全 文 ：·1164· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月
References：
【l YangXL，XieCX，XuHB，eta1．Preparationofnano
ConchaHaliotidisP】．cN：01106679．2，2001—04—30．
E2]XieCX，YangxL，xuHB，eta1．Preparationofnano
Reagler[P]．CN：00116045．1，2000—09—25．
[3]XuHB，XieCX，YangXL，eta1．Preparationofnano
magnetP1．CN：01106680．6，2001—04—30．
E4]WangXB，XiRG，LiZL，eta1．Preparationofnan particles
RealgarpowdersEJ]．PhamJChinPLA(解放军药学学报)．
2002，18(3)：129-134．
E5]YangSZ．EffectofAstragalusmembranaceusonnat ralkiller
cellactivityandinductionofa—and丫一interferoninpatientswith
coxsackieBv rusEJ]．ChinMedJ(中医杂志)，1990，103：
304—308．
[6]LiangSW．QuantitativeAna如sisofChineseTraditional
MedicalPreparation(中药制剂的定量分析)[M]．Beijing：
ChineseTraditionalMediealPress．1997．
高效毛细管电泳法测定玉米花粉多糖中单糖的组成
耿 越，王建波，刘靓雯，张明伟，刘书明
(山东师范大学生命科学学院，山东济南250014)
摘要：目的采用高效毛细管电泳法测定玉米花粉多糖中单糖的组成。方法玉米花粉多糖水解后，经a一萘胺衍
生化，高效毛细管电泳分析。电泳条件：缓冲液为75mmol／L硼砂溶液(pH9．5)；柱温22‘C；电压16kV；检测波长
200am；气压进样，进样时间5S。结果玉米花粉多糖主要是由葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖3种单糖组成。结论
高效毛细管电泳可用于测定多糖中单糖的组成。
关键词：玉米花粉；多糖；高效毛细管电泳
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)08—1164—03
Determinationofmon saccharidecompositionofmaizepollenpolysaccharidesbyHPCE
GENGYue，WANGJian—bo，LIUJing-wen，ZHANGMing—wei，LIUShu—ming
(CollegeofLifeScience，ShandongNormalUniversity，Jinan250014，China)
Keywords：maizepoll n；polysaccharides；highpe formancecap llarylectrophoresis(HPCE)
玉米花粉多糖具有多种免疫增强活性，对肺泡
及人胸腔内的巨噬细胞有明显的激活作用n~3]，并
能明显抑制小鼠S。。。肿瘤细胞的生长[3“]。
高效毛细管电泳(HPCE)技术具有样品用量
少、时间短、灵敏度高、分离效果明显的特点，在糖类
物质的检测方面具有独特的优势。由于单糖在水溶
液中解离能力极差，在强碱条件下才能带上电荷。使
用含硼砂的缓冲液会让单糖在较低的pH条件下带
上足够的负电荷。不同的单糖在相同介质条件下与
硼砂的络合物具有有效淌度的差异，足以被毛细管
电泳分开。单糖的紫外吸收很弱，采用a一萘胺为衍
生试剂使其带上可被检测的基团[5]。本实验采用此
法测定了三氯醋酸法去蛋白的玉米花粉多糖中的单
糖组成，并将结果与Sevag法去蛋白的玉米花粉多
糖中的单糖组成进行比较。
1仪器与试剂
电泳装置为BeckmanP／ACE5000，操作软件为
BeckmanP／ACEStation1．0，毛细管柱(57cmx50
弘m，有效长度50cm)(河北永年光导纤维厂)。
半乳糖、木糖、甘露糖对照品(进口分装)，葡萄
糖、鼠李糖、阿拉伯糖对照品(国产分析试剂)；玉米
花粉购于济南蜂产品专卖店；试剂均为分析纯，水为
双蒸水。
电泳条件：缓冲液为75mmol／L硼砂溶液(pH
9．5)；柱温22℃；电压16kV；检测波长200nm；气
压进样，进样时间5s；清洗液0．1mol／LHCl溶液、
0．1mol／LNaOH溶液、重蒸水。
2方法与结果
2．1 衍生试剂的配制：称取0【一萘胺143mg和
NaBH。CN35mg，溶于450ttL无水甲醇中，再加入
41肛L冰醋酸，即得。
2．2单糖对照品溶液的制备：取各种单糖用重蒸水
配成质量浓度为20mg／mL的水溶液。各取1mL
制成单糖对照品混合液。
收稿日期：2004一11-27
