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马兜铃酸的测定方法现状分析
路金才1，韩娜1，杜晓曦2，周跃华2
(1．沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳110016；2．国家食品药品监督管理局药品审评中心，北京100038)
马兜铃酸是一类广泛存在于马兜铃科植物中的含有硝
基的菲类有机酸，近年来，国外不断有报道证明该为成分有
肾毒性，可引起肾间质纤维化，许多国家采取了禁止或限制
使用马兜铃科中药的措施，这使中药的安全性受到了很大质
疑。马兜铃科药用植物在我国的使用广泛，加之马兜铃科许
多植物名称混淆，药材混用现象严重，为确保临床用药的安
全有效，对于那些可能含有马兜铃酸的药用植物及制剂必须
进行严格的控制。为此，选择既符合检出限度的要求又方便
可行的马兜铃酸测定方法尤为重要，马兜铃酸的测定方法很
多，不同方法对于马兜铃酸测定的结果有很大差别。为此，本
文对文献中报道过的马兜铃酸测定方法进行了整理、分析，
以便为实际应用时参考。
1高效液相色谱(HPLC)
高效液相色谱法是目前马兜铃酸测定应用最多的方法，
该法比较灵敏、准确，在实际应用中还有多种条件组合可供
选择以适应不同的待测样品。
1．1 供试品溶液的制备：在马兜铃酸测定时供试品溶液的
制备是很重要的一步，为了提高提取效率，在有效提取之前
一般可对待测样品进行浸泡，在提取方法的选择上，目前仍
以甲醇索氏提取法、乙醇索氏提取法、甲醇超声提取法、5％
氨水冷浸法为主。有文献采用振摇法，并用该法对不同极性
的溶剂提取率进行了比较，以马兜铃酸A及马兜铃酸B为
参考指标，发现70％甲醇的提取率最高[1]。由于马兜铃酸是
酸性物质，提取时在有机溶剂中加入适量甲酸提取效果会更
好，利用这一原理，选择了甲醇一10％甲酸(80：20)进行提
取；刘燕等[2]也比较了乙醇、丙酮、含10％甲酸的二氯甲烷
及含10％甲酸的丙酮的提取率，以含10％甲酸的丙酮提取
率最高。
初步提取之后，可以直接滤过、蒸干、溶解、定容，也可以
进一步进行纯化。纯化的主要办法是进行萃取，这样有利于
除去内酰胺、木兰碱等杂质成分[2]。萃取溶剂多以氯仿、乙醚
为主，利用NaOH、HCl、H2SO。等调节酸碱度，当pH一10
时，有机酸大量成盐进入碱水层，当pH=2时，有机酸又会
游离到有机相，如此反复多次萃取，最大限度的转移马兜铃
酸。近年来，受到美国食品药品管理局(FoodandDrugsAd—
ministration，FDA)对马兜铃酸检测办法的影响，超声后直
接离心，吸取上清液的办法也应用得越来越广泛。Lee等∞3
还报道了用PHP—LH一20(I．5cm×2cm)柱，25C下以30
mL／min的体积流量先用20mLH20和40mL甲醇，再用
130mL含10％乙酸的甲醇液冲柱进行供试品溶液的制备。
另见报道对粗提物也采用了固相纯化技术[4]。
1．2对照品溶液的制备：检测时所用对照品有马兜铃酸A，
也有马兜铃酸A和马兜铃酸B的混合物，多以甲醇溶解，配
成溶液后一般要进行超声脱气处理。
1．3高效液相色谱一紫外分光光度法
1．3．1紫外检测器：现在使用的紫外检测器主要有可变波
长紫外检测器、紫外一可见分光光度检测器、二极管矩阵检测
器(DAD)。马兜铃酸A的最大吸收波长在224、253、319、390
nm处，因此在紫外检测时，检测波长的选择很多。Chang
等[51选择395nm作检测波长，认为该波长下干扰峰最少。还
有文献进一步报道，在对含有马兜铃酸的成药进行分析时，
以马兜铃酸B为指标，在254或395nm作检测波长时均受
干扰峰影响，以马兜铃酸A为指标254nm处易受干扰，395
nm检测时干扰小，故选择395nm作检测波长。应当考虑。
收稿日期：2005—08—19
