全 文 ：中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·18 1·
红车轴草的最佳采收期和前处理加工方法研究
刘 晗1’3，罗 琪2，欧阳勇2，杜方麓1’3，曾建国1’2+
(1．湖南省中药提取工程研究中心，湖南长沙410331f2．湖南九汇现代中药有限公司，湖南长沙410331；
3．湖南中医药大学，湖南长沙410007)
摘要：目的考察影响红车轴草中异黄酮量的因素，确定最佳采收期和最适宜的前处理方法。方法采用乙醇回
流提取。以芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的总量为指标，采用HPLC法测定。色谱条件：伊利特HypersilBDSC-s柱(250
mm×4．6mm，5弘m)}乙腈一0。1％磷酸水溶液梯度洗脱，柱温25℃}体积流量0。8mL／min，进样量10儿。比较红
车轴草不同采收时期、不同产地及栽培方式、不同方式的前处理干燥方法和不同采收部位中有效成分的差异。结果
野生青苗期的红车轴草中总异黄酮的量最高，结合生物总量则花蕾期为最佳采收期，同一植株中，叶中的量最高，
茎中次之，花中最低；新鲜状态快速烘干能高水平保持其中的有效成分。结论红车轴草中总异黄酮的量受采收时
期、产地、干燥方式的影响}红车轴草最适宜采收期为花蕾期至初花期，鲜活状态下的异黄酮的总量最高，
关键词：红车轴草；异黄酮，采收期I前处理方法
中图分类号：R284．2}R286．02文献标识码：A 文章嗣号：0253—2670(2007)12—1821—03
BestharvestperiodandpreprocessingmethodforTrifoliumpratense
LIUHanl”，LUOQi2，OUYANGon92，DUFang—lul”，ZENGJian—gu01’2
(1·HunanEngineeringResearchCenterofBotanicalExtractChangsha410331’China2·HunanPhytowayInc·，
Changsha410331，China3．HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Changsha410007，China)
Keywords：TrifoliumpratenseL．；isoflavones；harvestperiod；preprocess
红车轴草TrifoliumpratenseL．为豆科多年生
草本植物，又名红三叶、红花苜蓿、红菽草、三叶草，
原产小亚细亚和西南欧，现在全球均有栽培，在我国
东北、华北、华东地区有栽培或野生，是优良的豆科
牧草。红车轴草中含有黄酮类、异黄酮类、香豆素类、
皂苷类、蛋白质、糖类和维生素等成分[1]。其中异黄
酮类化合物具有植物雌激素样作用和抗癌作用[2]。
红车轴草主要含有芒柄花素、鹰嘴豆芽素A、大豆黄
素、染料木素4种异黄酮化合物[3]。因此本实验以芒
柄花素和鹰嘴豆芽素A为指标，考察了红车轴草不
同采收时间、不同产地及不同部位和不同干燥处理
方式的异黄酮量的变化，为红车轴草提取物的工业
化生产提供原药材选择依据和参考，有助于红车轴
草的质量控制和合理开发利用。
1仪器与材料
岛津高效液相色谱仪，包括SPD--10A紫外一可
见检测器，LC～10AT双泵，N2000色谱工作站。
95％乙醇、磷酸(分析纯)，乙腈(色谱纯)，重蒸
水。芒柄花素对照品(自制)，鹰嘴豆芽素A对照品(批
号111708—200501)购自中国药品生物制品检定所。
红车轴草为采于湖北建始、湖北恩施、甘肃岷
县、湖南测阳青苗期、花蕾期、初花期、盛花期和结籽
期的药材。经湖南九汇现代中药有限公司曾建国教
授鉴定为红车轴草TrifoliumpratenseL．。
2方法与结果
2．1异黄酮的HPLC法测定、
2．1．1色谱条件：伊利特HypersilBDSC18柱(250
mm×4．6mm，10弘m)流动相：乙腈一0．1％磷酸水
溶液梯度洗脱；柱温：25oC；体积流量：0．8mL／
rain；进样量：5pL。色谱图见图1。
2．1．2对照品溶液的制备：精密称取60℃干燥至
恒重的芒柄花素和鹰嘴豆芽素A对照品适量，加甲
醇分别制成含芒柄花素0．120mg／mL、鹰嘴豆芽素
A0．106mg／mL的溶液，作为对照品贮备液，4℃
冰箱放置。分别精密吸取上述贮备液4．0、3．0mL
置同一10mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，即得混合
对照品溶液(含芒柄花素48／-g／mL，鹰嘴豆芽素A
31．8pg／mL)。
2．1．3鲜活药材供试品溶液的制备：取鲜活药材
50g切段，立即用95％乙醇200mL匀浆，4h内完
收稿日期：2007—05—10
作者简介：刘晗(1982一)，女，湖南双峰人，湖南中医药大学2005级硕士，主要从事中药活性成分研究。
*通讯作者曾建国Tel：(0731)4686478E—mail；ginkgo@phytoway．corn
万方数据
·1822· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
o 5 lO 15 20 25 30
1
o 5 10 15 20 25 30
