色，约占肾小球总面积的50％～
75％，计分为3；4级：玻璃样变的肾小球呈强而深棕
色，大于肾小球总面积的75％，计分为4。肾小管一间
质TGF一8免疫组化结果判断应用图像分析系统，计
算其阳性面积占肾小管一间质面积的百分率，取均值
进行比较。
2．5 Western—blotting定量测定TGF～口蛋白表
达：所比较组别为正常组、模型组、3．6g／kgCS组。
新鲜肾脏组织在冰上剪碎，加入适量新配蛋白提取
液，振荡器上振荡lOmin，加NP一40至终质量分数
10％，振荡10min，15000r／min，4℃离心20min，
取上清。考马斯亮蓝G一250染色法测定蛋白的量。
SDS—PAGE电泳，加样量30弘g，电流20～30mA。
剪大小完全吻合或稍小的硝酸纤维素膜及滤纸，作
好标记，电转移过夜，电流65mA／cm2。硝酸纤维素
膜于1×丽春红S染液中染色15～30min，蒸馏水
中漂洗至显带清楚，切下相尖部位的硝酸纤维素膜，
蒸馏水中漂洗，1％BSA封闭液中室温封闭5h。
1：500封闭液稀释的TGF一口兔抗大鼠多抗4℃
过夜，PBS洗3次，10min／次，1：1000封闭液稀释
的生物素化的山羊抗兔抗体室温孵育2h，PBS洗3
次，10min／次，1：1000PBS稀释的辣根酶标记链
酶卵白素室温孵育2h，PBS洗3次，10min／次，新
鲜配制的DAB显色液中显色，TE终止，摄片。
2．6统计学处理：数据以x±s表示，统计方法采用
单因素方差分析，组间比较采用LSD统计方法，采
用SPSSVersion11．5统计软件分析。
3 结果
3．1 一般情况的观察与比较：模型组大鼠与正常组
比较，明显消瘦，易激惹，好打斗，皮毛颜色加深变
黄、无光泽、散乱易集结成簇，多汗，尿色谱深成茶
色，进食量、进水量及尿量明显增多，24h尿量平均
为39．7mL，最多者达65mL；正常组24h尿量平
均为8．7mL，最多者达10mL，两者差异有统计学
意义。CS各组与模型组比较平均进食量、进水量明
显减少，大鼠精神、皮毛色泽及干燥程度、消瘦程度
明显好于模型组；1．2g／kgCS组24h尿量平均为
25．5mL，最少尿量为14mL、最多尿量为45mL；
2．4g／kgCS组2．4h尿量平均为17。5mL，最少尿
万方数据
·1222· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
量为10mL、最多尿量为27mL；3．6g／kgCS组24
h尿量平均为14．5mL，最少尿量为10mL、最多尿
量为27mL。CS各组与模型组比较，差异均有统计
学意义。16周后，模型组与正常组比较体重明显降
低、肾脏肥大指数明显升高，CS各组与模型组比较
体重明显升高，肾脏肥大指数明显降低(表1)。
3．2糖代谢与脂代谢比较：模型组与正常组比较，
血糖、TC、TG显著升高，1．2、2．4g／kgCS组与模
型组比较，血糖明显降低；1．2、2．4、3．6g／kgCS组
与模型组比较，TC、TG明显降低(表2和3)。
3．3 肾功能：模型组与正常组比较，BUN、Scr、
AER明显升高，Cer明显降低；1。2、2．4、3。6g／kg
CS组与模型组比较，BUN、Scr、AER明显降低，Ccr
明显升高(表3)。
3．4各组大鼠肾小球的形态学比较：苦味酸一苯胺
蓝染色镜下显示：正常组中，肾小球系膜区基质无明
显增生；模型组大鼠肾小球系膜区基质中到重度增
多及系膜细胞中到重度增生，伴有间质散在的灶性
管壁增厚，管腔狭窄，偶可见糖蛋白浸润所致的均质
样(轻度玻璃样)改变。1．2g／kgCS组肾小球系膜
区基质中度增多。2．4g／kgCS组肾小球系膜区基
质轻度增多，肾小动脉周围基质增生。3．6g／kgCS
组与模型组比较，系膜区基质增生情况明显减轻。
CMIAS2001B图像分析TGF一8结果显示：模型组
内基质水平相对于正常组明显增多；CS各组相对于
模型组，基质水平有不同程度的减轻，减轻程度随剂
量增加而增加(表4)。
3．5 Western—blotting定量测定TGF—B蛋白表达
结果：TGF一8蛋白表达在3．6g／kgCS组较模型组
明显减轻(图1)。
4讨论
肾小球纤维化是各种原因所致肾小球损伤和病
变的共同结局，也是导致肾功能衰竭的主要的病理
基础。细胞外基质(ECM)在病变肾小球的异常沉
积是引起肾小球纤维化乃至硬化的主要病变。近年
来的研究证实，TGF—p对于肾小球炎症、硬化及病
炎症分布和淋巴细胞浸润。多数肾小动脉内膜增生， 变修复过程起到了重要作用。大部分TGF—p是由相
表1 CS对糖尿病大鼠体重、肾质量、肾脏肥大指数的影响(；±s)