基金项目：山东省自然科学基金资助项目(Y2002D11)
作者简介：耿越(1965一)，男，山东淄博人，博士，教授，1999年毕业于同济大学，获博士学位，主要从事天然产物研究。
Tel：(0531)86180196E—mail：gengyr@sdnu．edu．en
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月·1165·
2．3多糖供试品溶液的制备：玉米花粉500g加入
1000mL去离子水浸泡过夜，组织捣碎机捣碎，然
后加入约8000mL水，煎煮3h，重复3次。合并浸
提液进行减压浓缩，用3倍体积95％乙醇沉淀，离
心，取沉淀，用三氯醋酸法去蛋白，再经3倍体积乙
醇沉淀，得到多糖粗品。多糖粗品加水溶解后，依次
用终体积分数为20％、40％、60％、80％乙醇沉淀，
得出4种组分，再用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水干燥，
得粗多糖，分别命名为PMA(4．15g)，PMB(3．77
g)，PMC(5．98g)，PMD(4．75g)。4种组分按原比
例混合得到PPM。
所有多糖经过紫外一可见全波长扫描，均不含有
蛋白、核酸。PMA、PMC分别经SepharoseCL一6B
柱色谱分离，得到两种纯化多糖PMA11、PMCIV。
取各种玉米花粉多糖20mg(PMAⅡ、PMCⅣ
为5rag)，加入1mL、1mol／LH：SO。，溶解后放入
安瓿管中封管，100℃恒温水解8h，冷却后用碳酸
钡完全中和，放置过夜，4000r／min离心10min，取
上清液，待衍生。各取多糖的水解液、单糖对照品混
合液、单糖溶液200pL于安瓿管中，分别加40pL
衍生试剂，封管，80‘C恒温2h衍生化。然后各加入
1mL三氯甲烷和重蒸水，反复离心萃取3次，取上
层水相滤过，定容至5mL，经0．45弘m微孔滤膜滤
过，取滤液作为供试品溶液。
2．4标准曲线的制备：将衍生化的单糖对照品混合
液精确稀释2、4、8、16倍，得到质量浓度分别为
133．33、66．67、33．33、16．67、8．33,ug／mL的溶液，
测定回归方程，以质量浓度对峰面积进行回归，得回
5 3
归方程，线性范围为8．33～133．33tzg／mL，回归方
程为鼠李糖：Y一15204．75+1688．99X，r一
0．9885；木糖：y一26053．12+2710．28X，r一
0．9870；葡萄糖：Y一9510．174-104．93X，r一
0．9967；甘露糖：Y一5351．83+666．14X，r一
0．9937；阿拉伯糖：Y=44930．374-4563．69X，
r一---0．9857；半乳糖：Y一24358．79+2808．19X，
r=0．9922。
2．5测定：测定单糖对照品混合液的电泳图谱，然
后逐一加入1种单糖，根据峰面积的变化，确定对应
的单糖。根据出峰时间，通过P／ACEStation1．0软
件进行比较对照，确定各种多糖的单糖组成，结果见
表1，图谱见图1。
表1 多糖中单糖的峰面积百分数
Table1 Percentageofpeakareaofdifferent
mOnosaccharidesinpOlysaccharides
2．6多糖中各单糖组成：根据多糖中单糖峰面积计
算多糖中单糖的物质的量的比值，结果PMA中
Glu：Ara：Gal为7．58：0．04：1，PMB中Glu：
Ara：Gal为7．22：0．08：1，PMC中Rha：Glu：
Ara：Gal为0．40：1：1．42：4．53，PMD中Glu：
3 6
25 15 20 25 15 20 25 15 20 25
3 5 3 6
20 25 15 20 25 15 20 25 15 20
t／rain
1一鼠李糖2一木糖 3一葡萄糖4一甘露糖 5一阿拉伯糠 6一半乳糖
1一Rha2-Xyl3-Glu4-Man5-Ara6-Gal
图1 单糖对照品混合液(A)、PMA(B)、PMB(c)、PMC(D)、PMD(E)、PPM(F)、PMAII(G)
和PMCIV(H)的高效毛细管电泳图
Fig．1HPCEchromatogramsofmono accharidemixereferencesubstances(A)，PMA(B)，
PMB(C)，PMC(D)，PMD(E)，PPM(F)，PMAⅡ(G)，andPMClV(H)
万方数据
·1166· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第8期2005年8月
Ara：Gal为1：1．50：1．19，PPM中Rha：Glu：
Ara：Gal为0．05：2．54：1：1．67，PMAⅡ中
Glu：Gal为13．51：1，PMCN中Glu：Ara：Gal为
1：0．49：7．22。可见，玉米花粉多糖主要由葡萄糖、
阿拉伯糖、半乳糖组成，并含有微量的鼠李糖、木糖，
但各组分之间又有明显的差异。
3讨论
将这一结果与Sevag法去蛋白的玉米花粉多糖
中的单糖成分[63进行比较，发现不同的去蛋白方法