作者简介：路金才(1971一)，男，博士，副教授，主要从事中药资源开发及中药材质量控制的教学科研工作。
Tel：(024)23986500Fax：(024)23922065E—mail：jincailu@yahoo．tom．cn
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中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月
390nm处的吸收系数很小，作为检测波长时，仪器的灵敏度
可能会稍差，能否作为最佳的检测波长还有待商榷。目前，使
用HPLC—UV对马兜铃酸进行质量检测的报道中，以信噪比
2：1计，最低检测限为2．48×10_4pg。
1．3．2色谱柱：固定相填料多为反相C。s填料，应用的色谱
柱有4．6mm×250mm、6mm×150nrim、3mm×250mm、
5mm×300mm等多种规格。填料粒径多为5p．m，也有10、
3．5}lm的报道。关于系统适应性实验的报道中，色谱柱理论
塔板数至少在2000以上。
1．3．3流动相：常用的流动相系统为甲醇一水一醋酸，比例随
实验条件差异而有所不同。Singh等卟1对流动相进行了优化，
通过比较不同的流动相乙腈一水一三氟乙酸、乙腈一水一醋酸、乙
腈一水一醋酸一四氢呋喃及乙腈一水一三氟乙酸一四氢呋喃下峰的
对称性、纯度、容量因子及理论塔板数，发现乙腈一水一三氟乙
酸一四氢呋喃(50：50：1：1)为最优的溶剂系统。此外，其他
的溶剂系统还有甲醇一四氢呋喃一0．025mol／LKHzPO；
(pH=3．8)E“、乙腈一2．0％醋酸‘⋯、乙腈一0．3％碳酸铵(pH一
7．5)[3]等，为保证良好的分离度，还可以采用梯度洗脱的办
法，有报道采用乙腈一甲醇一0．1％三氟乙酸、乙腈一水一0．005％
三氟乙酸[8]，不断调整比例以获得满意的分离效果。此外赵
霓等[9]利用离子对色谱法适合分离有机酸类物质的原理，采
用甲醇一1．28％四丁基溴化铵醋酸一pH一3．6醋酸一醋酸钠缓
冲液(2：1：1)作流动相，对马兜铃酸进行了测定，也取得了
满意的结果。
目前，大多数HPLC法对马兜铃酸进行分析时保留时
间一般在15min左右，有时甚至能达到40min，不利于高通
量的马兜铃酸检测，近期有报道解决了这一问题[1⋯，采用4．
6mm×250mm柱子，填料粒径为5p．m，254nm作检测波
长，对流动相进行了优化，确定最优的溶剂系统为甲醇一水
(60：40)，在该条件下马兜铃酸A与马兜铃酸B在5min内
得到了良好的基线分离。
1．3．4柱温及体积流量：通常设在1．0mL／min，快者可达
1．2mL／min，慢者在0．5mL／min。柱温一般设在室温，高者
达40℃。
1．4液相色谱一质谱(LC—MS)：近年来，LC—MS法有了很大发
展，是目前比较灵敏的方法。LC—MS法可以提供总离子流色谱
图、质量色谱图及对应于每个色谱峰的物质的质谱图，故可以
进行定性、定量分析。近年来对于LC—MS法的报道已不再拘泥
于简单的一液一质的串联，而是趋向于多个质谱串联，或与多
元化的检测器进行串联。Jong等[83采用LC一(+)APCI—MS—
MS技术，以消炎痛作为内标物，对9种细辛中马兜铃酸进行了
定量分析。还有人采用LC—UV—DAD—MS对马兜铃酸进行了检
测，图谱信息包括保留时间、质量碎片及各色谱峰的紫外吸收
情况，可以简单的判断出峰的纯度，该报道采用(+)APCI与离
子肼质量分析，用选择离子检测模式得到的最低检测限是2ng，
采用全扫描时最低检测限为15ng。
在LC—MS技术中，流量对分析的影响比较大，宜根据
柱内径大小加以选择。如2．1mm内径配0．2mL／min体积
流量，3．0mm内径配0．5mL／min，4．6mm内径配1．0mL／
rain体积流量等。离子扫描范围根据定性、定量要求不同加