t／rain
1一芒柄花素 2一鹰嘴豆芽素A
1-formononetine2-biochaninA
图1 混合对照品(A)和红车轴草(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfmixedreference
substances(A)andT．pratense(B)
成，回流提取1h，滤过，残渣用95％乙醇洗涤，合并
滤液，以95％乙醇定容至250mL，摇匀，经0．45tim
滤膜滤过，取续滤液即得。 ‘
2．1．4干药材供试品溶液的制备：取干样在烘箱中
于90～105℃烘烤1h后粉碎，称取5g左右药材粗
粉，加85％乙醇50mL加热回流提取1h，滤过，残渣
用85％乙醇洗涤，合并滤液，以85％乙醇定容至100
mL，摇匀，经0．45,um滤膜滤过，取续滤液即得。
2．1．5线性范围考察：精密吸取混合对照品溶液
8、6、4、2、1mL分别加甲醇定容至10mL，稀释成不
同质量浓度的对照品溶液，进样测定。以峰面积为纵
坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方
程。芒柄花素：Y一417．1X+30387671．7，，-=
0．999，线性范围0．012～0．096mg／mL；鹰嘴豆芽
素A：y一45529．5X+39263647．4，，J一0．9999，
线性范围：0．0106--0．0848mg／mL。
2．1．6样品的测定：将不同采收时问、不同产地及
栽培方式、不同干燥方式、不同部位的红车轴草制备
供试品溶液，进样10肛L测定，按外标法计算药材折
干后两种异黄酮总量占干物质的质量分数。
2．2药材中水分的测定：参照《中国药典》2005年
版一部附录IXH项下第一法(烘干法)测定供试品中
含水量。干燥品破碎成直径不超过3mm的碎片。鉴
于新鲜药材的各部位含水量差异较大，将方法改进
为：下午从田问取样，并限在4h内，快速切成长度
不超过0．5～1cm的小段立即检测；测定时取
200．00g，平铺于干燥至恒重的圆盘中，厚度不超过
20mm，在100～105℃干燥5h，将铝盘迅速移置干
燥器中，冷却30rain，精密称定质量，再干燥1h后
冷却，称定质量，至连续两次称量的差异不超1g为
止；根据减失的质量，计算含水量。
2．3 不同加工状态方式下红车轴草中总异黄酮的
比较：将湖南浏阳种植的红车轴草在青苗期、花蕾
期、初花期、盛花期、结籽期的鲜采药材分别烘干(在
采样地将鲜采的样品切碎后于24h内于105℃快速
烘干)、晒干(太阳下直晒)、阴干(室内晾干)，制备供
试品溶液，测定。结果鲜活状态下的红车轴草中异黄
酮的总量最高，烘干处理的次之，阴干的总量最低，可
见干燥方式对异黄酮总量的影响较大。结果见表t。
表1湖南测阳产的红车轴草不同干燥方法下的异黄酮的
比较
Table1 ComparisonoftotallsoflavonesinT．pratense
glvwninLluyang，HunanProvi cedri d
bydifferentm thods
2．4不同产地、采收时期和栽培方式红车轴草中异
黄酮的比较：在现场鲜采样品后，切段，立即于烘箱
中90～105℃烘烤1h，得药材样品，制备供试品溶
液，测定，结果不同采收时期、种植产地和栽培方式
对红车轴草中异黄酮总量均有影响，见表2。可以看
出各地药材中异黄酮的量在个生长时期变化明显，
花期后生长过程中总量降低趋势明显，其中青苗期
的量最高，结籽期的量最低。不同种植基地和栽培方
式对红车轴草中异黄酮总量也有影响，其中湖北恩
施野生采区药材的量最高，由于气候原因，甘肃岷县
种植区的红车轴草中异黄酮总量比湖南浏阳、湖北
建始种植区的量稍高。
2．5最佳采收期的确定：结合红车轴草亩产量和单
位质量中异黄酮总量计算其各生长时期异黄酮的质
量分数，根据湖南浏阳种植基地不同采收期的每亩
药材中异黄酮的总量变化确定最佳采收期为花蕾
期，结果见图2。
2．6红车轴草不同部位中异黄酮总量的比较：取湖
北建始和湖南浏阳产盛花期红车轴草，鲜采时立即
快速烘干，分别测定花、茎、叶中的异黄酮总量，结果
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·18 3·
见表3。可见叶中的异黄酮总量最高，茎中的量次
之，花中的量最低。
表2不同采收时期、产地和栽培方式红车轴草中
异黄酮的比较
Table2 ComparisonoftatoltsoflavonesinT．pratense
fromdifferentcollectiontimes，hahitats，
andcultivation
r
‘童
妻
删
址
匿
瓤
斌
图2异黄酮的亩产量与采收期的关系
Fig．2Relationshipbetweenisoflavoneyield
permuandcollectiont me
表3红车轴草不同部位中异黄酮总■的比较
Table3 Comparisonoftotalisoflavones
indifferentparofT．pratense
不同部位
异黄酮／％
湖北建始 湖南测阳
3讨论
红车轴草中含有芒柄花素、鹰嘴豆芽素A、大豆
黄素、染料木素4种主要异黄酮，但大豆黄素和染料
木素在原药材中的量较低，芒柄花素和鹰嘴豆芽素
A的量之和能相对准确地反映红车轴草中总异黄