对不同组分中的单糖组成有一定的影响，每种多糖
中单糖都有一定的变化，但变化不大。如PMA用
Sevag法去蛋白的多糖中单糖的峰面积比是Glu：
Ara：Gal为80,247：7．822：11．930；三氯醋酸法
去蛋白的多糖中单糖的峰面积比是Glu：Ara：Gal
为67．346：10．330：22．324。
目前多糖中单糖组成的分析主要采用纸色谱、
液相色谱、气相色谱，样品用量大，条件严格。本实验
采用HPCE检测玉米花粉多糖中单糖组成，操作简
单，精度高，可以成为一种测定多糖中单糖组成的一
种方法。
References：
E13LiuJX，ZhangYL，WangKF，eta1．Theactivationeffect
ofmaizepollenpolysaccharidesonalv olarm crophagesof
ratsEJ3．ChinJPathophysiol(中国病理生理杂志)，1999，15
(6)：509—511．
E2]JinLQ，LiuJX，WangKF，eta1．Theactivationeffectof
maizepollenpolysaccharidesonhumanthoracicavity
macrophagesEJ3．ChinJPatholt，hysiol(中国病理生理杂志)，
2000，16(8)：726—729．
[3]GengY，WangKF。ZhangYL．Immunologicaleffe tsof
polysaccharidesfrombepollenofmaize口]．ActaZooSin
(动物学报)，2001，47：250—254．
I-4]WangKF，ZouCZ，LuM．Studiesonthepolysaccharidesof
maizepolleni hibitingeffecttotheproliferationofSarcoma
180cells[J]．JBee(蜜蜂杂志)，2001(2)：3-4．
[53GengY，WangNB，LiHY，eta1．Compositionanalysisf
polysaccharidesfrompollenbycapillaryelectrophoresis[J]．
ShandongSci(山东科学)，2001，14(4)：10—13．
[6]WangJ B，LinLx，GengY，eta1．Monosaccharides
compositionanalysisofpolysaccharidesfrommaizepollen[J-I．
JShandongNormalUniv(山东师范大学学报)，2004，19
(3)：69—7】．
HPLC法测定返魂草及其注射剂中绿原酸
王继彦1，李丽静1，张莲珠2
(1．长春中医学院药学院，吉林长春130117；2．吉林天药科技股份有限公司，吉林长春130012)
返魂草注射剂是以返魂草Senecio
cannabifoliusLess为原料提取制成的单味中药冻
干粉针制剂，具清热解毒、宣肺化痰等功效，本院内
临床用于治疗肺热症(病毒和细菌性肺炎)和肺心症
的治疗。笔者在新药开发研制过程中，从抗病毒活性
较强的水溶性部分中分得已知活性成分绿原酸
(chlorogenicacid)和咖啡酸(caffeiccid)。为了有效
的控制原料及成品质量，本实验选定绿原酸为定量
指标，建立了高效液相色谱测定方法。
1仪器与材料
日本岛津LC一10AT高效液相色谱，SPD—
IOAUV—VIS检测器，wDL一95色谱工作站。甲醇
为色谱纯，其他试剂均为分析纯。绿原酸对照品购自
中国药品生物制品检定所，批号0753—9607。返魂草
药材购自吉林省敦化县，由长春中医学院药学院张
亚芝教授鉴定为菊科植物麻叶千里光(返魂草)S．
cannabifoliusLess．的干燥地上部分。返魂草注射
剂由长春中医学院附属医院新药研究中心提供。
2方法与结果
2．1 色谱分析条件：色谱柱为Shim—PackCLC—
ODS分析柱(250mm×4．6mm，5肛m)；流动相：甲
醇一0．05％三氟乙酸(26：74)；体积流量：1．0mL／
rain；检测波长：327nm；进样量：20肛L。
2．2对照品溶液的制备：精密称取经减压干燥(50
。C)至恒重的绿原酸对照品10mg，置100mL量瓶
中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(临用现配，
避光、低温)。
2．3药材供试品溶液的制备：取返魂草药材粉末约
1g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，加50％甲
醇30mL，于避光处放置12h，超声处理30rain，滤
收稿日期：200411—26
基金项目：国家中医药管理局科研基金资助项目(972009)
作者简介：王继彦(1953一)，男，长春市人，博士，副研究员，主要从事天然药物化学和中药新药开发研究。
Tel：(0431)6172211E—mail：jiyanwan9126@126．com
万方数据
高效毛细管电泳法测定玉米花粉多糖中单糖的组成