以选择。LC—MS法是目前马兜铃酸含测最灵敏的方法，但由
于仪器价格昂贵，短时间内难以推广。
2薄层色谱法(TLC)
2．1供试品溶液的制备：薄层色谱法供试品溶液的制备方
法与HPLC供试品的制备方法相比较为简单，提取方法以
乙醇回流或索氏提取为主，此外，还有甲醇回流提取、甲醇索
氏提取或丙酮索氏提取法En3等。一般不需要进行复杂的纯
化，直接滤过、蒸干、定容即可。对照品多用马兜铃酸A。
2．2薄层板：目前报道中薄层色谱固定相主要采用硅胶G
板和GFzst板2种。
2．3 展开剂：有甲苯一醋酸乙酯一水一甲酸、苯一甲醇一36％醋
酸、苯一丙酮一甲酸、甲苯一冰醋酸一水一甲酸、氯仿一甲醇一醋酸乙
酯、氯仿一环己烷一醋酸乙酯一冰醋酸、石油醚一丙酮一冰醋酸、氯
仿一甲醇一醋酸、苯一庚烷．氯仿一醋酸等。总体来看，展开剂极性
不大，均加入适量醋酸以防止拖尾现象的产生。
2．4斑点检测：一般马兜铃都是在日光下或紫外365nm下
检视，若使用GF：。。板，紫外254am下显示暗斑。黄顺旺
等D2]报道了在紫外365nm及日光下检视，马兜铃酸的最低
检测限为0．369pg。有文献报道n]，用含0．5％二苯胺的
60％H：So。显色，100℃下加热10min后，日光下可见深蓝
色或黑色斑点，最低检测限可达1pg；紫外366Ili11下可见蓝
色荧光斑点，最低检测限可达0．2／*g。
2．5扫描参数：薄层扫描法在早期马兜铃酸的检测中应用较
多，但该法的检出限较高，灵敏度和仪器误差也较大。扫描方
式主要有单波长反射法据齿扫描、双波长反射法据齿扫描、单
波长反射法线性扫描。采用单波长扫描时，扫描波长一般设在
320nm处，若采用双波长扫描，扫描波长一般有以下几种设
置：凡一395rim，如一500nm；砖一320nm，,1R一370nm；As=
280rim，k一370rim等。付桂香等Ex33对线性化参数进行了考
察，发现Sx一3时线性最好，狭缝宽度主要有0．1mm×0．1
mm、0．4mm×0．4mm、1．2mm×1．2mm等几种。
3毛细管区带电泳法(CZE)
近年来，毛细管电泳法(CE)发展迅猛，无论从柱效、速度，
还是从样品用量、成本来看，该法都显示了一定的优越性，通过
改变操作模式及流动相的成分，CE具有很大的选择性，将CE
用于马兜铃酸的分析，也有了很大的发展，值得推广。有文献报
道，采用CZE法对马兜铃酸进行质量分析n“，选择未涂融合硅
胶的毛细管柱(48．5cm×50弘m)，10C柱温，30kV电压，254
rlm检测波长，用优化流动相120mm含10mol／L13-CD的硼
酸盐缓冲液(pH一8．8)洗脱，4min内马兜铃酸A和马兜铃酸
B得到良好分离，最低检测限可达1．0／-g／mL。
4紫外分光光度法(UV)
紫外分光光度法用于对马兜铃酸的测定，操作及原理都
比较简单，主要用于总酸类成分的测定。尚明英等[1朝将检测
波长设在310Dm处，用UV法对20批关木通中总马兜铃酸
进行了测定，回收率可达98．5％。此外，有文献采用二阶导
万方数据
中草芮 ChineseTraditionalandHerbDrugs第37卷第7期2006年7月
数分光光度法对血浆中的马兜铃酸进行了测定，消除血浆光
谱的干扰，对于成分复杂的天然药物，该法有一定指导作用。
5极谱法(polarography)
由于马兜铃酸的分子结构上有硝基基团，在滴汞电极上
能产生还原波，利用这一性质可以用极谱法对马兜铃酸进行
测定。张秀琴等Els]报道了在(25±1)。C，pH一8．5Britton—
Robinson缓冲溶液做底液条件下测定朱砂莲中马兜铃酸的
量，获得满意的回收率。目前报道的极谱法中最低检测限为
0．01mg／L。极谱法专属性相对较差，应用的最少。
6讨论
HPLC法是目前应用比较广泛、比较好的检测方法。建
议实际应用时采用HPLC法进行马兜铃酸的测定或限量检