酮量的高低，因此本实验选其为衡量指标。
实验选择了不同体积分数乙醇为提取溶剂，考
察了热回流、超声提取，结果85％乙醇回流提取较
完全，且考虑到鲜药材与干药材含水量的差别，因此
实验采用95％乙醇回流提取鲜药材，85％乙醇提取
干药材。
不同种植产地及栽培方式的红车轴草药材中异
黄酮的量不同，进一步实验探讨红车轴草药材的适
宜生长环境和栽培方式，结果红车轴革在青苗期时
总异黄酮的量最高，但青苗期的药材亩产量太少；综
合考虑药材亩产量和目标代谢产物在不同生长期的
比例和产品工艺对原药材料量的要求，认为红车轴
草最适宜采收期为花蕾期至初花期，并非有效成分
质量分数最高的花前期青苗。在药材的各部位中，以
叶中的量最高，茎中的量次之，花中的量最低，将原
药材用于提取物生产时，可考虑到分类提取，使能
源、溶剂、资源获最佳状态利用。
中药标准化提取物是现代中药的一种产品形
式，由于我国的提取物产业目前发展非常迅速，因此
应对中药提取物的产业化生产整个过程包括中药材
的种植、提取工艺进行控制[4]。实验结果表明，红车
轴草新鲜药材中的异黄酮的量最高，深入研究其提
取工艺，可以最大限度地保持有效成分，较大幅度提
高目标成分的提取率，从而较大幅度降低生产成本，
对于实现红车轴草提取物的工业化大生产有极大的
现实意义。同时提醒我们探讨中药炮制的新方法。
．|『．．鲜药材：烘干、晒干、阴干几种不同状态方式导
致药材中目标代谢产物的巨大差异(酶及微生物影
响>值得进一步研究，提示可为中药炮制行业提供方
法乃至理论研究的参考。
致谢：湖南九汇现代中药有限公司研发部、质管
部、物资部同仁的帮助。
References：
[1]JiangsuNewMedicalCo lege．DictionaryofChi ese拟j抛，如
Medica(中药大辞典)EMJ．Shanghai：ShanghaiScientific
andTechIlicalP晶lishers，1992．
[2]_ZhengJ，LiuYP，ZongYL甜a1．EffectofTrifolium
PratenseL．extractonapoptosmofBGC一823Cells[J]．Life
SciRes(生命科学研究)，2006，10(2)：178-181．
[33MaQ，Zhou’YX，LeiHM，eta1．Determinationof
daidzein，genistein，formononetinandbiochaninAinTrifoli一
“mpratenseL．byHPLC[J3．ChinTrad tPatMed(中成
药)，2005，27(10)：1193—1195．
E4]ZengJG．Developmentwithquestionandsuggestionsfor
medicinalpl ntextractindustryinChinaI-J]．ChinTradit
日erbDrugs(中草药)，2006，37(1)：2-12．
万方数据
红车轴草的最佳采收期和前处理加工方法研究
作者： 刘晗， 罗琪， 欧阳勇， 杜方麓， 曾建国， LIU Han， LUO Qi， OUYANG Yong， DU
Fang-lu， ZENG Jian-guo
作者单位： 刘晗,杜方麓,LIU Han,DU Fang-lu(湖南省中药提取工程研究中心,湖南,长沙,410331;湖南
中医药大学,湖南,长沙,410007)， 罗琪,欧阳勇,LUO Qi,OUYANG Yong(湖南九汇现代中药有
限公司,湖南,长沙,410331)， 曾建国,ZENG Jian-guo(湖南省中药提取工程研究中心,湖南
,长沙,410331;湖南九汇现代中药有限公司,湖南,长沙,410331)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(12)
被引用次数： 3次

参考文献(4条)
1.Jiangsu New Medical College 中药大辞典 1992
2.Zheng J;Liu Y P;Zong Y L Effect of Trifolium pratense L.extract on apoptosis of BGC-823 Cells[期刊
论文]-生命科学研究 2006(02)
3.Ma Q;Zhou Y X;Lei H M Determination of daidzein,genistein,formononetin and biochanin A in
Trifolium pratense L.by HPLC[期刊论文]-中成药 2005(10)
4.Zeng J G Development with question and suggestions for medicinal plant extract industry in China
[期刊论文]-中草药 2006(01)

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2.曾建国 基于鲜药材的中药现代炮制技术[期刊论文]-中草药 2009(1)
3.连莲.刘晓艳 车轴草异黄酮提取技术的研究[期刊论文]-黑龙江中医药 2013(4)


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