Table1 EffectofCSonbodyweight，kidneyweight，andkidneyhypertrophyindexofdiabeticrats(；±s)
与正常组比较：Ap
Table2 EffectofCSonbloodglucoselevelsofdiabeticrats(；±s)
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1223·
表4 CS对糖尿病大鼠肾脏中TGF—p阳性表达及基质的量的影响(工±s)
Table4 EffectofCSonpositiveexpressionofTGF—BandECMcontenti kidneyofdiabeticrats(；士s)
正常组 模型组3．69／I【gCS组
图1 CS对糖尿病大鼠肾脏TGF-IB蛋白表达的影响
(Westernblotting)
Fig．1EffectofCSonTGF—Bproteinxpression
inkidneyofdiabeticrats(Westernblotting)
对分子质量为1．25×104的同源二聚体的两个单体
由二硫键连接而成[2]。TGF—B对肾小球细胞的增
生、肥大、凋亡以及局部和全身免疫反应都有重要作
用，其主要作用是促进ECM沉积r3~5]。本研究证
实，TGF一口表达增强与ECM沉积相一致，CS可能
通过下调TGF—B表达减轻肾小球纤维化。
本实验中，CS各组较模型组AER、肾脏质量及
肾脏肥大指数均明显下降，ECM增生情况、TGF—p
表达均明显减弱。CS各组ECM增生或TGF一8表
达明显增加情况仅限于肾小球的局部区域，而模型
组常见同一肾小球的多个部位ECM增生或TGF—p
表达明显增加。Western印迹法定量测定TGF一口蛋
白表达结果显示：TGF—B蛋白表达在3．6g／kgCS
组较模型组明显减轻。推测CS可能通过降低TGF—
19表达而抑制ECM增生从而治疗糖尿病肾病。本实
验观察到：在一定范围内，CS疗效随剂量增加而
增加。
本研究显示：1．2、2．4g／kgCS组较模型组血
糖明显降低；CS各剂量组AER、TGF一8表达及
ECM增生情况均较模型组有所改善，但3．6g／kg
CS组对降低AER、TGF一口表达及ECM增生效果
最明显，然而，该剂量组降血糖效果并不明显。由此
可以推测：CS对肾脏功能的保护作用除能够改善肾
小球持续的高滤过外可能尚有其他途径。
本实验结果显示CS有显著的抑制系膜增生、
降低尿蛋白作用，而且在一定范围内，疗效呈剂量依
赖性。值得注意的是，CS组中共有3只血糖恢复至正
常水平、肾脏病理仅有轻微改变，模型组无此情况出
现。是CS的特殊疗效还是偶然，有待于进一步证实。
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祛浊通痹颗粒对急性痛风模型炎症因子的调节作用
金晨宇1，孙梅p，温成平2，詹小萍1
(1．浙江大学医学院附属第二医院中医科，浙江杭州310009；2．浙江中医药大学，浙江杭州310000)
急性痛风性关节炎以关节突发性红、肿、热、痛
为特征，是由尿酸盐结晶物在关节及其周围软组织
沉积而引起炎症反应的一种疾病。临床上笔者应用
自拟处方祛浊通痹颗粒治疗痛风取得了显著的疗
效E1f，动物实验也证实其有较好的抗炎镇痛作用。本
实验就其对急性痛风模型大鼠血浆及关节滑膜组织
收稿日期：2006—12—13
基金项目：浙江省中医药基金资助项目(491020一w50536)
作者简介：金晨宇(1972一)，女，浙江义乌人，浙江大学讲师，医学硕士，主攻方向风湿病的研究。
Tel：(0571)87788511E—mail：jeysbo@hotmail．corn
*通讯作者孙梅Tel：(0571)87783774E～mail：jcysbo@hotmail．corn
万方数据
人工发酵虫草菌丝体干粉在糖尿病大鼠肾脏组织中的抗纤维
化作用
作者： 王战建， 王书畅
作者单位： 河北医科大学第三医院,内分泌科,河北,石家庄,050051
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(8)
被引用次数： 1次
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引证文献(1条)
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[期刊论文]-中国中西医结合杂志 2012(4)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200708036.aspx