查，并进行系统的方法学研究，以客观、真实地反映药材及制
剂中马兜铃酸的状况。在实际应用时应关注以下问题：(1)检
测限是HPLC方法学考察的重要内容，应尽量降低检测限。
一般以信躁比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量
确定检测限。如果检测限过高，则应对检测方法或条件进行
调整。(2)药材中所含成分较多，不同植物中所含成分也各不
相同，相关中成药中的成分则更复杂，所以进行方法学研究
时，应当关注方法的属性。(3)测定用样品的制备也会对测定
结果产生很大影响。当供试样品的浓度较低时，会影响马兜
铃酸的检出。应尽量提高供试样品的浓度。(4)马兜铃酸类成
分有多种，总酸类成分大都具有毒性，目前的文献报道和药
品注册申报的资料中都只是对马兜铃酸A进行了定量控
制，有条件时，应当鼓励对其他的马兜铃酸类成分，或对总酸
类成分进行研究。
马兜铃酸的测定方法很多，每种方法的方法学研究还不
很完善，由于马兜铃酸的毒性作用大，所以十分有必要建立一
个检测限度低，线性范围宽，重现性好的质量控制方法，这不
仅关系到用药安全问题，也关系到我国的中药能否通过技术
壁垒走向国际市场。马兜铃酸的控制办法还有待于深入研究。
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松龄血脉康胶囊治疗心脑血管疾病I临床研究进展
张庆平
(义乌中医院，浙江义乌322000)
心脑血管疾病是循环系统和神经系统的一大类严重疾
病，是由动脉血管粥样硬化引起的心脏、脑缺血或出血的疾
病。据世界卫生组织公布的数据显示，心脑血管疾病已经成
为危害人类健康的第一杀手，目前，我国约有i．1亿人患有
收稿日期：2006—02—16
高血压、动脉硬化等心脑血管疾病，6000万人患有冠心病，
7000万人患有脑梗死或者脑溢血，40岁以上的人中，约有
57％的人患有不同程度的心脑血管疾病。心脑血管疾病以其
发病率高，兼有高死亡率、高复发率、高致残率的特点，成为
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万方数据
马兜铃酸的测定方法现状分析
作者： 路金才， 韩娜， 杜晓曦， 周跃华
作者单位： 路金才,韩娜(沈阳药科大学中药学院,辽宁,沈阳,110016)， 杜晓曦,周跃华(国家食品药品
监督管理局药品审评中心,北京,100038)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(7)
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引证文献(6条)
1.韩娜.路金才.毕开顺.杜晓曦.周跃华.周娟 RP-HPLC法测定14种中药材中马兜铃酸A的含量[期刊论文]-沈阳药科
大学学报 2008(2)
2.任华忠.万丽.王书林.王金鹏 不同产地朱砂莲中马兜铃酸A的含量比较[期刊论文]-中国药业 2011(11)
3.曹蕊.王铮.张春红.张连学 RP-HPLC法测定不同方法炮制关木通中马兜铃酸A的含量[期刊论文]-亚太传统医药
2009(7)
4.张颖梅.李一珊.孙伟旭.林吉.倪晨 关木通及其炮制品马兜铃酸A 含量对比研究[期刊论文]-中国中医药现代远程
教育 2012(6)
5.曹蕊.张春红.王铮.张连学 RP-HPLC法测定不同方法炮制关木通中马兜铃酸的含量[期刊论文]-现代农业科技
2009(10)
6.胡志祥.王永红.彭崇胜.刘忠 近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研究进展[期刊论文]-中草药 2010(2)
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