作者： 耿越， 王建波， 刘靓雯， 张明伟， 刘书明， GENG Yue， WANG Jian-bo， LIU Jing-
wen， ZHANG Ming-wei， LIU Shu-ming
作者单位： 山东师范大学生命科学学院,山东,济南,250014
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(8)
被引用次数： 7次

参考文献(6条)
1.Liu J X;Zhang Y L;Wang K F The activation effect of maize pollen polysaccharides on alveolar
macrophages of rats[期刊论文]-中国病理生理杂志 1999(06)
2.Jin L Q;Liu J X;Wang K F The activation effect of maize pollen polysaccharides on human thoracic
cavity macrophages[期刊论文]-中国病病生理杂志 2000(08)
3.Geng Y;Wang K F;Zhang Y L Immunological effects of polysaccharides from bee pollen of maize 2001
4.Wang K F;Zou C Z;Lu M Studies on the polysaccharides of maize pollen inhibiting effect to the
proliferation of Sarcoma 180 cells[期刊论文]-蜜蜂杂志 2001(02)
5.Geng Y;Wang N B;Li H Y Composition analysis of polysaccharides from pollen by capillary
electrophoresis[期刊论文]-山东科学 2001(04)
6.Wang J B;Lin L X;Geng Y Monosaccharides composition analysis of polysaccharides from maize pollen
[期刊论文]-山东师范大学学报(自然科学版) 2004(03)

本文读者也读过(10条)
1. 季宇彬.陈学军.汲晨锋 高效毛细管电泳法测定芦笋多糖中单糖的组成[会议论文]-2006
2. 王荣浩 蔗糖、多糖水解产物的还原性实验改进[期刊论文]-卫生职业教育2007,25(16)
3. 高艳玲.杨迪.张楠.路福平.杜连祥.段少军.GAO Yan-ling.YANG Di.ZHANG Nan.LU Fu-ping.DU Lian-xiang.
DUAN Shao-jun LYCD中多糖的提纯、含量测定、组分分析和结构鉴定[期刊论文]-食品研究与开发2008,29(6)
4. 黄雪松.杨爱华 大蒜多糖的酸水解研究[会议论文]-2007
5. 刘咏.成战胜.Liu Yong.Chen Zhansheng 茶叶多糖的提取纯化及其单糖组分的鉴定[期刊论文]-食品与发酵工业
2005,31(6)
6. 刘敦华.谷文英.LIU Dun-hua.GU Wen-ying 沙蒿籽胶多糖的分级纯化和结构分析[期刊论文]-食品科学
2007,28(3)
7. 朱丽玢.洪筱坤 云芝糖肽高效毛细管电泳分析[期刊论文]-中药材2000,23(4)
8. 张海英.ZHANG Hai-ying 蒙山九州虫草多糖中的单糖组成分析[期刊论文]-德州学院学报2007,23(2)
9. 王建波.林鲁霞.窦江丽.耿越 玉米花粉多糖中的单糖组成分析[期刊论文]-山东师范大学学报（自然科学版）
2004,19(3)
10. 郑国琦.罗杰.许兴.王俊.Zheng Guoqi.Luo Jie.Xu Xing.Wang Jun 宁夏枸杞果实和叶片糖积累及其枸杞多糖
单糖组成研究[期刊论文]-农业科学研究2008,29(3)

引证文献(7条)
1.李正欣.李妍.秦琦 研磨法与仿生法制备玉米花粉中营养成分的比较[期刊论文]-药物评价研究 2011(4)
2.闫波.勉强辉.孙述奎.常军民 高效毛细管电泳测定天山花楸多糖中单糖组分及含量[期刊论文]-新疆中医药
2011(5)
3.孙莲.孟磊.张煊.王岩.薛照云 柱前衍生-高效毛细管电泳测定新疆药桑桑叶多糖中单糖的组成[期刊论文]-中成
药 2010(2)
4.马晓丽.孟磊.孙莲.李新霞.吕成军 大蒜多糖中单糖组分的毛细管电泳研究[期刊论文]-时珍国医国药 2010(5)
5.方艳夕.朱金坤.时维静.毛斌斌.刘汉珍.俞浩 白头翁中糖类组分的毛细管电泳-安培检测研究[期刊论文]-中成药
2013(7)
6.赵昌辉.李泳财.何东.卢卫红 玉米花粉成分、功能及其应用的研究[期刊论文]-食品工业科技 2010(9)
7.刘婷.周光明 多糖的提取和分析方法[期刊论文]-化工时刊 2008(3)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200508020.aspx